白藜蘆醇對雛雞免疫應(yīng)激的調(diào)控及其機制研究.pdf

1、本論文通過飼養(yǎng)試驗和體外細胞培養(yǎng)試驗，研究了白藜蘆醇（RES）對免疫應(yīng)激雛雞生長性能及免疫功能的調(diào)控作用及其分子機制，并探討了RES通過NF-κB信號通路對免疫應(yīng)激調(diào)控的細胞信號傳導(dǎo)機制。
　　試驗一:研究不同添加水平的RES對生產(chǎn)中頻繁疫苗免疫的雛雞生長性能的調(diào)控作用及其機制。選1日齡蛋雛雞300只，隨機分為5個處理組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)10只雞。陰性對照組不免疫且飼喂基礎(chǔ)日糧，RES試驗組每周免疫一次且在基礎(chǔ)日糧基礎(chǔ)上添加

2、0,200,400和800 mg/kg的RES。試驗期40天。結(jié)果表明：免疫處理組的平均日增重（ADG）顯著小于不免疫的對照組。隨著RES添加量的增加，免疫組雛雞的ADG、血清IGF-1及肝細胞中的生長激素受體(GHR) mRNA表達量呈二次曲線增加。肝細胞中NF-κB mRNA表達量、脾臟細胞中的IL-1β和TNF-αmRNA表達量隨著RES水平增加線性降低。小結(jié)：生產(chǎn)中頻繁的疫苗免疫使雛雞的生長性能受到抑制。在雛雞日糧中添加400

3、mg/kg的RES能有效緩解免疫應(yīng)激誘導(dǎo)的生長抑制。RES緩解免疫應(yīng)激誘導(dǎo)的生長抑制的可能機制是：RES下調(diào)了NF-κB的表達及激活，從而使炎性因子TNF-α及IL-6的轉(zhuǎn)錄及表達量降低，緩解了機體炎性反應(yīng)并促進了動物生長。
　　試驗二:研究不同添加水平的RES對生產(chǎn)中頻繁疫苗免疫的雛雞免疫機能的調(diào)控作用及其機制。試驗設(shè)計同試驗一。結(jié)果表明：免疫組與對照組相比，雞新城疫(ND)、禽流感病毒H5(H5)和禽流感病毒H9(H9)抗體滴

4、度及血清IgG水平顯著升高而CD4+/CD8+比率顯著降低，胸腺和法式囊細胞凋亡顯著增加，且胸腺細胞中死亡受體Fas的配體FasL的相對表達顯著增加。隨著RES添加量的增加，CD4+/CD8+比率、ND和H5抗體滴度以及胸腺淋巴細胞增殖指數(shù)和胸腺相對重量呈二次曲線增加而脾臟和法氏囊淋巴細胞凋亡率線性降低。FasL表達量線性降低。小結(jié)：生產(chǎn)中頻繁的疫苗免疫提高了機體再次免疫應(yīng)答抗體IgG水平卻促進了免疫器官的細胞凋亡，使機體免疫機能受到抑

5、制。在雛雞日糧中添加400 mg/kg的RES能有效緩解免疫器官細胞凋亡并增強免疫系統(tǒng)功能，提高血清中ND、H5、 H9、IgM抗體水平及CD4+/CD8水平。RES緩解免疫應(yīng)激誘導(dǎo)的免疫抑制的可能機制是：RES通過抑制FasL促凋亡基因的表達從而減少了免疫應(yīng)激誘導(dǎo)的淋巴細胞凋亡，促進了免疫器官細胞的發(fā)育和免疫功能。
　　試驗三:研究RES對LPS誘導(dǎo)的雛雞免疫應(yīng)激的調(diào)控作用及其機制。通過給肉仔雞在7日齡、21日齡和36日齡時注射

6、LPS建立免疫應(yīng)激模型，進一步探索RES對LPS免疫應(yīng)激誘導(dǎo)的肉仔雞生長性能和免疫功能的調(diào)控作用及其機制。選用1日齡肉仔雞120只，隨機分為4個處理組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)5只雞。采用2×2因子設(shè)計：日糧類型(400 mg/kgRES或0 mg/kgRES)和免疫應(yīng)激(注射LPS或生理鹽水)。試驗期49天。結(jié)果表明：在LPS刺激情況下，日糧RES添加使肉仔雞血清中皮質(zhì)酮水平顯著降低，肉仔雞生長后期以及平均日增重顯著增加，料肉比顯著降低

7、。LPS免疫應(yīng)激情況下日糧添加400 mg/kgRES使免疫應(yīng)激肉仔雞胸腺指數(shù)顯著增加，胸腺和肝臟細胞凋亡率顯著降低；血清中SOD和T-AOC顯著增加， MDA顯著降低；血清中IgG和C3含量顯著增加；淋巴細胞轉(zhuǎn)化率和淋巴細胞亞群CD4/CD8比例顯著增加。小結(jié)：頻繁的LPS免疫應(yīng)激使肉仔雞的生長性能和免疫功能受到抑制。免疫應(yīng)激情況下，在日糧中添加RES能夠減少肝臟細胞的氧化損傷和凋亡，提高肝臟代謝功能，改善肉仔雞生長性能。日糧添加RE

8、S降低了免疫應(yīng)激肉仔雞淋巴細胞凋亡，增加免疫器官指數(shù)，使血清中IgG和C3含量增加，淋巴細胞轉(zhuǎn)化率和淋巴細胞亞群CD4/CD8比例增加，增加機體的特異性免疫功能。
　　試驗四:體外培養(yǎng)雛雞外周血淋巴細胞研究不同水平的RES（0μg/mL;20μg/mL;40μg/mL;80μg/mL）對LPS刺激的雛雞外周血淋巴細胞NF-κB信號通路的調(diào)控。結(jié)果表明：LPS刺激顯著降低了淋巴細胞活性并增加了淋巴細胞凋亡率和凋亡蛋白的表達，并增加了

9、外周血淋巴細胞培養(yǎng)液中TNF-α及ROS的表達水平。40μg/mL和80μg/mLRES添加顯著降低了淋巴細胞凋亡率并增加了淋巴細胞活性。RES添加使淋巴細胞培養(yǎng)液中NF-κB的活性顯著降低，IκB蛋白的表達水平顯著增加。40μg/mL和80μg/mLRES添加使外周血淋巴細胞培養(yǎng)液中中Fas和Caspase-8凋亡蛋白的表達量顯著降低。小結(jié)：RES對NF-κB信號通路有負調(diào)控作用，從而緩解機體炎性反應(yīng)和淋巴細胞凋亡。
　　結(jié)論：