動(dòng)物源性食品中胺苯醇類獸藥殘留檢測(cè)方法研究.pdf

1、胺苯醇類藥物(Amphemicols)是一類廣譜抗生素，包括氯霉素(Chloramphenicol，CAP)及其代表性衍生物，如甲砜霉素(Thiamphnicol，TAP)和氟苯尼考(Florfenicol，F(xiàn)F)等。它們對(duì)革蘭氏陰、陽性細(xì)菌均有抑制作用，尤其對(duì)前者作用較強(qiáng)。在養(yǎng)殖業(yè)日趨規(guī)?；图s化的今天，胺苯醇類藥物己被廣泛用于動(dòng)物源性食品的生產(chǎn)中。但是，胺苯醇類藥物的使用對(duì)人體健康帶來了潛在的危害。氯霉素對(duì)人類骨髓的造血機(jī)能有抑制

2、作用，可引發(fā)再生障礙性貧血，已被許多國(guó)家和地區(qū)列為禁用藥物。歐盟規(guī)定水產(chǎn)品中氯霉素不得檢出，美國(guó)規(guī)定水產(chǎn)品中的最大殘留限量(MRL)為0.3μg/kg。甲砜霉素和氟苯尼考是氯霉素的替代產(chǎn)品，氟苯尼考胺(Florfenicol amine，F(xiàn)FA)是氟苯尼考在動(dòng)物組織中的主要代謝產(chǎn)物。近年來，我國(guó)的出口動(dòng)物源性食品被頻頻檢出氯霉素殘留，藥物殘留已經(jīng)成為食品對(duì)外貿(mào)易的主要障礙。為保護(hù)人類健康，保障我國(guó)的正常出口貿(mào)易，控制獸藥在動(dòng)物源性食品中

3、的殘留已成為當(dāng)務(wù)之急，而建立靈敏、可靠的殘留檢測(cè)方法是其控制的基礎(chǔ)。 胺苯醇類藥物殘留的現(xiàn)有檢測(cè)方法有微生物法、免疫分析法、化學(xué)檢測(cè)法和其它方法等。其中微生物法易受樣品中其它抗生素殘留的影響，特異性和靈敏度均較低；免疫法易出現(xiàn)假陽性結(jié)果；色譜法的樣品前處理復(fù)雜；色譜．質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)靈敏度高，是重要的定性定量檢測(cè)方法。目前報(bào)道的胺苯醇類藥物殘留檢測(cè)大多對(duì)象單一，且未見檢測(cè)氟苯尼考胺的質(zhì)譜方法報(bào)道。而實(shí)際的動(dòng)物源性食品中常常是多種胺苯

4、醇類藥物同時(shí)存在，急需發(fā)展操作簡(jiǎn)便、靈敏度高的多殘留同時(shí)檢測(cè)技術(shù)。 本文基于胺苯醇類藥物的性質(zhì)，優(yōu)化了氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺等4種胺苯醇類藥物的提取和凈化條件，采用氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜—質(zhì)譜法(GC—MS)和液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法(LC—MS/MS)，建立了動(dòng)物源性食品中胺苯醇類藥物的同時(shí)檢測(cè)方法，取得了如下主要研究成果： 1．獲得了胺苯醇類藥物的最佳提取條件 以

5、豬肉和腸衣為實(shí)驗(yàn)材料，采用甲醇、乙腈、丙酮和乙酸乙酯等4種有機(jī)溶劑提取胺苯醇類藥物，比較了不同溶劑的提取效果，結(jié)果表明含2％氨水的堿化乙酸乙酯對(duì)4種藥物的提取效果較好，回收率在90％以上。 2．獲得了提取液的最佳凈化條件 研究發(fā)現(xiàn)液-液萃取和固相萃取均能取得良好的凈化效果。其中LC—MS/MS法靈敏度高，提取液經(jīng)液-液萃取后即可進(jìn)行分析：HPLC法、GC法和GC—MS法均需要對(duì)提取液進(jìn)行液-液萃取和固相萃取后才能進(jìn)樣分析

6、，否則會(huì)由于基質(zhì)的影響而干擾測(cè)定。MCX柱、C18柱和HR—X柱對(duì)胺苯醇類藥物有較好的保留效果，只有MCX柱對(duì)4種藥物都有很好的保留效果，且回收率均在95％以上。 3．優(yōu)化了樣品的衍生化條件 在用GC法和GC—MS法檢測(cè)胺苯醇類藥物時(shí)，必須對(duì)樣品進(jìn)行衍生化處理，生成熱穩(wěn)定性強(qiáng)和易揮發(fā)的衍生物。結(jié)果表明，衍生化溫度在50-70℃、衍生化時(shí)間在40min左右時(shí)，上述兩種方法能很好地檢測(cè)4種藥物。研究發(fā)現(xiàn)衍生化后吹干衍生化試劑

7、，造成回收率略微偏低，操作不易控制。通過加入甲苯定容，再用NaOH溶液滅活衍生化試劑，取上層有機(jī)相進(jìn)行檢測(cè)加以解決。 4．建立了胺苯醇類藥物多殘留的同時(shí)檢測(cè)方法 采用HPLC法(紫外檢測(cè)器檢測(cè))，可同時(shí)檢測(cè)肉類和腸衣中的氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留，獲得的檢測(cè)低限均為100μg/kg；采用LC—MS/MS法，可同時(shí)檢測(cè)肉類和腸衣中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留，獲得的檢測(cè)低限分別為0.1μg/kg、0.1μg/

8、kg、0.1μg/kg和8.0μg/kg；采用GC法(電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè))，可同時(shí)檢測(cè)肉類和腸衣中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留，豬肉中4種藥物的檢測(cè)低限分別為0.1μg/kg、2.0μg/kg、2.0μg/kg和2.0μg/kg，腸衣中4種藥物的檢測(cè)低限分別為0.2μg/kg、4.0μg/kg、4.0μg/kg和4.0μg/kg；采用GC—MS法，可同時(shí)檢測(cè)肉類和腸衣中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留，豬肉中