常見微生物標(biāo)本的采集保存與送檢

1、2024/3/20,1,常見微生物標(biāo)本的采集、保存與送檢,茂名市CDC流行病學(xué)培訓(xùn)班 麥充志 2011、3,2024/3/20,2,碗與筷子的關(guān)系,2024/3/20,3,標(biāo)本采集,采集時(shí)間----何時(shí)采采集種類----采什么采集方法----怎么采采集數(shù)量----采多少,2024/3/20,4,怎么采,樣品采集程序 采樣用物品準(zhǔn)備 采樣程序方法 采樣記錄

2、 樣品編號(hào) 樣品保存 樣品送檢,2024/3/20,5,采多少,所有標(biāo)本在采集時(shí)立即分裝，一式 N 份(不同檢驗(yàn)項(xiàng)目、重復(fù)實(shí)驗(yàn)、其它實(shí)驗(yàn)室復(fù)核、留樣),2024/3/20,6,,樣本采集的一般需要量 樣品種類 檢驗(yàn)?zāi)康?樣品量 飲用水 全分析及致病菌 >5

3、 l 液體食品 致病菌或毒物分析 可疑食物>200ml 固體食品 致病菌或毒物分析 可疑食物>200g 嘔吐物 致病菌或毒物分析 >50g(ml) 洗胃液 致病菌或毒物分析 >200ml

4、 腹瀉物 致病菌或毒物分析 >50g(ml) 血液 病原分離、抗體分析 >5ml 腦脊液 病原分離 >2ml 皮損分泌物 病原分析 滅菌生理鹽水浸泡棉簽涂取

5、,2024/3/20,7,標(biāo)本標(biāo)簽內(nèi)容,最小包裝（每個(gè)標(biāo)本）每個(gè)包裝箱每批樣本后要附上一個(gè)樣本清單，詳細(xì)列出此批樣本的名稱、狀態(tài)和注意事項(xiàng)。,2024/3/20,8,,樣本編號(hào)——唯一性樣本來源——從什么物質(zhì)、材料中采集的，如病理采集的肝臟就可標(biāo)注為某某患者肝臟樣本數(shù)量——包裝中樣本的數(shù)量，如：此包裝中同時(shí)采集了2塊肝臟樣本，就要標(biāo)注為2 采樣時(shí)間：采樣地點(diǎn)：采樣人：樣本處理情況：

6、抗凝劑 、運(yùn)送培養(yǎng)基、標(biāo)本狀況（開封食品）,2024/3/20,9,標(biāo)本的保存、包裝、運(yùn)送,樣品的保存—容器、介質(zhì)、溫度樣品的包裝—感染性樣本樣品的運(yùn)送—標(biāo)本應(yīng)由專業(yè)人員專人運(yùn)送，最好使用專車交接手續(xù),2024/3/20,10,怎么檢,對(duì)重大事件的毒物鑒定或樣本檢測(cè)要同時(shí)送數(shù)家具有鑒定檢驗(yàn)資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室同步開展工作，避免因?qū)嶒?yàn)室管理和技術(shù)因素對(duì)結(jié)果的影響。,2024/3/20,11,要達(dá)到有效控制疫情的目的，必須做到,早期發(fā)現(xiàn)

7、和報(bào)告可疑病例；快速的流行病學(xué)調(diào)查；實(shí)驗(yàn)室對(duì)病原體的快速確診；實(shí)施有效的控制措施。,2024/3/20,12,實(shí)驗(yàn)室診斷的目的意義,識(shí)別暴發(fā)、確定病因 確定傳染來源確定流行范圍確定傳播鏈 發(fā)現(xiàn)特殊的毒株判斷院內(nèi)交叉感染疫苗實(shí)施項(xiàng)目的考核 仲裁依據(jù),2024/3/20,13,實(shí)驗(yàn)室對(duì)病原體的快速確診依靠,技術(shù)和試劑儲(chǔ)備充分收集適當(dāng)?shù)?、足夠的?biāo)本正確的包裝和快速運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室適當(dāng)?shù)纳锇踩拖敬胧?，?/p>

