野生甲魚(yú)對(duì)免疫抑制造模小鼠的影響研究【畢業(yè)論文】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)</b></p><p><b>　?。?0_ _屆）</b></p><p><b>　　生物工程</b></p><p>　　野生甲魚(yú)對(duì)免疫抑制造模小鼠的影響研究</p><p><b>　　摘 要</b>&

2、lt;/p><p>　　本文采用地塞米松磷酸鈉注射液（0.25mL/只）注射小鼠構(gòu)建免疫抑制模型，飼喂野生甲魚(yú)、溫室甲魚(yú)和普通飼料后，檢測(cè)小鼠體重、脾臟系數(shù)、胸腺系數(shù)、MDA活性、吞噬指數(shù)等生理生化指標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)小鼠在試驗(yàn)期間生長(zhǎng)發(fā)育未見(jiàn)異常，初、末體重各組間均不顯著；小鼠不同性別雌雄間臟器系數(shù)比較，各組間脾臟系數(shù)差異極顯著（P<0.01），而胸腺系數(shù)差異不顯著（P>0.05）；肝組織MDA含量測(cè)定結(jié)

3、果顯示，野生甲魚(yú)對(duì)照組均低于顆粒飼料對(duì)照組和溫室甲魚(yú)對(duì)照組，但差異不顯著，表明野生甲魚(yú)一定程度上能夠減少肝組織中MDA含量，減少細(xì)胞受自由基的攻擊；碳廓清實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果顯示，無(wú)論是兩種性別還是單一性別小鼠比較，組間均無(wú)顯著性差異。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究野生甲魚(yú)對(duì)免疫抑制造模小鼠的影響，來(lái)說(shuō)明和證實(shí)野生甲魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健功效。</p><p>　　關(guān)鍵詞：免疫抑制模型；野生甲魚(yú)；營(yíng)養(yǎng)價(jià)值；保健功效</p>&

4、lt;p><b>　　ABSTRACT</b></p><p>　　Immune suppression model was build by injection of Sodium Phosphate into mice (0.25mL per mice). After feeding the following three feedstuffs: wild-type soft-sh

5、elled turtle, domesticated turtle and normal diet, the physiological and biochemical parameters: body weight, organ coefficient, thymus coefficient, liver MDA activity and phagocytic index were detected. The results show

6、ed that during trail, the growth is normal and no significant difference between initial bodyweight and final weight was</p><p>　　Key words: Immunosuppressant model; turtle; dietary value; health claim</p

7、><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　1 前言1</b></p><p><b>　　2 材料和方法2</b></p><p>　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料2</p><p>　　2.1.1 試驗(yàn)甲魚(yú)及飼喂料2</p>

8、;<p>　　2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2</p><p>　　2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑2</p><p>　　2.1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備2</p><p>　　2.2 實(shí)驗(yàn)方法3</p><p>　　2.2.1 飼喂小鼠甲魚(yú)飼料制備3</p><p>　　2.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組處理3</p>

9、<p>　　2.2.3 免疫抑制造模小鼠構(gòu)建3</p><p>　　2.2.4 小鼠免疫指標(biāo)測(cè)定方法3</p><p>　　2.2.5 處理分析5</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析5</b></p><p>　　3.1 野生甲魚(yú)對(duì)小鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響5</p><p>

10、;　　3.2 脾臟系數(shù)和胸腺系數(shù)測(cè)定7</p><p>　　3.3 腹腔巨噬細(xì)胞功能影響8</p><p>　　3.4 MDA含量的測(cè)定8</p><p>　　3.5 小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)的影響9</p><p>　　4 結(jié)論和展望10</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)11</b><

11、;/p><p><b>　　1 前言</b></p><p>　　中華鱉（Trionyx Sinensis），又名“中國(guó)鱉”，俗稱(chēng)甲魚(yú)、團(tuán)魚(yú)、水魚(yú)、腳魚(yú)、王八、神守等。它是一種珍貴的、經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的水生動(dòng)物。</p><p>　　據(jù)測(cè)定，100克鱉肉中蛋白質(zhì)含量達(dá)16.5克。此外，還含有豐富的鈣、磷、鐵、硫胺素、核黃素、尼克酸、維生素A等多種營(yíng)養(yǎng)成

