企鵝珍珠貝Creb基因克隆分析及黑色素合成抑制劑和增強(qiáng)劑對(duì)幼貝生長性狀影響的研究.pdf

1、企鵝珍珠貝是培育優(yōu)質(zhì)海水珍珠的大型育珠母貝，外殼一致的黑色，其黑色素的表達(dá)水平可影響珍珠質(zhì)的色澤，進(jìn)而影響珍珠質(zhì)量。本研究首次半定量分析了黑色素合成相關(guān)基因Tyr，Creb，Cdk2，Pax3，Sox10，Bcl-2在企鵝珍珠貝各組織中的表達(dá)，克隆了企鵝珍珠貝Creb基因cDNA序列全長，初步研究了黑色素合成的增強(qiáng)劑和抑制劑對(duì)企鵝珍珠貝生長性狀的影響，結(jié)果如下:
　　1、采用半定量分析技術(shù)初步研究了黑色素合成通路中的調(diào)控基因Tyr

2、，Creb，Cdk2，Pax3，Sox10，Bcl-2在企鵝珍珠貝外套膜、鰓、閉殼肌、消化盲囊、足、精巢、卵巢7個(gè)組織中的表達(dá)。半定量結(jié)果顯示:Tyr基因在外套膜和精巢中表達(dá)量最高，鰓、閉殼肌卵巢中也有表達(dá)，初步判定Tyr基因與珍珠層成色有關(guān)。Bcl-2在外套膜、閉殼肌、和精巢中高表達(dá)，消化盲囊和卵巢中沒有表達(dá)。Creb在各個(gè)組織中均有表達(dá)，但有差異，在消化盲囊、足、精巢和卵巢中表達(dá)量較高。Cdk2在消化盲囊和精巢中表達(dá)量較高，其他5個(gè)

3、組織中表達(dá)較低。Pax3只在足組織中表達(dá)，Sox10在鰓和消化盲囊中表達(dá)量較高，精巢和卵巢中有少量表達(dá)。
　　2、采用RACE-PCR技術(shù)首次從企鵝珍珠貝中克隆了Creb基因的全長cDNA序列:基因的cDNA全長為1484bp，開放閱讀框長為1071bp，編碼356個(gè)氨基酸。該基因的氨基酸序列中有一個(gè)bZIP結(jié)構(gòu)域位于278～341氨基酸殘基處，存在4個(gè)蛋白結(jié)合位點(diǎn)，分別在1，253～254，273，356氨基酸殘基處，1個(gè)多聚核

4、苷酸結(jié)合位點(diǎn)，位于296氨基酸處。企鵝珍珠貝的Creb與太平洋牡蠣（Crassostrea gigas）、近江牡蠣（Crassostrea ariakensis）、歐洲牡蠣（Ostrea edulis）氨基酸序列的同源性分別為46％、45％、46％;與其它軟體動(dòng)物如靜水椎實(shí)螺（Lymnaea stagnalis）、海兔(Aplysiacalifornica)光滑雙臍螺（Biomphalaria glabrata）的同源性分別是50％、3

5、3％、30％。
　　3、不同濃度的黑色素合成抑制劑熊果苷和增強(qiáng)劑丙戊酸分別處理1月齡的企鵝珍珠貝幼貝，處理不同時(shí)間后，在實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖，觀察其殼色的變化，同時(shí)分析處理方式對(duì)企鵝珍珠貝的殼長(SL)、殼高(SH)、殼寬(SW)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):不同濃度和不同處理時(shí)間的熊果苷處理組的幼貝殼長、殼高、殼寬三個(gè)指標(biāo)增長顯著高于對(duì)照組，丙戊酸處理組略高于對(duì)照組;處理組和對(duì)照組幼貝前90天和前150天SL、SH、SW增長較快，但在養(yǎng)殖5個(gè)月后即1