秦艽不同配伍藥對對風(fēng)濕熱痹RA模型大鼠作用及主要成分含量變化的研究.pdf

1、目的：通過建立病證結(jié)合風(fēng)濕熱痹RA大鼠模型，觀察單味秦艽及秦艽不同配伍藥對—秦艽+威靈仙（平溫相配）、秦艽+桑寄生（平平相配）、秦艽+防己（平寒相配）對風(fēng)濕熱痹RA大鼠足跖腫脹度、免疫臟器指數(shù)、血沉（Erythrocyte sedimentation rate,ESR）、血常規(guī)及血清抗環(huán)瓜氨酸肽（ Cyclic citrullinated peptide,CCP）抗體和免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)、類風(fēng)濕因子

2、（Rheumatoid factor,RF）、C反應(yīng)蛋白（Creactive protein,CRP）的影響；建立HPLC法同時(shí)測定秦艽及其不同配伍藥對水煎液中兩種環(huán)烯醚萜苷類成分獐牙菜苦苷和龍膽苦苷含量的方法，考察不同藥性配伍藥對對秦艽主要活性成分獐牙菜苦苷和龍膽苦苷含量的影響，進(jìn)一步分析藥效-藥性-含量之間的關(guān)系。
　　方法：
　　1.將80只 SD大鼠用隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、Ⅱ型膠原組、病證模型組（Ⅱ型膠原+風(fēng)濕熱）

3、、陽性藥組（雷公藤多苷）、單味秦艽組、秦艽威靈仙組、秦艽桑寄生組、秦艽防己組，共8組，每組10只。采用Ⅱ型膠原誘導(dǎo)并附加風(fēng)濕熱環(huán)境因素刺激的方法，建立符合中醫(yī)“痹證”特點(diǎn)的病證結(jié)合風(fēng)濕熱痹RA大鼠模型。造模結(jié)束后，各中藥組按25g/kg給予對應(yīng)的藥液灌胃，陽性藥組按6 mg/kg給予雷公藤多苷灌胃，空白組、Ⅱ型膠原組及病證模型組給予等量生理鹽水，每天1次，連續(xù)21 d。整個(gè)實(shí)驗(yàn)中密切觀察大鼠的一般狀態(tài)、飲食、毛發(fā)等；實(shí)驗(yàn)中每3d測量一次

4、大鼠足跖腫脹度；實(shí)驗(yàn)第38 d，大鼠股動(dòng)脈取血測定ESR和血常規(guī)；分離血清，用ELISA試劑盒測定大鼠血清中抗CCP抗體、IgG、RF及CRP水平變化；將大鼠處死后，進(jìn)行胸腺、脾臟免疫臟器指數(shù)測定。
　　2.采用Agilent A3000250×046 Pursuit5 C18（250 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱，流動(dòng)相為甲醇（B）-0.04％磷酸水溶液（A），梯度洗脫：0~28 min，B：15→23%，28~35 mi

5、n，B：23→35%，流速：0.8 mL/min，柱溫：30℃，檢測波長245 nm，分析秦艽不同配伍藥對中環(huán)烯醚萜苷類成分獐牙菜苦苷、龍膽苦苷的含量變化。
　　3.綜合分析不同藥性配伍后秦艽主要活性成分獐牙菜苦苷和龍膽苦苷含量的變化與藥效-藥性-療效之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.各組大鼠足跖腫脹度變化結(jié)果表明：造模后，與空白組比較，各組大鼠腫脹度均逐漸升高，14 d時(shí)最為明顯，差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01

6、）；給藥后第21 d，與病證模型組比較，各給藥組大鼠足跖腫脹度均有降低，除秦桑組外，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或 P＜0.01），尤以秦防組最明顯，差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），秦威組、單味秦艽組次之。
　　2.免疫臟器指數(shù)結(jié)果表明：各組大鼠的胸腺指數(shù)無差異（P＞0.05）。與病證模型組比較，秦桑組、秦防組大鼠脾臟指數(shù)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P＜0.05或 P＜0.01），尤以秦防組大鼠的脾臟指數(shù)降低明顯，差異