12、分。鱉蛋白的氨基酸不但含量高，而且種類(lèi)齊全，人體所需的8種必須氨基酸占其氨基酸總量的60%[1]。同時(shí)朱秋華等[2]通過(guò)比較仿生鱉與溫室鱉的營(yíng)養(yǎng)成分，結(jié)果表明仿生鱉的粗蛋白含量極顯著地高于溫室鱉，仿生鱉肌肉中9種必需氨基酸的含量和鮮味氨基酸的含量都高于溫室鱉。</p><p>　　中華鱉的肉及其提取物還能有效地預(yù)防和抑制肝癌、胃癌、急性淋巴性白血病，并用于防治因放療、化療引起的虛弱、貧血、白細(xì)胞減少等癥。據(jù)《本草

13、綱目》記載：鱉肉可治久痢、虛勞、腳氣等??；鱉甲主治骨蒸勞熱、陰虛風(fēng)動(dòng)、肝脾腫大和肝硬化等；鱉血外敷可治顏面神經(jīng)麻痹、小兒疳積潮熱，兌酒可治婦女血癆；鱉卵能治久瀉久??；鱉膽汁有治痔瘺等功效。鱉頭干制入藥稱(chēng)“鱉首”，可治脫肛、漏瘡等。用活鱉、鱉甲或鱉甲膠做原料配制的中成藥有二龍膏、烏雞白風(fēng)丸、化癥回生丹、史國(guó)公酒、鱉甲煎丸等。</p><p>　　諸學(xué)良[3]等根據(jù)“保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法”，做了小白鼠動(dòng)物

14、喂養(yǎng)試驗(yàn)，以類(lèi)推對(duì)人體功能作用。試驗(yàn)結(jié)果可以認(rèn)為中華鱉膠囊有抗疲勞作用，有免疫調(diào)節(jié)作用和有改善性功能作用。另外王慧銘等[4]等研究發(fā)現(xiàn)，鱉甲多糖（trionyx sinensis polysac-charides，TSP）能顯著對(duì)抗免疫抑制劑引起的小鼠免疫器官萎縮，對(duì)免疫器官具有保護(hù)作用，表明TSP可改善免疫抑制小鼠的非特異性免疫功能。TSP可顯著提高小鼠血清半數(shù)溶血值、外周血T淋巴細(xì)胞CD4亞群的比例，可顯著增強(qiáng)小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)，表

15、明TSP可顯著增強(qiáng)免疫抑制小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫功能。</p><p>　　目前腫瘤是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康與生命的疾病之一，癌癥患者本身機(jī)體抵抗力就低，經(jīng)過(guò)放療和化療以后機(jī)體抵抗力就更低，影響到患者的康復(fù)和預(yù)后，中華鱉具有抗腫瘤作用。潘宏銘等[5]通過(guò)測(cè)定荷瘤小鼠的瘤重、抑瘤率及瘤體比觀(guān)察鱉甲多糖對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明鱉甲多糖能明顯減小S180荷瘤小鼠的瘤重和瘤體比（P<0.05），能明顯抑制腫瘤的生長(zhǎng)（P

16、<0.05），Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組的平均抑瘤率分別為30%、37%、45%。甲魚(yú)提取液對(duì)內(nèi)瘤S180瘤株引發(fā)的實(shí)體瘤、艾氏腹水癌瘤株引發(fā)的實(shí)體瘤和腹水瘤均有抑制作用，并能延長(zhǎng)載瘤小鼠的壽命[6-7]。因此本實(shí)驗(yàn)從免疫學(xué)的角度，通過(guò)野生甲魚(yú)對(duì)免疫抑制造模小鼠的影響研究，為中華鱉的營(yíng)養(yǎng)、保健價(jià)值的研究和中華鱉配合飼料的研制提供基礎(chǔ)資料和理論依據(jù)，并促進(jìn)中華鱉養(yǎng)殖的發(fā)展。</p><p><b>　　2 材料和

