CPPU對日本小果樹HASKAOP組織培養(yǎng)的影響及超低溫保存.pdf

1、日本北海道特產(chǎn)高營養(yǎng)小果樹HASKAOP原產(chǎn)于日本北海道，是一種營養(yǎng)非常豐富的野生果樹，具有極高的經(jīng)濟價值和藥用價值。為了成功保存北海道特產(chǎn)小果樹HASKAOP種質(zhì)資源，本試驗將近年來新發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞分裂素CPPU應(yīng)用于小果樹的組織培養(yǎng)中，探索其促進小果樹擴繁的最佳使用濃度，并用超低溫的方法保存種質(zhì)資源，以期為小果樹種質(zhì)資源的離體保存提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下： 1.為了探索CPPU在北海道特產(chǎn)小果樹HASKAOP組織培養(yǎng)中

2、的應(yīng)用效果，就CPPU單獨使用及其與6—BA組合后對小果樹節(jié)間不定芽的分化誘導(dǎo)效果進行了試驗。結(jié)果表明：單獨添加CPPU的最佳誘導(dǎo)濃度為0.2 mg/L，6—BA0.5mg/L和CPPU0.5 mg/L配比組合是北海道特產(chǎn)小果樹HASKAOP節(jié)間分化不定芽的最佳組合，并且CPPU的作用強于6—BA。 2.建立了小果樹節(jié)間玻璃化法超低溫保存體系。其保存方法為：0.5～0.7cm的節(jié)間，在含有0.7mol/L蔗糖的培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)2d

3、，然后剝?nèi)?.5～3.5mm的節(jié)間，先在室溫下用60％ PVS2溶液預(yù)處理20～30min，再用100％ PVS2溶液于0℃下處理60min，換一次PVS2溶液后迅速投入液氮。24h后取出，在37℃～40℃水浴中化凍2min，用1—2mol/L的蔗糖培養(yǎng)液洗滌2次，每次10min，然后轉(zhuǎn)入1/2 MS+6—BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA0.3mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L恢復(fù)培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)1周后轉(zhuǎn)移到正常光下，