大豆懸浮細(xì)胞培養(yǎng)及作為外源基因轉(zhuǎn)化受體的研究.pdf

1、大豆是一種重要的農(nóng)作物,富含蛋白質(zhì)、植物油及多種人體生理有益成分,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高,在糧食生產(chǎn)中占有重要的位置。隨著人口的增長(zhǎng)、生活水平的提高,人們對(duì)大豆的產(chǎn)量和質(zhì)量有了更高的要求。自1988年第一株轉(zhuǎn)基因大豆成功以來(lái),許多研究者對(duì)大豆進(jìn)行了轉(zhuǎn)基因的嘗試,試圖通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)以實(shí)現(xiàn)大豆品種的改良,但獲得成功的實(shí)例較少。建立穩(wěn)定、高效的大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系,獲得高產(chǎn)高品質(zhì)的大豆品種,仍舊是國(guó)內(nèi)外學(xué)者的一個(gè)研究熱點(diǎn)。硼是植物生長(zhǎng)發(fā)育的一種必需微量元素

2、,在維持植物細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和功能等方面有著重要的作用。
　　本研究以吉林小粒7號(hào)大豆品種為材料,切取無(wú)菌幼苗下胚軸誘導(dǎo)愈傷組織,初步建立了大豆懸浮細(xì)胞系,測(cè)定不同硼酸濃度下懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)變化;采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)大豆懸浮細(xì)胞進(jìn)行外源GUS基因的轉(zhuǎn)化,先通過(guò)不同程度的超聲處理確定最佳超聲時(shí)長(zhǎng),然后在最佳超聲處理時(shí)長(zhǎng)的基礎(chǔ)上,探討了硼酸濃度對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響;最后采用PCR和Southern blot雜交對(duì)抗性愈傷做分子鑒定。結(jié)果表明：⑴大豆

3、下胚軸外植體誘導(dǎo)的愈傷組織比子葉節(jié)好,最佳培養(yǎng)基配方為MSB+2,4-D0.8mg/L+KT0.6 mg/L,此時(shí)得到的愈傷的個(gè)體大、顏色淺黃、結(jié)構(gòu)松散,可建立起穩(wěn)定的大豆懸浮細(xì)胞系。⑵大豆懸浮細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,硼酸濃度為正常濃度(6.2mg/L)時(shí),大豆懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)渡期最短,呈均一的球形;略微提升濃度至10mg/L時(shí),過(guò)渡期延長(zhǎng),但生長(zhǎng)最大值比正常硼酸濃度下高;而硼酸濃度過(guò)低或過(guò)高時(shí),細(xì)胞的生長(zhǎng)受到抑制,形態(tài)發(fā)生變異,呈長(zhǎng)條狀。⑶農(nóng)桿