17、方法</b></p><p><b>　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料</b></p><p>　　2.1.1 試驗(yàn)甲魚(yú)及飼喂料</p><p>　　野生甲魚(yú)購(gòu)于寧波明鳳生態(tài)甲魚(yú)場(chǎng)，4年以上野生放養(yǎng)甲魚(yú)；溫室養(yǎng)殖甲魚(yú)購(gòu)于寧波東裕菜場(chǎng)2年生500g左右商品甲魚(yú)；小鼠飼喂顆粒由浙江省杭州市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖中心提供專(zhuān)用小鼠料。</p>&l

18、t;p>　　2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物</p><p>　　試驗(yàn)小鼠購(gòu)于浙江省杭州市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖中心，20日齡的健康小白鼠（雌雄各半）。</p><p>　　2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑</p><p>　　實(shí)驗(yàn)所用試劑見(jiàn)下表1。</p><p>　　表1 實(shí)驗(yàn)主要試劑一覽表</p><p>　　2.1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備<

19、/p><p>　　實(shí)驗(yàn)所用設(shè)備見(jiàn)下表2。</p><p>　　表2 實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備一覽表</p><p><b>　　2.2 實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p>　　2.2.1 飼喂小鼠甲魚(yú)飼料制備</p><p>　　野生及溫室甲魚(yú)顆粒飼料的制備，采用甲魚(yú)糜與小鼠顆粒飼料混勻后，絞肉機(jī)制成顆料狀。

20、用剪刀剔除甲魚(yú)背、腹大甲板，帶骨剪碎置于組織搗碎機(jī)中碾成糊狀，按10%量添加裹小鼠飼料及少量面粉，于絞肉機(jī)中制成軟顆粒狀，冰箱中冷凍保藏。</p><p>　　2.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組處理</p><p>　　將68只20g左右初體重的小白鼠用小鼠顆粒飼料預(yù)養(yǎng)二周后，雌雄隨機(jī)分成6個(gè)處理組，每組雌雄各半。即顆粒飼料對(duì)照組（小鼠顆粒飼料），免疫抑制組（小鼠顆粒飼料），溫室甲魚(yú)免疫抑制組（溫室

21、甲魚(yú)顆粒料），野生甲魚(yú)免疫抑制組（野生甲魚(yú)顆粒料），溫室甲魚(yú)對(duì)照組（溫室甲魚(yú)顆粒料）和野生甲魚(yú)對(duì)照組（野生甲魚(yú)顆粒料）。并于實(shí)驗(yàn)前空腹稱(chēng)取記錄各組小白鼠體重[8]。</p><p>　　2.2.3 免疫抑制造模小鼠構(gòu)建</p><p>　　免疫抑制組實(shí)驗(yàn)小鼠采用每天皮下注射醫(yī)用地塞米松磷酸鈉注射液（1mg/mL）0.25mL/只，構(gòu)建免疫抑制組模型；對(duì)照組同法采用0.9%生理鹽水代替地塞米

22、松液處理。</p><p>　　2.2.4 小鼠免疫指標(biāo)測(cè)定方法</p><p>　　2.2.4.1 脾臟系數(shù)、脾腺系數(shù)和體增重</p><p>　　實(shí)驗(yàn)小鼠稱(chēng)重后處死，分離脾臟、胸腺，剔除臟器表面脂肪、吸凈表面血跡后用電子天平稱(chēng)重，并進(jìn)行小鼠脾臟系數(shù)胸腺系數(shù)和體增重的測(cè)定。</p><p>　　脾臟系數(shù)（mg/g）＝脾臟重量（mg）/體重（

23、g）；</p><p>　　胸腺系數(shù)（mg/g）＝胸腺重量（mg）/體重（g）；</p><p>　　體增重（g）＝給藥后體重（g）－給藥前體重（g）。</p><p>　　2.2.4.2 腹腔巨噬細(xì)胞功能影響實(shí)驗(yàn)</p><p>　　瑞氏染色液配制：瑞氏色素0.1g，甲醇60mL用乳缽研磨溶解。</p><p>　　

