臨床微生物標(biāo)本采集

1、臨床微生物標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)與處理,——王健,微生物標(biāo)本規(guī)范化采集的重要性,正確采集、處理與運(yùn)送細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本直接關(guān)系到致病菌培養(yǎng)的正確性與陽(yáng)性率的高低，是臨床細(xì)菌檢驗(yàn)成功的關(guān)鍵。標(biāo)本質(zhì)量的好壞直接影響診斷結(jié)果的正誤，不當(dāng)?shù)臉?biāo)本可導(dǎo)致假陰性、假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)，因此標(biāo)本采集與處理的規(guī)范化是準(zhǔn)確、及時(shí)地向臨床提供重要的臨床感染信息的基礎(chǔ)。好的微生物檢驗(yàn)標(biāo)本可提升實(shí)驗(yàn)室工作效率及病患照顧質(zhì)量，降低醫(yī)療成本。,臨床標(biāo)本的分類,,血培養(yǎng),采集

2、的臨床指征一般患者出現(xiàn)以下一種體征時(shí)可作為采血的重要指征：,發(fā)熱（≥38℃）或（低溫≤36℃）寒戰(zhàn)白細(xì)胞增多（特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細(xì)胞）皮膚黏膜出血、昏迷、多器官衰竭、血壓降低、CRP升高及呼吸快特殊患者（如血液病）出現(xiàn)粒細(xì)胞減少（成熟的多形核白細(xì)胞＜1000×109/L）、血小板減少等，或同時(shí)具備上述幾種體征的臨床可疑菌血癥應(yīng)采集血培養(yǎng)新生兒菌血癥，進(jìn)行血培養(yǎng)同時(shí)應(yīng)增加尿液和腦脊液培養(yǎng)對(duì)入院危重感

3、染患者在未進(jìn)行系統(tǒng)性抗菌藥物治療之前，應(yīng)及時(shí)采集血培養(yǎng),采血量：,血液中細(xì)菌和真菌的檢出率依賴于足夠的血量，但并非越多越好，超過(guò)一定數(shù)量的采血量會(huì)稀釋培養(yǎng)基內(nèi)的肉湯，使肉湯無(wú)法有效中和血中的抑制物質(zhì)（補(bǔ)體、抗體、抗生素）。血量與培養(yǎng)液的比例以 1：10為宜，但對(duì)已接受抗菌藥物長(zhǎng)達(dá) 10 天以上的患者， 采血量與培養(yǎng)基的比例應(yīng)為 1：20 或大于 1：20 為宜。 成人　10~15ml 兒童　3~5ml

4、 嬰幼兒　1~2ml 骨髓　1~2ml,,,標(biāo)本采集,常規(guī)消毒病人采血部位，同時(shí)消毒接種瓶口，抽一定量血液，將血液接種在瓶?jī)?nèi)（一瓶需氧，一瓶厭氧），輕輕搖勻。,采集要點(diǎn)：,1.每一對(duì)血培養(yǎng)應(yīng)當(dāng)從身體的不同部位采集2. 用來(lái)培養(yǎng)的血應(yīng)當(dāng)是靜脈血而不是動(dòng)脈血3. 盡量避免從靜脈導(dǎo)管中抽血4. 皮膚和瓶子的消毒非常關(guān)鍵,采集時(shí)機(jī)：,應(yīng)在病人發(fā)病初期或發(fā)熱高峰到來(lái)之前采集。一般情況下應(yīng)盡量選擇在使用抗菌藥之前進(jìn)行，在

5、24h內(nèi)采集2-3份血培養(yǎng)（一次靜脈采血注入到多個(gè)培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單份血培養(yǎng)）。如患者已經(jīng)應(yīng)用抗菌藥物進(jìn)行治療，應(yīng)在下一次用藥之前采血培養(yǎng)。,采血套數(shù),檢測(cè)靈敏度,血培養(yǎng)瓶的運(yùn)送,采集后的血培養(yǎng)瓶應(yīng)立即送檢（室溫<24h）如不能立即送檢，需室溫保存，切勿冷藏,上呼吸道標(biāo)本,采集的臨床指征,上呼吸道標(biāo)本懷疑上呼吸道感染時(shí)如發(fā)熱、咽部疼痛等，尤其是懷疑化膿性鏈球菌感染或念珠菌感染時(shí)進(jìn)行咽拭子培養(yǎng)。,標(biāo)本采集,,采集注意事項(xiàng),采集標(biāo)本

