淺談熒光原位雜交技術(shù)（fish）在診斷精子多倍體中的應(yīng)用研究進(jìn)展

1、<p>　　淺談熒光原位雜交技術(shù)（FISH）在診斷精子多倍體中的應(yīng)用研究進(jìn)展</p><p>　　摘要：近年來，由于FISH 技術(shù)具有安全、快速及靈敏度高的特點(diǎn)，在診斷精子多倍體中得到了廣泛應(yīng)用，本文主要對熒光原位雜交技術(shù)（FISH）在診斷精子多倍體中的應(yīng)用研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。 </p><p>　　關(guān)鍵詞：FISH技術(shù) 精子 多倍體 </p><p>　　

2、1、 熒光原位雜交（FISH）技術(shù)的概念及原理 </p><p>　　熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）是在20世紀(jì)80年代末在放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性分子細(xì)胞遺傳技術(shù)，以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法，F(xiàn)ISH的基本原理是將DNA（或RNA）探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記，然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維

3、切片上，再用與熒光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針分子特異性結(jié)合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優(yōu)點(diǎn)，不但能顯示中期分裂相，還能顯示于間期核。 </p><p>　　2、 異種體外受精技術(shù)的限制 </p><p>　　精子染色體檢測方法主要有異種體外受精技術(shù)（人精子?倉鼠卵融合技術(shù)）制備

4、人精子染色體和精子FISH分析[1，2]。1978年Rudak[3]等采用異種體外授精技術(shù)首次制備出人精子染色體標(biāo)本，此方法可以直接觀察到精子全部染色體組成，精確分析染色體結(jié)構(gòu)、數(shù)目。但是由于這一技術(shù)需要模擬體內(nèi)精卵結(jié)合，以及需要保證體外精子獲能的條件和倉鼠的超排卵數(shù)等，技術(shù)難度大、實驗條件要求高，制片成功率低，因此限制了此技術(shù)的廣泛應(yīng)用。 </p><p>　　3、 FISH技術(shù)檢測非整倍體的優(yōu)點(diǎn) </p

5、><p>　　非整倍體是導(dǎo)致人類胚胎丟失和染色體疾病的主要原因之一，而非整倍體的產(chǎn)生是由于生殖細(xì)胞減數(shù)分裂過程中的染色體不分離造成的，因此，闡明非整倍體產(chǎn)生的機(jī)制具有重要的意義。目前，國內(nèi)外大部分的研究者都通過收集一定數(shù)量質(zhì)量異常與正常的精液標(biāo)本，通過應(yīng)用XY性染色體重復(fù)序列探針，對處理后的精子細(xì)胞進(jìn)行熒光原位雜交分析，探討FISH技術(shù)在診斷精子多倍體中的應(yīng)用，從而建立各自實驗室精子FISH分析的技術(shù)平臺，這種方法有

6、助于患者的遺傳咨詢、PGD異常胚胎的風(fēng)險預(yù)測及攜帶者有無PGD必要性的評估。同時可以將本技術(shù)向其他部門進(jìn)行推廣。 </p><p>　　4、 FISH技術(shù)研究精子非整體的進(jìn)展 </p><p>　　隨著熒光原位雜交技術(shù)的發(fā)展，近年來國內(nèi)外許多學(xué)者運(yùn)用FISH技術(shù)對精子非整體進(jìn)行研究。在國外，Burrello[4]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)精子非整倍體升高的ICSI患者與精子非整倍體率正常的ICSI患者比

7、較其妊娠率低、流產(chǎn)率高。Rubio[5]等認(rèn)為ICSI后自然流產(chǎn)和反復(fù)種植失敗者是精子染色體異常的高危人群，這類男性患者精子性染色體二倍體率較正常對照組明顯升高。在國內(nèi)，呂靜等[6]應(yīng)用X、Y、18號染色體探針對16例弱精子癥患者和8例健康男性進(jìn)行三色熒光原位雜交，分析精子染色體非整倍體。王喜良等[7]三色熒光原位方法檢瀏精子非整倍體，發(fā)現(xiàn)同正常精液患者相比，嚴(yán)重少精子癥患者有顯著高的X， Y， 18非整倍體精子。張云山[8]、李練兵等

8、[9]的研究結(jié)果也與上述結(jié)論類似。 </p><p>　　同時，越來越多的研究者建立了各自實驗室精子FISH技術(shù)流程。如馬春杰[10]比較普通光學(xué)顯微鏡和倒置相差顯微鏡觀察D1T處理精子核膨脹度的效果，發(fā)現(xiàn)倒置相差顯微鏡能較好地用來觀察精子頭的膨脹度，鏡下精子頭膨脹體積的掌控比較容易，從而建立一種高效的原位雜交前人精子核的解聚方法和檢測手段。劉浩[11]建立快速穩(wěn)定的人精子核雙色熒光原位雜交的實驗方法，用于人性染

9、色體非整倍體率的分析研究。 </p><p><b>　　5、 小結(jié) </b></p><p>　　非整倍體是導(dǎo)致人類胚胎丟失和染色體疾病的主要原因之一，而非整倍體的產(chǎn)生是由于生殖細(xì)胞減數(shù)分裂過程中的染色體不分離造成的，F(xiàn)ISH技術(shù)用于研究精子染色體結(jié)構(gòu)，方法簡單，快速、安全、直觀、高靈敏度、高特異性，可快速簡便地檢測精子間期細(xì)胞核，1次可以檢測成千上萬個精子的染色體

10、，為準(zhǔn)確分析染色體結(jié)構(gòu)異?；颊叩臏p數(shù)分裂規(guī)律，提供了大樣本研究的途徑。 </p><p><b>　　參考文獻(xiàn)： </b></p><p>　　[1] Scriven PN，Handyside AH，Ogilvie CM.Chromosome transloeations：segregation modes and strategies for Preimplanta

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17、.一種高效的人精子核原位雜交前處理技術(shù)[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志.2009，17（5）：52―55。 </p><p>　　[11] 劉浩，張昌軍，王 華，羅清炳，劉海湘.一種快速穩(wěn)定的人精子核雙色熒光原位雜交技術(shù)的建立[J].武漢大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2005.26（2）：207--210。 </p><p><b>　　作者簡介： </b></p>&