24、瑞氏-Giemsa染液配制：瑞氏染液5mL，Giemsa染液1mL，蒸餾水6mL混勻。</p><p>　　腹腔巨噬細(xì)胞統(tǒng)計(jì)：將小鼠以頸椎脫臼法處死，剖開(kāi)腹腔，用不帶針頭注射器吸取小白鼠腹腔液，進(jìn)行涂片，每只小鼠涂2片。自然晾干后，用瑞氏-Giemsa染液染色，鏡檢，在顯微鏡高倍鏡下計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞吞噬百分率[9]。</p><p>　　吞噬百分率=（吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞總數(shù)/觀(guān)察到的巨噬細(xì)

25、胞總數(shù)）×100%。</p><p>　　2.2.4.3 MDA活性的測(cè)定</p><p>　　采用MDA試劑盒法測(cè)定MDA活性，該試劑盒需保存在冰箱中。試劑一在低溫下會(huì)凝固，在使用前需用25~37℃水浴加溫使其溶解至透明狀方可使用。試劑二在使用前需加如340mL蒸餾水混勻。試劑三在使用前將其融化在90~100℃的60mL的蒸餾水中，溶解時(shí)可適當(dāng)加熱，充分溶解后若體積不及60mL

26、可再補(bǔ)加至60mL，再加入60mL冰醋酸，混勻后使用。標(biāo)準(zhǔn)品：10nmol/mL四乙氧基丙烷5mL/瓶。</p><p>　　樣品處理：將實(shí)驗(yàn)小鼠處死后稱(chēng)取肝臟，用潔凈的實(shí)驗(yàn)剪刀剪取0.5g左右的肝置于離心管內(nèi)并剪碎，用電動(dòng)勻漿機(jī)進(jìn)行研磨，加入冷藏條件下9.5mL的生理鹽水進(jìn)行稀釋?zhuān)瑢⒅苽浜玫?%用3000r/min離心10-15min，取上清液進(jìn)行MDA含量的測(cè)定。</p><p>　　

27、MDA含量測(cè)定：將表3的樣品用旋渦混勻器混勻，試管口用保鮮膜扎緊，用針頭刺一小孔，95℃水浴40min，取出后流水冷卻，然后3500-4000轉(zhuǎn)/分，離心10min，取上清液，于532nm處，1cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測(cè)各管吸光度值。</p><p>　　組織中MDA含量計(jì)算公式：</p><p><b>　　表3 樣品配制</b></p><p&

28、gt;　　2.2.4.4 碳廓清試驗(yàn)</p><p>　　小鼠尾靜脈注射1：3稀釋的印度墨水，按0.1mL/10g劑量計(jì)算，待墨汁注入立即計(jì)時(shí)，于注入墨汁后2、10min分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20µL，將其加到2mL 0.1%Na2CO3溶液中，用721分光光度計(jì)600nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值。以廓清指數(shù)（K）和吞噬指數(shù)（a）表示小鼠碳廓清能力。</p><p>　　K=（lgOD1-l

29、gOD2）/（t2-t1）</p><p>　　吞噬指數(shù)a=×K1/3</p><p>　　2.2.5 處理分析</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析</b></p><p>　　3.1 野生甲魚(yú)對(duì)小鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響<

30、;/p><p>　　實(shí)驗(yàn)小鼠飼喂顆粒飼料及甲魚(yú)顆粒料2個(gè)月后各組之間未出現(xiàn)特殊情況，其中免疫抑制組出現(xiàn)一只小鼠死亡，這也許是因?yàn)樾∈蟊旧淼拿庖吡Σ?，在注射了免疫抑制劑后，免疫力下降?dǎo)致死亡。根據(jù)性別的差異，雌性小鼠比雄性小鼠消瘦。結(jié)果如表4、5所示各組小鼠初、末體重的相差不顯著（P>0.05）。</p><p>　　表4 飼喂雄性小鼠體重變化的情況</p><p&g