6、應(yīng)于抗生素治療前，以晨起進(jìn)食前為宜，取樣前數(shù)小時(shí)內(nèi)不得用消毒藥物漱口或涂抹病灶部位。取樣部位應(yīng)準(zhǔn)確，反復(fù)涂抹數(shù)次，避免接觸口腔、舌粘膜和唾液?？谇槐砻娼M織的標(biāo)本不適于細(xì)菌學(xué)評(píng)價(jià)。咽拭子禁用于會(huì)厭發(fā)炎患者。檢查白喉棒狀桿菌，應(yīng)取疑為白喉假膜邊緣部的分泌物；扁桃體部位標(biāo)本取扁桃體小窩處為宜。,下呼吸道（痰培養(yǎng)）標(biāo)本,,采集的臨床指征,咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常見(jiàn)的癥狀?？┭ㄅ菽?、鮮血和痰中帶血等呼吸困難，呼吸急促或哮喘，

7、常伴有胸痛發(fā)熱伴WBC增高尤其是中性粒細(xì)胞或CRP明顯增高胸部影像學(xué)檢查提示感染可能,標(biāo)本采集,,自然咳痰法,以晨痰為佳。采集標(biāo)本前應(yīng)用清水漱口或用牙刷（不用牙膏）清潔口腔和牙齒，有假牙者應(yīng)取下假牙（為減少口腔正常菌群污染標(biāo)本），用力咳出呼吸道深部的痰（非后鼻部分泌物、非唾液），痰液直接吐入無(wú)菌容器中，盡快送檢。否則有的細(xì)菌（如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌）在外界可能死亡。不能及時(shí)送檢的標(biāo)本，室溫保存≤2h。,標(biāo)本質(zhì)量,合格標(biāo)本的判斷標(biāo)

8、準(zhǔn),外觀：觀察顏色、粘度、有無(wú)血絲或膿。若標(biāo)本為水狀且很明顯是唾液，則應(yīng)拒收。為了判定是否來(lái)自下呼吸道的痰，需檢查是否為合格的痰標(biāo)本：WBC>25個(gè)/低倍視野，鱗狀上皮細(xì)胞<10個(gè)/低倍視野為合格標(biāo)本。采集合格標(biāo)本對(duì)細(xì)菌的診斷極為重要。,注意事項(xiàng),在抗生素應(yīng)用前采集痰標(biāo)本對(duì)于細(xì)菌性肺炎，痰標(biāo)本送檢每天1次，連續(xù)2~3天；不建議24h內(nèi)多次采集，除非痰液外觀形狀改變懷疑分枝桿菌感染者，應(yīng)連續(xù)收集3天清晨痰液送檢，也可收集

9、24h痰液。,痰培養(yǎng)標(biāo)本的運(yùn)送,標(biāo)本采集后正確蓋好，防止泄露或容器外部留有殘留物采集后的標(biāo)本應(yīng)立即送往實(shí)驗(yàn)室（室溫≤2ｈ）申請(qǐng)抗酸桿菌檢查或真菌培養(yǎng)的痰液如不能及時(shí)送檢，應(yīng)放入4℃冰箱，以免雜菌生長(zhǎng)，但存放時(shí)間應(yīng)不超過(guò)24ｈ懷疑嗜血桿菌或肺炎鏈球菌感染時(shí)，標(biāo)本應(yīng)立即送檢，切忌冷藏,中段尿培養(yǎng),采集的臨床指征,1. 尿痛、尿急、尿頻等典型的尿路感染癥狀2. 出現(xiàn)血尿或膿尿3. 泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前4. 留置導(dǎo)尿管時(shí)間太長(zhǎng)，患者出

10、現(xiàn)發(fā)熱5. 尿常規(guī)中WBC高和（或）亞硝酸鹽陽(yáng)性 尿感根據(jù)感染部位分為：上尿路感染（腎盂腎炎） 下尿路感染（膀胱炎、尿道炎)

11、 男性可出現(xiàn)前列腺炎,標(biāo)本采集,一般認(rèn)為來(lái)自正常尿液是無(wú)菌的，而尿道口有正常菌群寄生，標(biāo)本的采集必須無(wú)菌操作。1. 女性：成年女性外陰部以肥皂水清洗，再用無(wú)菌水洗凈，用無(wú)菌紗布擦拭，然后排尿棄去前段尿，留取中段尿 3 毫升，置于無(wú)菌容器內(nèi)。2. 男性：用肥皂水清洗尿道口，后用清水洗后取中段尿。包皮過(guò)長(zhǎng)者為防止包皮內(nèi)細(xì)菌污染，可將包皮翻開(kāi)沖洗后再取中段尿。3. 兒童：采集中段尿較困難。如尿中細(xì)菌明顯增多，可高度懷疑尿