8、減少疾病 進(jìn)一步擴(kuò)散的可能。,2024/3/20,14,圍繞病因假設(shè),確定檢驗(yàn)項(xiàng)目，采集標(biāo)本,專業(yè)知識(shí)、經(jīng)驗(yàn)充分物質(zhì)準(zhǔn)備高度的責(zé)任心,2024/3/20,15,在去現(xiàn)場(chǎng)之前，應(yīng)考慮到以下的問題,在進(jìn)行臨床和流行病學(xué)信息評(píng)估時(shí)，需考慮引起暴發(fā)的潛在病原體； 地方性疾病譜和流行季節(jié)譜可進(jìn)一步縮小可能的因素；同時(shí)還必須考慮到多種病原體感染可出現(xiàn)相似的臨床表現(xiàn)，因而需要采集多種類型的標(biāo)本用于定義暴發(fā)的原因。,2024/3/20

9、,16,采樣基本原則,盡早采集、根據(jù)可疑的病原體，選擇不同采集時(shí)機(jī)和標(biāo)本種類、在抗生素應(yīng)用前采集、遵守?zé)o菌操作、正確保存和運(yùn)送。容器應(yīng)密封不易碎，標(biāo)本不得污染容器的口和外壁。,2024/3/20,17,標(biāo)本種類和采集時(shí)間,血液標(biāo)本全血標(biāo)本采集血清標(biāo)本采集第一份血清應(yīng)盡早（最好在發(fā)病后7天內(nèi)）采集第二份血清應(yīng)在發(fā)病后第3～4周采集在病愈出院或死亡前采集血標(biāo)本1份,2024/3/20,18,血液標(biāo)本的采集,目的：血培養(yǎng)、分離血清

10、血培養(yǎng)：懷疑是細(xì)菌性疾病，特別是腦膜炎或疑似菌血癥的病人均要抽血。在病人高熱時(shí)可采取靜脈血3ml，注入雙相血培養(yǎng)瓶（也可用盛有30ml葡萄糖肉湯的三角瓶）內(nèi)增菌培養(yǎng)。分離血清用于抗體檢測(cè)。在疾病急性期和恢復(fù)期各采血2-3ml,2024/3/20,19,,血培養(yǎng)瓶含有0.025%SPS（聚茴香腦磺酸鈉sodium polyanethol sulfonate SPS），可以起到抗凝、抗吞噬、抗鰲合的作用；還含有樹脂、炭顆粒，可吸收血液

11、中的抗生素，提高細(xì)菌培養(yǎng)的陽性率。血量>3ml時(shí)，將血分別放入兩個(gè)血培養(yǎng)瓶，若瓶子裝血太多將降低降低陽性率。,2024/3/20,20,,用真空負(fù)壓采血管采集血液標(biāo)本5ml，室溫靜置30分鐘，1500～2000rpm離心10分鐘，收集血清于2ml無菌螺口塑料管中,2024/3/20,21,標(biāo)本種類和采集時(shí)間,呼吸道標(biāo)本上呼吸道標(biāo)本：咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液下呼吸道標(biāo)本：呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺組織

12、活檢標(biāo)本盡早采集上述標(biāo)本，發(fā)病一至兩周也可采集,2024/3/20,22,2024/3/20,23,呼吸道標(biāo)本,2024/3/20,24,拭子的選擇,應(yīng)使用頭部為合成纖維的拭子（例如，聚酯纖維），用鋁或塑料做柄。不推薦棉拭子和木柄。,2024/3/20,25,2024/3/20,26,急性呼吸道綜合癥的可疑暴發(fā),可能的病原體,白喉鏈球菌性咽炎猩紅熱,漢坦病毒肺綜合癥,百日咳嗜血流感桿菌呼吸道合胞病毒,肺鏈軍團(tuán)肺炭疽肺鼠

13、疫支原體,喉拭子血清,血清,鼻咽拭子血清,血培養(yǎng)血清痰、尿肺泡灌洗液,流感禽流感,咽拭子氣管吸取物血清,,,,,,,,,,,,2024/3/20,27,需要準(zhǔn)備的材料,運(yùn)送培養(yǎng)基、拭子、壓舌板消毒的螺旋蓋管、真空采血管、5ml注射器75%酒精、壓脈帶、記號(hào)筆等。,2024/3/20,28,運(yùn)送培養(yǎng)基的選擇,維持活力，不增菌的非營(yíng)養(yǎng)性半固體培養(yǎng)基Stuarts, Cary-Blair, Amies, STGG

14、 四種主要的運(yùn)送培養(yǎng)基。,2024/3/20,29,127C Soft aluminum wire - green cap軟金屬，易彎曲.,143C  Regular aluminum wire - orange cap男性尿道拭子,139C Double plastic swabs - red cap咽拭子、陰道拭子、傷口和皮膚,2024/3/20,30,195C Flexible twi

15、sted wire - blue capDesigned specifically for nasopharyngeal sampling. Very flexible, will bend and yield when in contact with posterior nasopharyngeal wall. Features a safe loop shaped wire tip covered with soft rayon.