31、t;<b>　　續(xù)表4</b></p><p>　　表5 飼喂雌性小鼠體重變化的情況</p><p>　　由表4、5，圖1、2可知，小鼠在打了免疫抑制劑地塞米松磷酸鈉注射液后，體重明顯下降，這是因?yàn)橐种苿?duì)小鼠產(chǎn)生免疫效應(yīng)，使小鼠的體質(zhì)下降，繼而小鼠產(chǎn)生食欲下降，身體抵抗力下降等現(xiàn)象。另外，注射生理鹽水的小鼠比打免疫抑制劑的小鼠顯得活潑、好動(dòng)，而且小鼠的體重呈現(xiàn)增長(zhǎng)

32、的趨勢(shì)。也許是因?yàn)槲故车臅r(shí)間短，飼喂甲魚(yú)的小鼠的體重與飼喂顆粒飼料的小鼠的體重?zé)o明顯的差異。還有就是小鼠體重的變化不是單因素控制的，是由攝食量、活動(dòng)量、環(huán)境等因素共同作用。由于每只小鼠每天攝食量存在一定的差異，根據(jù)對(duì)小鼠喂食情況觀(guān)察，每籠小鼠每天給予等量的食物，發(fā)現(xiàn)其攝食量基本相近，故將攝食量造成的體重差異忽略不計(jì)。</p><p>　　圖1 實(shí)驗(yàn)雄性小鼠體重變化情況</p><p>　　

33、圖2 實(shí)驗(yàn)雌性小鼠體重變化情況</p><p>　　3.2 脾臟系數(shù)和胸腺系數(shù)測(cè)定</p><p>　　脾臟是機(jī)體最大的外周性免疫器官，是T、B淋巴細(xì)胞定居和對(duì)抗原刺激進(jìn)行免疫應(yīng)答的場(chǎng)所。因此，測(cè)定脾臟系數(shù)的變化能直接反映脾臟細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能的狀態(tài)。而胸腺和脾臟是機(jī)體的主要免疫器官，免疫抑制劑可使胸腺、脾臟萎縮；免疫增強(qiáng)劑可使胸腺、脾臟增重。因此，胸腺和脾臟可作為觀(guān)察野生鱉對(duì)小白鼠免疫功能

34、影響的指標(biāo)之一。</p><p>　　表6 各組小鼠免疫器官重量指數(shù)的變化</p><p>　　注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)小寫(xiě)字母相同或無(wú)字母表示差異不顯著（P>0.05），小寫(xiě)字母完全不同表示差異顯著（P<0.05），大寫(xiě)字母完全不同表示差異極顯著（P<0.01）。</p><p>　　由表6可見(jiàn)，溫室甲魚(yú)和野生甲魚(yú)對(duì)照組小鼠的脾臟系數(shù)明顯大于注射地塞米

35、松磷酸鈉注射液免疫抑制劑小鼠的脾臟系數(shù)，同時(shí)也大于單一用顆粒飼料喂養(yǎng)的小鼠，結(jié)果表明甲魚(yú)能促進(jìn)小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育。而小鼠的各組胸腺系數(shù)之間的差異均顯著。</p><p>　　3.3 腹腔巨噬細(xì)胞功能影響</p><p>　　在機(jī)體的免疫過(guò)程中，巨噬細(xì)胞是體內(nèi)重要的抗原遞呈細(xì)胞[10]，作為主要的免疫細(xì)胞之一，具有噬菌、殺菌、清除機(jī)體內(nèi)已損傷和衰老的細(xì)胞的功能。</p><p

36、>　　圖3 小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響（吞噬百分?jǐn)?shù)）</p><p>　　由圖3結(jié)果顯示，與顆粒飼料對(duì)照組比較，溫室甲魚(yú)對(duì)照組和野生甲魚(yú)對(duì)照組的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率明顯大。而野生甲魚(yú)免疫抑制組的吞噬能力比溫室甲魚(yú)免疫抑制組強(qiáng)，這是因?yàn)?，野生甲魚(yú)比溫室鱉營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，具有良好的保健功效。這與朱秋華等[2]研究的仿生鱉與溫室鱉的營(yíng)養(yǎng)成分比較的結(jié)論相一致，仿生鱉和溫室鱉肝臟組織中各營(yíng)養(yǎng)成分含量差異顯著，裙邊和

