團(tuán)頭魴Kiss2-Kiss2R系統(tǒng)對(duì)其生殖調(diào)控的初步研究.pdf

1、團(tuán)頭魴是我國(guó)特有的重要草食性經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)之一。動(dòng)物的性成熟表現(xiàn)為一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控過(guò)程，通過(guò)下丘腦—腦垂體—性腺(Hypothalamic-Pituitary-Gonad，HPG)這個(gè)生殖內(nèi)分泌調(diào)控軸來(lái)調(diào)控其性腺發(fā)育和成熟。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)KiSS-1/KissR基因的突變與人和鼠的性早熟是密切相關(guān)的。然而Kiss-1/KissR基因在魚(yú)類(lèi)性早熟中是否起到了一定的調(diào)控作用還不是很清楚。本研究通過(guò)末端快速擴(kuò)增技術(shù)(RACE)克隆了團(tuán)頭魴Kiss2/Kis

2、s2R基因的cDNA序列全長(zhǎng)，并應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)團(tuán)頭魴Kiss2/Kiss2R在團(tuán)頭魴雌雄組織的表達(dá)模式;分析了Kiss2/Kiss2R在團(tuán)頭魴胚胎發(fā)育時(shí)期以及仔稚魚(yú)時(shí)期的表達(dá)變化;最后通過(guò)組織切片鑒定了團(tuán)頭魴不同發(fā)育時(shí)期的性腺分期;通過(guò)熒光定量PCR進(jìn)行了雌雄團(tuán)頭魴性腺分化不同時(shí)期，Kiss2/Kiss2R在腦、垂體、性腺的表達(dá)情況。期望通過(guò)本研究明確團(tuán)頭魴Kiss2/Kiss2R在生殖調(diào)控中的作用，為揭示團(tuán)頭魴性早熟分子機(jī)

3、制提供參考，同時(shí)為篩選團(tuán)頭魴生殖內(nèi)分泌調(diào)控相關(guān)功能基因提供基礎(chǔ)信息。主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)克隆出團(tuán)頭魴Kiss2/Kiss2R cDNA序列全長(zhǎng)，與其它物種Kiss/KissR同源基因氨基酸序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析表明團(tuán)頭魴Kiss/KissR基因應(yīng)屬Kiss2/Kiss2R。其中Kiss2基因cDNA全長(zhǎng)623 bp，開(kāi)放閱讀框包含378 bp，編碼125個(gè)氨基酸，5'非翻譯序列49 bp，3'非翻譯序列196 bp

4、。其編碼的氨基酸與金魚(yú)、斑馬魚(yú)的同源性比較顯示其相似度大于80％，并發(fā)現(xiàn)其核心功能結(jié)構(gòu)域FNYNPFGLRF，以及一個(gè)C末端剪切位點(diǎn)GKR位點(diǎn)，并具有一個(gè)多聚腺苷酸尾巴。
　　 (2) Kiss2R cDNA序列全長(zhǎng)1176bp，開(kāi)放閱讀框573 bp，編碼190個(gè)氨基酸，5端非翻譯序列161 bp，3端非翻譯序列為442 bp。但是并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)G蛋白偶聯(lián)受體家族具有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，而只預(yù)測(cè)到2個(gè)。在團(tuán)頭魴Kiss2R序列發(fā)現(xiàn)2個(gè)

5、多聚腺苷酸加尾信號(hào)序列(AATAAA)，因此團(tuán)頭魴Kiss2R基因可能存在選擇性剪切機(jī)制，其結(jié)構(gòu)也含有一個(gè)多聚腺苷酸尾巴。
　　 (3)團(tuán)頭魴Kiss2/Kiss2R基因的組織表達(dá)具有廣泛性。雄性團(tuán)頭魴Kiss2表達(dá)量最高的是肌肉，其次是卵巢和中腦，腸、心臟、肝臟表現(xiàn)出中等表達(dá)水平;雌性表達(dá)量最高的也是肌肉組織，然后是垂體和精巢;Kiss2R在雌性和雄性團(tuán)頭魴的肌肉組織表達(dá)量也是最高的，并且卵巢的表達(dá)量高于精巢;KissR也是在

6、生殖軸相關(guān)組織具有較高表達(dá)量。
　　 (4)在成熟的精子和卵細(xì)胞中的Kiss2/Kiss2R系統(tǒng)處于激活狀態(tài)，隨后的過(guò)程表達(dá)量出現(xiàn)下降趨勢(shì)。Kiss2基因在受精卵發(fā)育到囊胚期時(shí)表達(dá)量出現(xiàn)峰值，然而Kiss2R的表達(dá)量卻很低;Kiss2R基因在出膜15天后的表達(dá)量出現(xiàn)峰值，Kiss2的表達(dá)量也較低。但是，Kiss2/Kiss2R在出膜時(shí)期的表達(dá)都是低水平的?？傮w來(lái)講，Kiss2/Kiss2R的表達(dá)趨勢(shì)還是一致的，并且其表達(dá)量一直處

7、于波動(dòng)狀態(tài)，不斷地升高和降低。表達(dá)量在不同基因以及不同發(fā)育時(shí)期都有顯著性差異。
　　 (5)組織切片觀察明確鑒別出團(tuán)頭魴卵巢和精巢發(fā)育第Ⅰ期至第Ⅵ期的性腺組織結(jié)構(gòu)。Kiss2在雄魚(yú)性腺不同發(fā)育時(shí)期對(duì)應(yīng)的腦和垂體組織中的表達(dá)變化趨勢(shì)基本一致，在Ⅱ期和Ⅴ期出現(xiàn)峰值，精巢的表達(dá)量在Ⅲ期表達(dá)量出現(xiàn)最大值;而在雌魚(yú)卵巢/垂體和腦組織中表達(dá)模式一致，都是在性腺發(fā)育Ⅱ期時(shí)表達(dá)量最高;并且Kiss2在雌雄個(gè)體腦和垂體組織中的表達(dá)模式類(lèi)似。Kis