16、鼻咽拭子標(biāo)本,2024/3/20,31,2024/3/20,32,Stuarts——主要成分,甘油磷酸鈉硫代硫酸鈉氯化鈣亞甲蘭瓊脂炭粉,2024/3/20,33,Stuarts運(yùn)送培養(yǎng)基,2024/3/20,34,Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基,克服在運(yùn)送腸道菌時(shí)，因這些菌含有甘油磷酸脫氫酶，造成低度氧化，使細(xì)菌能代謝而生長(zhǎng)。特別適合于運(yùn)送含弧菌的標(biāo)本。研究顯示，在28℃情況下，Cary-Blair可維持弧菌活力22天，沙

17、門氏、志賀氏菌49天；70～80℃副溶血弧菌可達(dá)35天。,2024/3/20,35,Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基,2024/3/20,36,Amies運(yùn)送培養(yǎng)基---Stuarts的改良產(chǎn)品,（含活性炭）用磷酸鹽緩沖液代替甘油磷酸鈉等,2024/3/20,37,STGG運(yùn)送保存培養(yǎng)基(Skim-milktrytone glucose glycerol, STGG）,,2024/3/20,38,鼻咽拭子插入STGG培養(yǎng)基后，可立即凍存標(biāo)

18、本。報(bào)告顯示，置冰上幾小時(shí)后再放置-70℃，肺炎鏈球菌、嗜血流感桿菌的活力仍能維持，在-20℃環(huán)境可達(dá)8周。置于-70℃的STGG中保存的鼻咽分泌物，其肺炎鏈球菌的分離率與直接接種平板相似，保存于-20℃分離率亦可接受,而4℃環(huán)境保存5天，分離率不理想。,STGG運(yùn)送保存培養(yǎng)基,2024/3/20,39,需要采集的標(biāo)本,上呼吸道感染：鼻咽拭子咽拭子血下呼吸道感染：痰標(biāo)本支氣管灌洗液胸液血,2024/3/20,40,上

19、呼吸道可能的致病菌,β-溶血性鏈球菌：A、B、C、G群鏈球菌等； 肺炎鏈球菌、嗜血流感桿菌、金黃色葡萄球菌；白喉棒狀桿菌、百日咳等,2024/3/20,41,下呼吸道感染性疾病可能的致病菌,肺炎鏈球菌嗜血流感桿菌腸球菌肺炎克雷伯氏菌β-溶血性鏈球菌軍團(tuán)菌百日咳菌屬 金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟氏菌屬假單胞菌肺炎支原體肺炎衣原體,2024/3/20,42,咽拭子的采集,對(duì)健康人群或病人密切接觸者進(jìn)行帶菌檢驗(yàn)時(shí)一般采咽

20、拭子。用無菌棉拭子擦取懸雍垂后之鼻咽部粘膜數(shù)下，應(yīng)避免接觸口腔內(nèi)其它部分，直接接種到巧克力雙抗平板或0.5%葡萄糖增菌肉湯中。,2024/3/20,43,,干采用2根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子同時(shí)擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將拭子頭浸入含3ml采樣液的螺口管中，尾部棄去，旋緊管蓋。,2024/3/20,44,咽拭采集的正確與否？,,wrong,right,2024/3/20,45,鼻拭子的采集,將1根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子輕輕插入鼻道

21、內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。取另一根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子以同樣的方法采集另一側(cè)鼻孔。上述兩根拭子浸入同一含3ml采樣液的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。,2024/3/20,46,鼻咽抽取物或呼吸道抽取物的采集,,用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。將收集器頭部插入鼻腔或氣管，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出，收集抽取的粘液，并用3ml采樣液沖洗收集器1次（亦可用小孩導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集