37、肌肉組織中差異不顯著。仿生鱉肌肉中必需氨基酸和鮮味氨基酸含量均比溫室鱉高。</p><p>　　而注射了地塞米松磷酸鈉注射液的小鼠的吞噬百分率明顯比喂養(yǎng)甲魚(yú)的對(duì)照組低。這是因?yàn)榈厝姿蔀槟I上腺皮質(zhì)激素類(lèi)藥物，具有抗炎、抗免疫、抗毒素和抗休克作用。注射了這種免疫抑制劑的小鼠的免疫力下降，抵抗力減弱，腹腔巨噬細(xì)胞由于藥物的刺激而使細(xì)胞的吞噬能力下降。小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響，能夠?yàn)榧佐~(yú)的保健功效提供一定的事實(shí)依

38、據(jù)。</p><p>　　3.4 MDA含量的測(cè)定</p><p>　　MDA為丙二醛，自由基在機(jī)體內(nèi)作用于脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)，其反應(yīng)的終產(chǎn)物為丙二醛，它會(huì)交聯(lián)聚合蛋白質(zhì)和核酸等大分子物質(zhì)，并有細(xì)胞毒性。試驗(yàn)?zāi)└鹘M小鼠處死后立即取肝組織檢測(cè)MDA活性。</p><p>　　結(jié)果如表7所示，各組MDA含量差異均不顯著（P≥0.05)；免疫抑制組與對(duì)照組肝組織MDA含量

39、變化不明顯，表明甲魚(yú)在一個(gè)月左右短時(shí)間試驗(yàn)對(duì)小鼠肝組織MDA生成含量未造成影響。</p><p>　　MDA活性的高低間接反映機(jī)體內(nèi)組織細(xì)胞受自由基的攻擊程度的大小。甲魚(yú)肝組織MDA含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)野生甲魚(yú)對(duì)照組均低于顆粒飼料對(duì)照組和溫室甲魚(yú)對(duì)照組。免疫抑制組、溫室甲魚(yú)免疫抑制組及野生甲魚(yú)抑制組比較結(jié)果測(cè)定，飼喂甲魚(yú)組肝組織MDA含量均低于飼喂顆粒飼料組。表明野生甲魚(yú)能夠一定程度減少肝組織中MDA含量，減少細(xì)胞受自由

40、基的攻擊，延緩機(jī)體衰老。</p><p>　　表7 小鼠肝組織MDA含量</p><p>　　3.5 小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)的影響</p><p>　　單核巨噬細(xì)胞的吞噬機(jī)能是反映動(dòng)物非特異性免疫功能的主要指標(biāo)之一。在一定范圍內(nèi)，體內(nèi)碳顆粒被清除速率與血碳濃度呈指數(shù)函數(shù)關(guān)系[11]。碳廓清實(shí)驗(yàn)測(cè)定小鼠非特異性免疫功能的常用方法之一。由表8可見(jiàn)，無(wú)論是兩種性別還是單一性別小

41、鼠比較，組間均無(wú)顯著性差異。</p><p>　　飼喂方式一樣，比較打免疫抑制劑和用等量生理鹽水代替的小鼠之間的吞噬指數(shù)，對(duì)照組較免疫抑制組高，這說(shuō)明抑制劑影響小鼠的吞噬能力，甲魚(yú)對(duì)小鼠的碳廓清速率有所提高。而比較野生甲魚(yú)對(duì)照組、溫室甲魚(yú)對(duì)照組及野生甲魚(yú)免疫抑制組、溫室甲魚(yú)抑制組，飼喂野生甲魚(yú)的小鼠的吞噬指數(shù)明顯比飼喂溫室甲魚(yú)的小鼠的吞噬指數(shù)高，這也進(jìn)一步證實(shí)了野生甲魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健功效比溫室甲魚(yú)高，與占秀安等

