伏馬菌素B1對Sf9細(xì)胞毒性及作用機理研究.pdf

1、伏馬菌素（FBs）是由串珠鐮刀菌（Fusariumvertieilliodes）和再育鐮刀菌（Fusarium proliferatum）產(chǎn)生的一類水溶性代謝物，是污染糧食作物及其制品的一種主要真菌毒素，也是2B類致癌物（可能致癌物），對動物和人類的健康有很大的潛在危害。目前為止，有關(guān)伏馬菌素毒性作用機理尚不是很清楚；同時，伏馬菌素對昆蟲細(xì)胞的毒性及作用機制也不明確。Sf9細(xì)胞系是草地貪夜蛾（Spodoptera frugperda）的

2、卵巢細(xì)胞，易培養(yǎng)，不需要使細(xì)胞孵育在 CO2中，且可在細(xì)胞水平提供相應(yīng)的信息，是藥物毒性研究有力可靠的工具。本研究以Sf9細(xì)胞為供試細(xì)胞，開展伏馬菌素對Sf9細(xì)胞的毒性及作用機理研究，研究結(jié)果如下：
　　1、采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法測定了不同濃度(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的伏馬菌素B1對Sf9細(xì)胞的毒性。處理48 h后，Sf9細(xì)胞增殖的

3、抑制率分別為10.5％，20.3%，30.9%，49.9%和65.4%。
　　2、選取增殖抑制率為10%、30%、50%對應(yīng)濃度（25 mg/L、50 mg/L、200 mg/L）的伏馬菌素B1處理Sf9細(xì)胞，48 h后，采用倒置顯微鏡觀察Sf9細(xì)胞形態(tài)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對照組細(xì)胞外部形態(tài)飽滿，生長狀態(tài)良好，25 mg/L的伏馬菌素B1處理Sf9細(xì)胞后，部分細(xì)胞膨大，多數(shù)細(xì)胞仍可增殖；50 mg/L的伏馬菌素B1處理Sf9細(xì)胞后，

4、膨大狀態(tài)細(xì)胞比例增加，部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡；200 mg/L的伏馬菌素B1處理Sf9細(xì)胞后，細(xì)胞增殖受到明顯抑制，空泡化細(xì)胞比例增加，且部分細(xì)胞出現(xiàn)脫壁現(xiàn)象。
　　3、以抑制率為10%、30%、50%濃度（25 mg/L、50 mg/L、200 mg/L）的伏馬菌素B1處理Sf9細(xì)胞，48 h后觀察，發(fā)現(xiàn)伏馬菌素B1引起Sf9細(xì)胞G2/M期的阻滯；引起Sf9細(xì)胞膜電位去極化；引起Sf9細(xì)胞發(fā)生凋亡，凋亡率分別為16.65%、16.89

5、%和21.90%；還可引起Sf9細(xì)胞線粒體膜電位超極化。
　　4、以抑制率為50%濃度的伏馬菌素B1處理Sf9細(xì)胞，進行轉(zhuǎn)錄組分析，篩選差異表達基因。差異明顯的基因主要有：
　?。?）解毒藥物代謝相關(guān)基因及代謝通路：Sf9細(xì)胞主要通過啟動細(xì)胞色素P450（Cytochrome P450）、谷胱甘膚-S-轉(zhuǎn)移酶（GSTs）、尿苷二磷酸-糖基轉(zhuǎn)移酶(UGTs)基因的過量表達來應(yīng)對伏馬菌素B1的毒性作用。
　?。?）生長發(fā)育

6、相關(guān)基因及代謝通路：伏馬菌素B1通過影響細(xì)胞的微管結(jié)合蛋白1、細(xì)胞粘附分子蛋白、生長因子蛋白及打破昆蟲體內(nèi)蛻皮激素和保幼激素的平衡等來影響細(xì)胞的增殖。
　　（3）免疫相關(guān)基因及代謝通路：Sf9細(xì)胞啟動Toll樣受體信號通路和吞噬體信號通路產(chǎn)生免疫反應(yīng)來應(yīng)對伏馬菌素B1對機體的傷害。
　?。?）凋亡相關(guān)基因及代謝通路：伏馬菌素B1誘導(dǎo)Sf9細(xì)胞啟動JNK和p38 MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，加快細(xì)胞凋亡的進程，進而引起細(xì)胞凋亡。