斷喙應(yīng)激對雛雞免疫器官發(fā)育及細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、應(yīng)用電子顯微鏡技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、免疫組織化學(xué)技術(shù)等方法，研究斷喙應(yīng)激對雛雞免疫器官發(fā)育、細(xì)胞增殖、分化、凋亡及相關(guān)凋亡蛋白表達(dá)的影響，探討斷喙應(yīng)激的緩解時(shí)間及應(yīng)激對免疫器官發(fā)育抑制的機(jī)理，旨在為進(jìn)一步研究采取措施減少斷喙應(yīng)激對雛雞生長的影響奠定理論基礎(chǔ)。 試驗(yàn)一斷喙應(yīng)激對雛雞免疫器官發(fā)育及超微結(jié)構(gòu)的影響 采用1日齡的健康綠殼蛋雞240只（公雞），隨機(jī)分為2組（對照組和試驗(yàn)組），每組4個(gè)重復(fù)，每重復(fù)30只雞。對照組不斷喙，

2、試驗(yàn)組于10日齡進(jìn)行斷喙。于斷喙后12h、1d、3d、5d、7d隨機(jī)從每組每重復(fù)抽取1只稱重，心臟采血致死。取胸腺、脾臟、法氏囊，稱重后保存于2．5％戊二醛磷酸鹽緩沖液中，用于電子顯微鏡觀察免疫器官淋巴細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明：（1）試驗(yàn)組雛雞的體重在1周內(nèi)均比對照組輕，在斷喙后3d時(shí)差異顯著（P<0．05）：試驗(yàn)組雛雞的胸腺重量均比對照組輕，但差異不顯著（P>0．05），且在斷喙后5d兩者重量相差最大；試驗(yàn)組脾臟的重量在斷喙后均比對照

3、組輕，在5d時(shí)差異顯著（P<0．05）；試驗(yàn)組法氏囊的重量在斷喙后均比對照組輕，在5d、7d時(shí)兩者數(shù)值相差較大，且在5d顯著差異（P<0．05）。（2）試驗(yàn)組雛雞免疫器官指數(shù)均比對照組低。胸腺指數(shù)差異不顯著（P>0．05）；脾臟指數(shù)在斷喙后5d時(shí)差異顯著（P<0．05）：試驗(yàn)組法氏囊指數(shù)在5d時(shí)呈現(xiàn)顯著差異（P<0．05）。（3）試驗(yàn)組雛雞免疫器官胸腺細(xì)胞可看到細(xì)胞核明顯的應(yīng)激反應(yīng)，細(xì)胞核凝集較致密，部分細(xì)胞核即將溶解，并出現(xiàn)一定數(shù)量的

4、凋亡和壞死細(xì)胞；脾臟淋巴細(xì)胞在斷喙后呈現(xiàn)細(xì)胞體積較大，細(xì)胞核染色質(zhì)凝集成塊，細(xì)胞質(zhì)形成的空泡較多，線粒體并有空泡現(xiàn)象出現(xiàn)；法氏囊淋巴細(xì)胞在斷喙后細(xì)胞間隙較大，細(xì)胞的核質(zhì)排空，核仁高度凝集，核膜消失，凋亡數(shù)量多，并有壞死細(xì)胞出現(xiàn)。 試驗(yàn)二斷喙應(yīng)激對雛雞免疫器官細(xì)胞周期及凋亡率的影響 采用1日齡的健康綠殼蛋雞240只（公雞），隨機(jī)分為2組（對照組和試驗(yàn)組），每組4個(gè)重復(fù)，每重復(fù)30只雞。對照組不斷喙，試驗(yàn)組于10日齡進(jìn)行斷喙

5、。于斷喙后12h、1d、3d、5d、7d隨機(jī)從每組每重復(fù)抽取1只，心臟采血致死。取胸腺、脾臟、法氏囊，稱重后保存于-70℃冰箱用于流式細(xì)胞儀分析免疫器官細(xì)胞周期、增殖指數(shù)及凋亡率。結(jié)果表明：（1）對照組和試驗(yàn)組的免疫器官淋巴細(xì)胞內(nèi)都是以G1期為主，其余少量為S期和M期，且試驗(yàn)組免疫器官淋巴細(xì)胞內(nèi)G1期細(xì)胞數(shù)量均比對照組高，S、M期細(xì)胞數(shù)量比對照組低；試驗(yàn)組胸腺細(xì)胞內(nèi)在斷喙后1d、3d出現(xiàn)異倍體：脾臟淋巴細(xì)胞內(nèi)G1期細(xì)胞數(shù)量在斷喙后1d表

6、現(xiàn)出顯著性差異（P<0．05）；S期細(xì)胞數(shù)量在3d時(shí)低于對照組，且差異顯著（P<0．05），在斷喙后1d和3d出現(xiàn)異倍體。（2）試驗(yàn)組雛雞免疫器官淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)均比對照組低。胸腺細(xì)胞增殖指數(shù)在斷喙后3d時(shí)差異顯著（P<0．05）；脾臟淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)在斷喙后3d、5d時(shí)差異顯著（P<0．05）；法氏囊淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)在斷喙后3d時(shí)差異顯著（P<0．05）。（3）斷喙后雛雞胸腺、脾臟、法氏囊淋巴細(xì)胞的凋亡率均比對照組高，胸腺淋巴細(xì)胞凋亡

7、率斷喙后5d時(shí)差異顯著（p<0．05）；雛雞斷喙應(yīng)激后胸腺細(xì)胞和法氏囊淋巴細(xì)胞凋亡率呈上升-下降-上升-下降的趨勢，在7d時(shí)凋亡率最低；脾臟淋巴細(xì)胞的凋亡率先上升后下降，在斷喙后3d時(shí)凋亡率最高，7d時(shí)未檢測到凋亡細(xì)胞。 試驗(yàn)三斷喙應(yīng)激對雛雞免疫器官內(nèi)相關(guān)凋亡蛋白表達(dá)的影響 采用1日齡的健康綠殼蛋雞240只，隨機(jī)分為2組（對照組和試驗(yàn)組），每組4個(gè)重復(fù)，每重復(fù)30只雞。對照組不斷喙，試驗(yàn)組于10日齡進(jìn)行斷喙。于斷喙后12

8、h、1d、3d、5d、7d隨機(jī)從每組每重復(fù)抽取1只。取胸腺、脾臟、法氏囊，稱重后保存于中性福爾馬林溶液中用于免疫組織化學(xué)測定免疫器官淋巴細(xì)胞相關(guān)凋亡蛋白（Bcl-2和Bax）表達(dá)量的變化。結(jié)果表明：斷喙應(yīng)激沒有影響B(tài)cl-2和Bax蛋白在免疫器官內(nèi)的表達(dá)部位；降低了Bcl-2在免疫器官淋巴細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量，胸腺細(xì)胞、脾臟淋巴細(xì)胞、法氏囊淋巴細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量分別在斷喙后1d、3d、1d時(shí)表達(dá)量最低；提高了Bax在免疫器官淋巴細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量，在