秦艽不同配伍藥對(duì)對(duì)風(fēng)濕熱痹RA模型大鼠作用的性-效關(guān)系研究.pdf

1、目的：以平性祛風(fēng)濕中藥秦艽為基本藥，分別配伍威靈仙、桑寄生、防己，組成平-溫相配（秦艽+威靈仙）、平-平相配（秦艽+桑寄生）、平-寒相配（秦艽+防己）的配伍關(guān)系，通過(guò)觀察秦艽不同配伍藥對(duì)對(duì)風(fēng)濕熱痹RA模型大鼠的作用，探討藥性與疾病、藥性與療效之間的關(guān)系，闡釋中藥藥性-病證-療效之間的關(guān)聯(lián)性。
　　方法：80只健康SD大鼠隨機(jī)分為空白組、Ⅱ型膠原組、病證模型組、陽(yáng)性藥組、單味秦艽組、秦艽威靈仙組（秦威組）、秦艽桑寄生組（秦桑組）和秦

2、艽防己組（秦防組）8組。采用Ⅱ型膠原誘導(dǎo)加“風(fēng)濕熱”環(huán)境因素刺激制備病證結(jié)合的風(fēng)濕熱痹 RA大鼠模型：實(shí)驗(yàn)第1d，除空白組外，其余各組大鼠取背部2點(diǎn)（背部脊柱兩側(cè)）、尾根部1點(diǎn)，剃毛，皮內(nèi)注射0.1mLCⅡ乳劑，共0.3mL；實(shí)驗(yàn)第12 d，于大鼠左后足跖皮內(nèi)注射0.1mL CⅡ乳劑進(jìn)行二次免疫，空白組在相同部位注射等量生理鹽水。從首次注射CⅡ乳劑的第2d起，除空白組和Ⅱ型膠原組外，其余各組均使用改造后的人工氣候箱進(jìn)行風(fēng)濕熱痹模型造模，

3、所用風(fēng)濕熱環(huán)境條件為：溫度36～38℃，風(fēng)速5m/s，相對(duì)濕度≧95％，實(shí)驗(yàn)中大鼠足跖沒(méi)入37℃熱水中，大鼠全身以37℃蒸汽熏蒸；每天一次，每次30min，連續(xù)18d。造模結(jié)束后各給藥組給予制備的對(duì)應(yīng)藥液灌胃，空白組、Ⅱ型膠原組、病證模型組給予等量生理鹽水，連續(xù)21d。
　　實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每天觀察大鼠的一般狀態(tài)并記錄；每3d測(cè)一次大鼠體質(zhì)量、足跖厚度，并計(jì)算足跖腫脹度；并定期對(duì)大鼠進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）評(píng)分。于實(shí)驗(yàn)18d、第28d、第

4、38d分別測(cè)定大鼠的痛閾值、冷痛耐受時(shí)間、壓力耐痛值、足跖溫度及肛溫。動(dòng)物處死后每組取2只左后肢踝關(guān)節(jié)，固定，脫鈣，石蠟包埋，HE染色，光鏡下觀察關(guān)節(jié)病理學(xué)變化。酶聯(lián)免疫法測(cè)定各組大鼠血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、前列腺素E2（PGE2）含量。免疫組化檢測(cè)大鼠踝關(guān)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶-3（MMP-3）、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1（TIMP-1）表達(dá)，并進(jìn)行半定量分析。
　　結(jié)果：
　　1.從體

5、質(zhì)量、足跖腫脹度及AI評(píng)分來(lái)看，與病證模型組比較，各給藥組足跖腫脹度均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），其中秦防組腫脹度降低最為明顯（P＜0.01），并且明顯低于秦桑組（P＜0.05）；秦防組、單味秦艽組及秦桑組 AI評(píng)分較病證模型組明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），其中秦防組AI評(píng)分最低，并且明顯低于陽(yáng)性藥組及秦威組（P＜0.05）。各組大鼠體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.從痛覺(jué)及溫度測(cè)試來(lái)看，與病證模型組比較，秦

6、艽配伍組（秦威組、秦桑組、秦防組）痛閾值明顯升高（P＜0.01）；各給藥組冷痛耐受時(shí)間均明顯縮短（P＜0.05或P＜0.01）、壓力耐痛值均明顯升高（P＜0.01），其中秦防組降低（升高）較為明顯，并且秦防組壓力耐痛值明顯高于陽(yáng)性藥組、單味秦艽組、秦桑組（P＜0.01）。單味秦艽組、秦防組、陽(yáng)性藥組足跖溫度明顯低于病證模型組、秦威組、秦桑組（P＜0.05或 P＜0.01）。各組間肛溫差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.HE染色結(jié)果顯示，Ⅱ

7、型膠原組及病證模型組出現(xiàn)較明顯的關(guān)節(jié)面破壞，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及肉芽組織增生，且病證模型組破壞更為嚴(yán)重，并伴有豐富的新生血管。各給藥組踝關(guān)節(jié)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肉芽組織增生及血管增生均減輕，瘢痕組織增多，其中秦防組改善較好，秦桑組改善較差。
　　4.血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，與病證模型組比較，秦防組大鼠血清TNF-α含量降低最為明顯（P＜0.01），陽(yáng)性藥組、秦桑組、秦威組次之（P＜0.05），并且秦防組含量明顯低于單味秦艽組（P＜0.05）；

8、秦防組IL-1β含量降低最為明顯（P＜0.01），其余給藥組次之（P＜0.05），并且秦防組IL-1β含量明顯低于陽(yáng)性藥組、單味秦艽組及秦桑組（P＜0.05或P＜0.01）；秦威組、秦防組及單味秦艽組血清PGE2含量降低明顯（P＜0.01），秦威組次之（P＜0.05），各給藥組之間PGE2含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.免疫組化顯示，與病證模型組比較，各給藥組MMP-3表達(dá)量均明顯下降（P＜0.01），其中秦防組下降最為明顯，優(yōu)于

9、其他給藥組（P＜0.01）；各給藥組TIMP-1蛋白表達(dá)量均有不同程度的升高，其中陽(yáng)性藥組、秦威組、秦防組升高較為明顯（P＜0.05或P＜0.01），并且秦防組、秦威組TIMP-1蛋白表達(dá)明顯高于陽(yáng)性藥組、單味秦艽組及秦桑組（P＜0.05或P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.本實(shí)驗(yàn)所建立的病證結(jié)合動(dòng)物模型—風(fēng)濕熱痹RA大鼠模型，病情嚴(yán)重，病程長(zhǎng)，模型效果優(yōu)于CIA模型，一定程度上模擬出人類風(fēng)濕熱痹“紅腫熱痛”、“纏綿難愈”

10、的特點(diǎn)。
　　2.秦艽不同配伍藥對(duì)對(duì)風(fēng)濕熱痹RA大鼠均具有一定的治療作用，其中平寒相配治療效果較為突出，體現(xiàn)了“寒性藥-熱證-療效佳”的辨證關(guān)系，實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合中醫(yī)“療熱以寒藥”的用藥原則。該配伍藥對(duì)治療風(fēng)濕熱痹RA的作用機(jī)制可能與其能夠降低血清TNF-α、IL-1β、PGE2含量、降低關(guān)節(jié)MMP-3表達(dá)、升高TIMP-1表達(dá)、減輕關(guān)節(jié)軟骨破壞以及減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和血管增生有關(guān)。
　　3.從本實(shí)驗(yàn)研究范圍來(lái)看，中藥對(duì)RA的治療