根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)雄性不育基因(barnase)轉(zhuǎn)化苧麻研究.pdf

1、苧麻（Boehmeria nivea（L．）Gaud）是我國(guó)重要的韌皮纖維作物之一，栽培和加工歷史悠久，但苧麻的基因工程研究尚處在起步階段。本研究以苧麻品種（品系）“5041-3”、“華苧4號(hào)”、“華苧5號(hào)”為材料，系統(tǒng)研究了不同培養(yǎng)基對(duì)不同外植體再生的影響、選擇劑basra和卡那霉素（Km）對(duì)不同外植體再生的抑制效應(yīng)、不同因素對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響，并利用建立的遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了雄性不育基因（barnase）的轉(zhuǎn)化研究，為遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)在

2、苧麻上廣泛運(yùn)用提供研究基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　 （1）通過對(duì)MS、MSB（MS無機(jī)鹽成分附加B5有機(jī)成分）培養(yǎng)基與生長(zhǎng)素吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）的配比實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步確定了生長(zhǎng)素IAA適合子葉的再生，而NAA適合葉片的再生；MS和MSB培養(yǎng)基的選擇則需要視不同基因型而定。
　　 （2）確定了basta用作抗生素選擇劑抑制苧麻外植體再生的適宜選擇壓。0.5～0.7 mg/L的basta已經(jīng)能夠有效抑制苧麻外植

3、體的再生，具體濃度應(yīng)該參照外植體的生理狀態(tài)作適當(dāng)調(diào)整。
　　 （3）進(jìn)一步確定了選擇葉片作為轉(zhuǎn)化體，Km作為抗生素進(jìn)行選擇時(shí)的濃度最低應(yīng)達(dá)到25 mg/L，基因型與外植體的生理狀態(tài)都會(huì)對(duì)Km的適宜濃度有所影響。故選擇不同外植體作為轉(zhuǎn)化體前，對(duì)抗生素的適宜濃度進(jìn)行篩選，將會(huì)提高轉(zhuǎn)基因植株的陽性率。
　　 （4）利用GFP作為報(bào)告基因，對(duì)根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化苧麻葉片的三個(gè)參數(shù)優(yōu)化研究進(jìn)行了初探，結(jié)果表明共培養(yǎng)時(shí)間大于24 h、乙酰