12、路感染，無(wú)細(xì)菌則可否定，細(xì)菌數(shù)中度增加時(shí)，有必要用膀胱穿刺術(shù)或?qū)虿杉蛞骸?留取中段尿,簡(jiǎn)單易行，又無(wú)感染的危險(xiǎn)。通常取晨起第一次尿送檢。尿液在膀胱內(nèi)停留6-8h以上（給細(xì)菌足夠的繁殖時(shí)間）尿標(biāo)本必須用無(wú)菌帶螺帽的容器采集，否則為拒收標(biāo)本。,腦脊液培養(yǎng),,采集的臨床指征,在生理情況下，血液和腦脊液之間有血腦屏障，阻礙各種微生物通過(guò)血液進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。因此正常人的腦脊液是絕對(duì)無(wú)菌的。當(dāng)懷疑結(jié)核性、化膿性、流行性、霉菌性腦膜炎時(shí)進(jìn)行

13、腦脊液培養(yǎng)。,嚴(yán)格無(wú)菌操作,標(biāo)本采集,以 70%酒精或 2%碘酊消毒背部下方，并麻醉之，然后以一特制通管針，輕輕的由第三與第四腰椎間的中線部位穿刺入脊髓蛛網(wǎng)膜，采集約 3-5ml 腦脊液于 3 支無(wú)菌試管中，每支試管至少 1-2ml，然后馬上將第 2 根（或第 1 根）送至實(shí)驗(yàn)室。做腦脊液培養(yǎng)時(shí)，建議同時(shí)做血培養(yǎng)。腰穿時(shí)必須作徹底消毒和無(wú)菌操作。,腦脊液標(biāo)本的運(yùn)送,采集后應(yīng)正確蓋好，防止泄漏或容器外部留有殘留物。常溫立即送檢，實(shí)驗(yàn)室收到

14、標(biāo)本后應(yīng)立即接種。腦脊液標(biāo)本送檢的理想時(shí)間為 15 分鐘內(nèi)，半小時(shí)送檢是可接受的，如果送檢時(shí)間超過(guò) 1 小時(shí)，則會(huì)影響結(jié)果。注：某些細(xì)菌具有自溶酶，放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)易自溶死亡，因此，標(biāo)本應(yīng)立即送檢，并且保溫（禁止放冰箱，因腦膜炎雙球菌遇冷死亡）,穿刺液培養(yǎng),,穿刺液主要包括：,膽汁 胸水 腹水 心包液 關(guān)節(jié)液 腦脊 液在正常人體中，上述

15、體液均是無(wú)菌的。有感染的情況下檢出的細(xì)菌，在排除污染后應(yīng)視為病原菌，及時(shí)給予正確的治療。,采集的臨床指征,臨床上出現(xiàn)胸腔積液（胸水）、腹腔積液（腹水）、關(guān)節(jié)液、心包腔積液、鞘膜腔積液等情況時(shí)，多因漿膜腔發(fā)生循環(huán)障礙、炎癥、癌浸潤(rùn)等病變，腔內(nèi)液體滲漏增加所致。,標(biāo)本采集,一般由臨床醫(yī)師在無(wú)菌操作下穿刺抽取或外科手術(shù)采集標(biāo)本。?。怠保埃恚煊跓o(wú)菌肝素抗凝管中（０.５ｍｇ肝素可抗凝５ｍｌ標(biāo)本），充分混勻后立即送檢，不能有凝塊。,,大便培養(yǎng),采

16、集指征,腹瀉病人應(yīng)盡量在急性期（３天內(nèi)）、在用抗生素前留取標(biāo)本以提高病原菌的檢出率，陳舊標(biāo)本影響檢出陽(yáng)性率。連續(xù)出現(xiàn)膿血、黏液、糊狀、米泔樣等形狀異常的糞便。疑似細(xì)菌性食物中毒患者，大便培養(yǎng)可作為一個(gè)輔助檢查手段。懷疑感染傷寒沙門菌、細(xì)菌性痢疾的患者。胃腸道感染懷疑霍亂等弧菌感染者。,標(biāo)本采集,無(wú)需特別準(zhǔn)備，但最好不要住院超過(guò)３ｄ，在使用抗生素前采集最佳。自然排便后，可挑取新鮮糞便中有膿血、黏液部分的糞便約２～３ｇ，液體糞便取

17、絮狀物２～３ｍｌ，糊狀、米泔樣等性狀異常的糞便盛于無(wú)菌的容器中或置于保存液中送檢。,大便標(biāo)本的運(yùn)送,標(biāo)本采集后應(yīng)正確蓋好，防止泄漏或容器外部留有殘留物。糞便標(biāo)本：室溫 1 小時(shí)內(nèi)送至。直腸拭子（procto swab）：室溫 1 小時(shí)內(nèi)送至。高度懷疑霍亂弧菌感染的標(biāo)本室溫 1 小時(shí)內(nèi)送至，運(yùn)送必須符合特殊標(biāo)本的安全要求。堿性蛋白胨水：霍亂弧菌增菌培養(yǎng),培養(yǎng)基的選擇,痰標(biāo)本（血、巧） 傷口分泌物、膿汁（血、MAC）淋