42、[12]的研究報(bào)道相一致。</p><p>　　表8 小鼠吞噬指數(shù)（a）比較</p><p><b>　　4 結(jié)論和展望</b></p><p>　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)采用地塞米松磷酸鈉注射液，注射小鼠0.25mL/只構(gòu)建免疫抑制模型，飼喂野生甲魚(yú)、溫室甲魚(yú)和普通飼料后，檢測(cè)小鼠體重、脾臟系數(shù)、胸腺系數(shù)、MDA含量、吞噬指數(shù)等生理生化指標(biāo)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)

43、驗(yàn)小鼠在試驗(yàn)期間生長(zhǎng)發(fā)育未見(jiàn)異常，初、末體重各組間均不顯著；小鼠不同性別雌雄間臟器系數(shù)比較，各組間脾臟系數(shù)差異極顯著（P<0.01），而胸腺系數(shù)差異不顯著（P>0.05）；飼喂野生甲魚(yú)組的小鼠的肝組織MDA含量較飼喂顆粒飼料組的小鼠低，但差異不顯著（P>0.05），表明野生甲魚(yú)能夠減少肝組織MDA含量，減少細(xì)胞受自由基的攻擊，增強(qiáng)小鼠的抗氧化能力，一定程度上反應(yīng)了野生甲魚(yú)能夠延緩衰老；碳廓清實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果顯示，無(wú)論是兩種

44、性別還是單一性別小鼠比較，組間均無(wú)顯著性差異。</p><p>　　曾有學(xué)者報(bào)道發(fā)現(xiàn)甲魚(yú)主要功效有抗氧化，提高機(jī)體免疫，促進(jìn)傷口愈合，滋陰，滋補(bǔ)，提高血漿蛋白蛋白含量，促進(jìn)造血功能，增強(qiáng)體力，清熱等[13]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也在一定程度上證實(shí)了甲魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健功效。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 陳瑞,

45、黃如彬,楊爭(zhēng)光等.鱉血生化指標(biāo),氨基酸和礦物質(zhì)元素含量的測(cè)定[J].動(dòng)物學(xué)雜志,</p><p>　　1999,34(4):29-31.</p><p>　　[2] 朱秋華,錢(qián)國(guó)英.仿生鱉與溫室鱉的營(yíng)養(yǎng)成分比較[J].特產(chǎn)研究,2001,23(3):39-42.</p><p>　　[3] 諸學(xué)良,郭鵬達(dá).關(guān)于中華鱉膠囊保健食品功能的研究[J].海洋漁業(yè),1998,

46、20(3):116-119.</p><p>　　[4] 王慧銘,孫煒,項(xiàng)偉嵐等.鱉甲多糖對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究[J].中國(guó)中藥雜志,2007,32</p><p>　　(12):1245-1247.</p><p>　　[5] 王慧銘,孫煒,潘宏銘等.鱉甲多糖抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)理的研究[J].浙江中醫(yī)藥大</p><p>　　學(xué)學(xué)報(bào)

47、,2006,30(4):347-349.</p><p>　　[6] 苗明三,顧麗亞.中華鱉粉膠囊對(duì)正常小鼠免疫功能酶影響[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2004,</p><p>　　11(2):131-132.</p><p>　　[7] 劉婭,凌笑梅,王莉馨等.中華鱉提取物抗腫瘤機(jī)制初探[J].實(shí)用腫瘤學(xué)雜志,1994(3):60-61.</p>&

48、lt;p>　　[8] 唐徽,朱明磊,宋明華.山藥多糖抗衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].黃岡職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào),2002,4</p><p>　　(3):23-25.</p><p>　　[9] 熊平源,邊藏麗著.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)與微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程[M].廣西:廣西師范大學(xué)出版社,1997,5-8.</p><p>　　[10] 張建華,王宇,徐敏等.致敏和哮喘小鼠腹腔和支氣

49、管肺泡灌洗液巨噬細(xì)胞數(shù)量和功能表</p><p>　　達(dá)[J].實(shí)用兒科臨床雜志,2006,21(21):1459-1460.</p><p>　　[11] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.保健食品檢驗(yàn)和評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范,2003,2:28-29.</p><p>　　[12] 占秀安.野生鱉與養(yǎng)殖鱉肌肉營(yíng)養(yǎng),保健價(jià)值的比較研究[J].大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào),2000,15</p