利用水稻啟動子捕獲系篩選水稻胚發(fā)育相關基因的初步研究.pdf

1、福建師范大學碩士學位論文利用水稻啟動子捕獲系篩選水稻胚發(fā)育相關基因的初步研究姓名：李素一申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：王鋒20090601中文文摘中文文摘水稻是世界上最重要的糧食作物，全球半數(shù)以上人口以此為主糧。作為單子葉植物分子生物學研究的模式植物，水稻的基因組小，與其他禾本科作物相比具有廣泛的共線性，因此對水稻的分子生物學的研究不僅能為培育優(yōu)質高產(chǎn)的水稻提供理論依據(jù)，也可以為其他禾本科作物如小麥、玉米等的基因

2、組研究提供借鑒。隨著水稻全基因組測序工作的完成，分離和研究水稻基因功能成為水稻功能基因組學研究的一項迫切而重要的任務?；虿东@是一種利用反向遺傳學原理來研究植物基因功能的有效方法，近年來已被廣泛應用于各種植物的基因分離，包括三種基本類型：增強子捕獲、啟動子捕獲和基因捕獲。福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)遺傳工程重點實驗室以秈稻為轉化受體，構建啟動子捕獲及T ．D N A 插入的雙元載體，轉化獲得了大量啟動子捕獲及T ．D N A 插入突變體。本研究

3、通過對該T - D N A 插入突變體庫中2 6 5 3 個啟動子捕獲系中的報告基因t 3 ．葡萄糖苷酸酶( p ．g l u c u r o n i d a s e ，g u s ) 表達活性檢測，篩選到6 1 個水稻啟動子捕獲系( 包括水稻的不同組織器官根、莖、葉、花、穎殼、胚和胚乳) ，其中胚中有G U S 活性表達的有6 個。W 9 1 5 4 是一個胚傾向性表達的水稻啟動子捕獲系，同時在莖中也有部分表達。我們以W 9 1 5

4、4 這個水稻啟動子捕獲系為材料進行了進一步的研究。具體研究內(nèi)容和結果如下：一、水稻胚特異表達啟動子捕獲系的篩選( 1 ) 對移栽的2 8 7 2 個T o 代水稻啟動子捕獲系進行了潮霉素抗性篩選，確定為陽性轉基因水稻株系為2 6 5 3 個，陽性率達到9 2 ．4 ％。( 2 ) 從T - D N A 插入突變體庫中篩選到6 1 個G U S 活性表達啟動子捕獲系，其中胚中有G U S 活性表達的有6 個。二、水稻胚傾向表達啟動子捕獲系

5、W 9 1 5 4 的獲得及其初步分析( 1 ) W 9 1 5 4 抗性基因分離比分析和S o u t h e r n 雜交表明：W 9 1 5 4 為單T - D N A 插入啟動子捕獲系。( 2 ) 利用T A I L ．P C R 擴增獲得W 9 1 5 4 的側翼序列，其側翼序列B L A S T 分析發(fā)現(xiàn)，T o D N A 插入在的一個未知蛋白基因( B A F l 3 6 1 6 ．1 ) 的第2 個內(nèi)含子內(nèi)，該未知蛋白