7、有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與陽性藥組比較，秦防組大鼠脾臟指數(shù)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與秦威組比較，秦防組大鼠的脾臟指數(shù)也降低，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3. ESR結(jié)果表明：在12 h時(shí)間點(diǎn)時(shí)，與空白組比較，Ⅱ型膠原組大鼠ESR加快，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與Ⅱ型膠原組比較，秦防組大鼠ESR減慢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其余各個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組之間均有ESR加快或減慢的趨勢

8、，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.血常規(guī)結(jié)果表明：在測定的18個(gè)指標(biāo)中，其中2個(gè)指標(biāo)[淋巴細(xì)胞百分比(the P ercentage of lymphocytes,LY%)、平均紅細(xì)胞體積(Mean corpuscular volume,MCV)）]的結(jié)果為各給藥組之間相互比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），尤以秦防組（平寒相配）最顯著；6個(gè)指標(biāo)[單核細(xì)胞(Monocytes,MON)、單核細(xì)胞百分比(the Percen

9、t age of monocytes,MO%)、中性粒細(xì)胞(Neutrophils,NEU)、中性粒細(xì)胞百分比(the Perc entage of neutrophils,NE%)、血紅蛋白（Hemoglobin,HGB）、血小板(Platelet,PLT)]的結(jié)果為各給藥組與Ⅱ型膠原組或病證模型組比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；6個(gè)指標(biāo)[白細(xì)胞(White blood cell,WBC)、紅細(xì)胞(Red bloo

10、d cell,RBC)、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)(Red blood cell distribution width coefficientof variation,RDW-C V)、平均血小板體積(Mean platelet volume,MPV)、紅細(xì)胞壓積(Hematocrit,HCT)、血小板壓積(Platelet hematocrit,PCT)]的結(jié)果為與空白組比較，Ⅱ型膠原組或病證模型組升高或降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.0

11、5或P＜0.01），其余各組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；4個(gè)指標(biāo)[淋巴細(xì)胞(Lymphocytes,LYM)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白(Mean corpuscular hemoglo-bin,MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(Mean corpuscular hemoglobin concentration, MCHC)及血小板分布寬度變異系數(shù)(Platelet distribution width coefficient of variation, P

12、DW-CV)]各組中的變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.各組大鼠抗CCP抗體、IgG、RF及CRP水平的變化：與空白組比較，Ⅱ型膠原組IgG、RF明顯升高（P＜0.01），病證模型組抗CCP抗體、IgG、RF及CRP水平均升高（P＜0.05或P＜0.01）；與病證模型組比較，秦防組抗CCP抗體、IgG、RF及CRP水平降低最明顯（P＜0.01）；各給藥組間比較，秦防組中的抗CCP抗體、IgG、RF及CRP水平也降低最明顯（P＜0.01）

13、。
　　6.秦艽及其不同配伍藥對中環(huán)烯醚萜苷類成分獐牙菜苦苷、龍膽苦苷含量測定結(jié)果：①獐芽菜苦苷含量測定結(jié)果表明：秦艽及配伍藥對中獐芽菜苦苷含量的總趨勢是：秦威藥對（平溫相配）＞秦桑藥對（平平相配）＞秦防藥對（平寒相配）＞單味秦艽。②龍膽苦苷含量測定結(jié)果表明：秦艽及配伍藥對中龍膽苦苷含量的總趨勢是：秦威藥對（平溫相配）＞單味秦艽＞秦防藥對（平寒相配）＞秦桑藥對（平平相配）。
　　結(jié)論：在風(fēng)濕熱痹 RA模型大鼠中，與病證模型組

14、比較，秦防組（平寒相配）療效較好，秦威組（平溫相配）次之，秦桑組（平平相配）、單味秦艽組更次，這與中醫(yī)臨床“療寒以熱藥，療熱以寒藥”的治療原則基本符合。通過 HPLC法同時(shí)測定秦艽及其不同配伍藥對水煎液中獐牙菜苦苷和龍膽苦苷含量，發(fā)現(xiàn)秦艽配伍用藥后，有效成分含量確實(shí)有所改變，其中秦威組兩種有效成分均升高。此研究結(jié)果與前期藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果風(fēng)寒濕痹中，秦威組（平溫相配）作用明顯及在風(fēng)濕熱痹中，秦防組（平寒相配）、秦威組（平溫相配）作用相近有一