藍狐僵化病病因的遺傳分析.pdf

1、藍狐（Alopex lagopus）是國內(nèi)家養(yǎng)數(shù)量最多狐貍品種，由于其毛皮顏色變異較多，毛皮質(zhì)量上乘，是具有重要經(jīng)濟價值的毛皮動物。然而藍狐僵化病的出現(xiàn)給養(yǎng)殖業(yè)帶來了極大的損失，進而影響了整個藍狐養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟效益。近年來，我國許多研究所及高校對該病進行了多方面的研究，然而該病一直沒有找到特異性防治及治療的措施。
　　本論文(1)以大興安嶺地區(qū)圖強林業(yè)局藍狐養(yǎng)殖基地的40只健康藍狐和60只患僵化病藍狐為實驗對象，采用隨機擴增微衛(wèi)星

2、多態(tài)性(random amplified microsatellitepolymorphism，RAMP)進行遺傳多樣性檢測。(2)以哈爾濱巴彥華強皮草有限公司飼養(yǎng)場的30只健康藍狐和30只患有僵化病藍狐為實驗對象，運用尾分析法尋找與僵化病有關的差異標記，進而分析發(fā)病的遺傳原因，為今后的實際生產(chǎn)提供理論依據(jù)。本論文主要的研究結(jié)果如下:
　　(1)在RAMP標記檢測中，22個引物組合能夠擴增出清晰并具有多態(tài)性的條帶。在對照組的40只

3、健康藍狐個體中，總共產(chǎn)生194條帶，其中多態(tài)性條帶有134條，占總條帶數(shù)的69.07％，每個引物擴增出4～8條多態(tài)性帶，平均為6.09條。在實驗組的60只患僵化病藍狐個體中，共產(chǎn)生154條帶，其中多態(tài)性條帶有53條，占總條帶數(shù)的34.42％，每個引物擴增出1～4條多態(tài)性帶，平均為2.41條。對比兩組的多態(tài)性比率、遺傳距離指數(shù)及聚類分析的結(jié)果表明健康藍狐種群內(nèi)遺傳多樣性較高，遺傳變異豐富，而患僵化病藍狐種群內(nèi)遺傳多樣性相對較低，遺傳分化程

4、度不高，遺傳變異較低，即藍狐人工授精導致的近親繁殖所致。
　　(2)尾分析法對藍狐僵化病相關的特異片段進行遺傳分析。用120條隨機引物分別對兩組DNA池進行RAPD擴增檢測，初步篩選出12條產(chǎn)生清晰、穩(wěn)定擴增產(chǎn)物的引物，在兩組以相同條件又進行3次重復擴增。結(jié)果顯示，有4條引物穩(wěn)定擴增出能將健康藍狐和患僵化病藍狐區(qū)分開的差異條帶，分別是引物A7、A11、A19及E10。
　　(3)對引物A7的1號條帶（特異片段）進行克隆測序，

5、所測得的序列長度為1851bp，通過NCBI中的Blast序列比較分析，該序列與家犬XX-7d6全序列同源性達96％。
　　(4)對引物A11的1號、3號條帶進行克隆測序，1號條帶的基因序列長度為1847bp，通過NCBI中的Blast序列比較分析，該序列與豬DNA序列ch242-423 m21X號染色體的同源性達82％;而3號條帶所測得的基因序列的長度為956 bp，通過NCBI中的Blast序列比較分析，沒有找到同源性，推測序

6、列可能是僵化病藍狐基因組中的變異序列。
　　(5)對引物A19的1號、5號條帶進行克隆測序，1號條帶和5條號帶的基因序列的長度分別為2442bp和467bp，通過NCBI中的Blast序列比較分析，都沒有找到同源性，推測序列可能是僵化病藍狐基因組中的變異序列。
　　(6)對引物E10的1號、4號條帶進行克隆測序，1號條帶的基因序列的長度為2854bp，通過NCBI中的Blast序列比較分析，該序列與家犬DNA序列XX-266

7、c17的同源性達97％;與家犬34號染色體上的XX-67L19完整序列同源性達97％;與家犬X染色體上的XX-272C1同源性達95％;與狗的DNA序列rp81-70i6同源性達95％;而4號條帶的基因序列的長度為954bp，通過NCBI中的Blast序列比較分析，沒有找到同源性，推測序列可能是僵化病藍狐基因組中的變異序列。
　　(7)找到的差異標記對大興安嶺地區(qū)的健康藍狐和患病藍狐進行的檢測及驗證，計算出差異標記在群體的檢出率分