斑節(jié)對(duì)蝦抗WSSV家系篩選.pdf

1、自1993年對(duì)蝦白斑綜合征病毒(White Spot Syndrom Virus，WSSV)爆發(fā)以來,我國對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)曾遭受重創(chuàng),但隨著 WSSV流行病學(xué)和控制技術(shù)的研究、養(yǎng)殖技術(shù)和模式的改進(jìn),我國對(duì)蝦養(yǎng)殖的產(chǎn)量和規(guī)模逐漸得到恢復(fù)和發(fā)展,目前對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量每年可達(dá)到130多萬 t以上,但目前 WSSV仍嚴(yán)重威脅著我國對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。培育在一定程度上抗 WSSV的對(duì)蝦新品種是解決我國對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)目前困境的有效途徑之一。
　　WSSV宿主

2、極其廣泛,對(duì)蝦在養(yǎng)殖過程中普遍存在 WSSV潛伏感染,攜帶少量病毒的對(duì)蝦可以在良好的環(huán)境下繼續(xù)生存而不暴發(fā)白斑綜合征。由于此前在斑節(jié)對(duì)蝦抗 WSSV家系篩選時(shí)僅僅從定性的角度分析了對(duì)蝦的死亡規(guī)律,而沒有從定量的角度來選定合適的篩選濃度以及分析對(duì)蝦肌肉內(nèi)病毒含量的變化。本研究利用3種濃度 WSSV粗提液(3×103、6×102、2×102 copies/mL)和PBS液注射感染病毒攜帶量約1×105 copies/g的斑節(jié)對(duì)蝦,研究了斑節(jié)

3、對(duì)蝦的死亡規(guī)律、肌肉內(nèi)病毒含量的變化、總血淋巴細(xì)胞數(shù)及不同血淋巴細(xì)胞的比例變化、5種免疫酶(ACP、AKP、PO、POD、SOD)活性的變化,建立了斑節(jié)對(duì)蝦抗 WSSV家系篩選的方法,并初步應(yīng)用于37個(gè)斑節(jié)對(duì)蝦家系的抗病篩選,選出了5個(gè)生長(zhǎng)速度、抗病能力相對(duì)較強(qiáng)的家系。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　1.3種濃度 WSSV感染下,斑節(jié)對(duì)蝦累積死亡率分別為(93.33±2.89)％、(56.67±5.77)%和(45.00±5.

4、00)%,對(duì)蝦肌肉內(nèi)病毒含量均在48 h達(dá)到最大值,瀕死對(duì)蝦肌肉內(nèi)病毒含量均達(dá)到1010 copies/g數(shù)量級(jí)。從對(duì)蝦死亡規(guī)律及體內(nèi)病毒含量來看,實(shí)驗(yàn)所用對(duì)蝦 WSSV毒力較先前報(bào)道沒有變化;極少量的WSSV引起了潛伏感染 WSSV的對(duì)蝦暴發(fā)性死亡。對(duì)照組沒有出現(xiàn)死亡,表明潛伏感染W(wǎng)SSV的對(duì)蝦在沒有外來病原刺激的情況下未發(fā)病死亡。
　　2.3種濃度 WSSV感染下,除個(gè)別時(shí)間點(diǎn)外,對(duì)蝦總血淋巴細(xì)胞數(shù)的變化規(guī)律與肌肉中 WSSV

5、的擴(kuò)增規(guī)律成負(fù)相關(guān);半顆粒細(xì)胞所占比例最大,且初期呈現(xiàn)顯著上升的趨勢(shì),后期比例雖有起伏但均維持在較高水平;顆粒細(xì)胞與透明細(xì)胞比例初期均顯著下降,后期顆粒細(xì)胞比例顯著低于初期,而透明細(xì)胞比例則與初期無顯著性差異。
　　3.3種濃度 WSSV感染下,ACP、AKP、SOD活性總體呈現(xiàn)先上升后下降隨后上升的趨勢(shì),其中 SOD活性后期顯著高于初期水平;PO、POD活性總體呈現(xiàn)先下降后上升隨后下降、最后上升的趨勢(shì),但PO后期活性水平與初期相

6、當(dāng),而POD后期活性水平顯著高于初期。各免疫相關(guān)酶的反應(yīng)強(qiáng)度與 WSSV的感染濃度存在一定關(guān)系,除 ACP外其余4種酶的活性變化均以6×102 copies/mL濃度組最為敏感。PBS組5種免疫酶活性變化幅度均顯著小于3種 WSSV濃度感染組。
　　4.采用25 copies/g對(duì)蝦體重的WSSV注射液感染37個(gè)斑節(jié)對(duì)蝦家系,除兩個(gè)家系成活率在50%左右外,有17個(gè)家系成活率接近100%,另有18個(gè)家系成活率幾乎為0;根據(jù)抗病評(píng)價(jià)