22、器）。,2024/3/20,47,咽漱液的采集,用10ml不含抗菌素的采樣液漱口。漱口時(shí)讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓洗液在咽部轉(zhuǎn)動(dòng)。然后將咽漱液收集于50ml無菌的螺口塑料管中。無條件的可用平皿或燒杯收集咽漱液并轉(zhuǎn)入10ml螺口采樣管中。,2024/3/20,48,深咳痰液的采集,要求病人深咳后，將咳出的痰液收集于50ml含3ml采樣液的螺口塑料管中,2024/3/20,49,呼吸道灌洗液的采集,將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入氣

23、管（約30cm深處），注入5ml生理鹽水，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液涮洗收集器1次（亦可用小孩導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集）,2024/3/20,50,常用的病毒采樣保存液成分,pH7.0～7.6的Hanks液或MEM/DMEM液或生理鹽水。在采樣液中需加入抗菌素，可用青霉素（終濃度為100U/ml）、慶大霉素（終濃度為1mg/ml）和抗真菌藥物（終濃度為2µg/ml）,2024/3

24、/20,51,病毒采樣盒,,咽拭子器具,2024/3/20,52,出血點(diǎn)滲液,接種0.5%葡萄糖增菌肉湯或直接接種含雙抗巧克力平板和血平板,接種增菌肉湯或直接接種巧克力平板和血平板,咽拭子,血液,接種血培養(yǎng)瓶,分離血清檢測(cè)IgG,涂片G染色,,,,,,,,,,,2024/3/20,53,患者站立或床上坐直，在收集前囑咐患者用開水含漱口腔；深呼吸，從深部咳痰，將痰吐入已消毒的廣口螺旋蓋管（25～50ml）內(nèi)；痰量1-2ml，如不足，應(yīng)重復(fù)

25、上述步驟。,痰標(biāo)本的采集,2024/3/20,54,接種培養(yǎng)板的選擇,根據(jù)所要檢測(cè)的目的菌而定，一般選擇兩種平板：血平板和巧克力平板鏈球菌屬：新鮮綿羊血（或馬血）平板奈瑟氏菌屬：巧克力平板（CAP），不含抗生素嗜血流感桿菌：含300µg/ml的桿菌肽的巧克力平板,2024/3/20,55,標(biāo)本種類和采集時(shí)間,腸道標(biāo)本糞便標(biāo)本采集肛拭標(biāo)本采集發(fā)病后盡可能早的采集標(biāo)本糞便標(biāo)本采集,2024/3/20,56,腸

26、道標(biāo)本的采集,采集5～10g糞便或采集肛拭子標(biāo)本置于含3～10ml無菌采樣液的螺口管中，嚴(yán)格密封,2024/3/20,57,腸道標(biāo)本的采集用具,2024/3/20,58,腦脊液標(biāo)本的采集,正常人的腦脊液是無菌的。以無菌手續(xù)通過腰椎穿刺采集腦脊液3-5ml，應(yīng)立即送檢或床邊接種。應(yīng)在35℃保溫運(yùn)送。,2024/3/20,59,腦脊液(CSF),CSF一經(jīng)采集，就應(yīng)盡快送到實(shí)驗(yàn)室，運(yùn)送過程中，標(biāo)本應(yīng)置于18～37℃的環(huán)境，不要暴露于陽光下

27、或冷凍保存。若CSF不能馬上送到實(shí)驗(yàn)室處理，延遲在幾小時(shí)之內(nèi)，可將血培養(yǎng)瓶或螺旋管蓋擰松，置35℃、5%CO2環(huán)境。,2024/3/20,60,,CSF,離心1000~2000rpm，3 ~5 min,上清（用于膠乳凝集試驗(yàn)）,沉淀 （混勻）,接種平板培養(yǎng),注：如若CSF不足1ml，不必離心，直接進(jìn)行G染色和接種培養(yǎng)。,,革蘭染色,接種血培養(yǎng),,,,,,,,,2024/3/20,61,CSF標(biāo)本的運(yùn)送和處理,最好床旁接種,涂片

28、,血培養(yǎng)瓶或2ml的0.5%葡萄糖增菌肉湯,巧克力平板或血平板,螺旋管裝CSF,,,,,,,2024/3/20,62,尸檢標(biāo)本的采集,尸檢標(biāo)本病人死亡后應(yīng)盡早進(jìn)行解剖，在嚴(yán)格按照生物安全防護(hù)的條件下，進(jìn)行尸檢主要采集肺、氣管、肝、腎、脾、心臟、腦、胃、腸、淋巴結(jié)等可疑組織標(biāo)本同時(shí)采集血標(biāo)本、分泌物或滲出物沒有條件進(jìn)行尸體解剖的，可采集呼吸道灌洗液或經(jīng)皮穿刺采集肺組織標(biāo)本,2024/3/20,63,,可疑組織標(biāo)本 每種組

29、織應(yīng)多部位取材，每一采集部位分別使用不同消毒器械，以防交叉污染；各部位應(yīng)取20～50g，淋巴結(jié)取2個(gè)。各部位標(biāo)本，一半用10％福爾馬林固定，通常所取組織塊固定于不少于5～10倍以上體積的10％福爾馬林溶液中；另一半直接放－70℃或液氮罐中保存,2024/3/20,64,,血 無菌操作采集死者血液5ml，其2.5ml置無菌玻璃管中，使血球沉淀，吸出血清分泌物或滲出物： 用滅菌棉棒擦拭局部，采集分泌物后，裝入放有保存液的試管中,

30、2024/3/20,65,其他標(biāo)本,出血點(diǎn)瘀斑胸水肺活檢標(biāo)本,2024/3/20,66,,出血點(diǎn)、瘀斑：可挑取出血點(diǎn)、瘀斑進(jìn)行培養(yǎng)和涂片,2024/3/20,67,出血點(diǎn)、瘀斑滲出液,以75%酒精消毒局部皮膚(切忌用碘酒消毒，因其具有滲透作用殺死出血點(diǎn)內(nèi)細(xì)菌)，用無菌針頭挑破出血點(diǎn)或瘀斑，輕輕地?cái)D出組織液。用無菌毛吸管吸取滲出液直接接種到血（和巧克力）平板上做分離培養(yǎng)，也可將滲出液涂片，作革蘭氏染色鏡檢。,2024/3/20

31、,68,胸水、肺組織活檢標(biāo)本,胸水 在B超定位下進(jìn)行胸腔穿刺，抽取胸水5ml，置于無菌的塑料螺口管中肺組織活檢標(biāo)本 在超聲或X線定位下，經(jīng)皮穿刺取肺組織活檢標(biāo)本，置于含3ml采樣液的塑料螺口管中,2024/3/20,69,標(biāo)本保存,用于病毒分離和核酸檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)盡快送樣進(jìn)行檢測(cè)24小時(shí)內(nèi)能檢測(cè)的標(biāo)本可置于4℃保存24小時(shí)內(nèi)無法檢測(cè)的標(biāo)本則應(yīng)置于-70℃或以下保存如無－70℃保存條件，則于－20℃冰箱暫存血清可在4℃

32、存放3天、-20℃以下長(zhǎng)期保存。標(biāo)本運(yùn)送期間應(yīng)避免反復(fù)凍融,2024/3/20,70,標(biāo)本送檢程序,一般應(yīng)立即送檢，擱置時(shí)間過久，會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果。如路途較遠(yuǎn)，應(yīng)予冷藏保存送檢。但有些標(biāo)本(如懷疑流腦)在送檢途中應(yīng)保存在保溫瓶中(37℃)或密封包裝好；放在貼身內(nèi)衣內(nèi)保溫，盡快送檢。不同疾病的標(biāo)本按照相關(guān)疾病的送檢程序進(jìn)行送檢,2024/3/20,71,標(biāo)本分析前的質(zhì)量控制,標(biāo)本采取與運(yùn)送是否正確，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果影響很大，國(guó)內(nèi)權(quán)威機(jī)構(gòu)的一次

33、調(diào)查，目前各級(jí)醫(yī)療單位88%的性病檢驗(yàn)標(biāo)本由臨床醫(yī)師采取，經(jīng)檢查，采取標(biāo)本的合格率僅為46%。,2024/3/20,72,,分析前的質(zhì)量控制是實(shí)驗(yàn)室全面質(zhì)量控制的重要組成部分和基礎(chǔ)，也就是說，實(shí)驗(yàn)室要想獲得準(zhǔn)確、可靠及對(duì)臨床應(yīng)用有價(jià)值的可靠檢測(cè)結(jié)果，必須進(jìn)行分析前的質(zhì)量控制，認(rèn)識(shí)和控制分析前的因素，不僅是實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的努力方向，也有賴于多部門的配合。,2024/3/20,73,,包括醫(yī)師正確選擇檢驗(yàn)項(xiàng)目及化驗(yàn)申請(qǐng)、病人準(zhǔn)備、樣本采集、