人乳頭瘤病毒hpv核酸檢測對比分析匯編

1、人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測,,內(nèi) 容,HPV與宮頸癌宮頸癌檢測方法比較HPV核酸檢測方法學比較臨床使用,宮 頸 癌,婦科第二大癌癥每年約有20余萬婦女死于宮頸癌新發(fā)病: 全球---50萬/年 我國---13.2萬/年,姓名：哈拉爾德·楚爾·豪森國籍：德國民族：日耳曼課題：發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒（HPV）引發(fā)宮頸癌成績：獲得2008年度諾貝爾生理學或醫(yī)學獎,Hara

2、ld zur Hausen,宮 頸 癌,什么是HPV？,Human Papilloma virus 人乳頭瘤病毒雙鏈DNA無包膜病毒廣泛分布于高等脊椎動物 定向感染皮膚及粘膜的復層鱗狀上皮,HPV病毒電鏡照片,,,逆轉(zhuǎn)錄區(qū)域包括控制病毒基因組復制的基因序列,E6、E7為兩種致癌蛋白編碼，它們是高危型HPV導致細胞變性的主要原因,E1、E2、E4和E5負責病毒復制,L1、L2為兩種病毒外殼蛋白編碼在預(yù)防HPV的疫苗中使用了L

3、1,HPV的類型,已經(jīng)鑒定的乳頭狀瘤病毒有200多種與人有關(guān)的約125種30-40種感染生殖道低危型：HPV6、11、42、43、44等中間型：HPV31、33、35、39、51、52、58、59、68高危型：HPV16、18、45、56等臨床最重要的型：6、11、16、18、31、33、35、38型8個亞型,HPV感染,HPV感染的途徑和危險因素,性傳播直接皮膚接觸母嬰傳播,性行為混亂免疫抑制吸煙其他STD協(xié)

4、同感染口服避孕藥,HPV感染率與發(fā)病率,HPV感染與宮頸癌發(fā)病率變化圖，Int J Cancer 1993,53:919,HPV感染的不同階段,宮頸癌的癌前病變(CIN),CIN = Cervical Intraepithelial Neoplasia宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變,CIN,,宮頸不典型增生,宮頸原位癌：宮頸上皮細胞發(fā)生癌變，但癌變未突破基底膜、間質(zhì)無浸潤。,,輕度（CINⅠ級）：病變局限在上皮層的1／3內(nèi),中度（CINⅡ級）：

5、病變局限在上皮層的下2／3,重度（CINⅢ級）：病變幾乎累及全部上皮層，僅 剩1－2 層表面的正常 鱗狀上皮,,宮頸上皮細胞部分或大部分被不同程度異型細胞所替代,,定義,宮頸癌的癌前病變(CIN),專家共識,宮頸癌的“元兇”就是高危型HPV感染高危型HPV感染是宮頸癌的必要條件沒有HPV感染，就沒有宮頸癌防治HPV感染，就是防治宮頸癌,1995年，國際

6、癌癥研究協(xié)會認為,高危固定價HPV的持續(xù)性感染是宮頸癌的主要病因,宮頸癌,感染HPV病毒? CIN?早期浸潤癌,唯一 知道病因的癌癥唯一 可以通過早期干預(yù)阻斷的癌癥,,5-15年,內(nèi) 容,HPV與宮頸癌宮頸癌檢測方法比較HPV核酸檢測方法學比較臨床使用,,分子水平,細胞水平,組織水平,,,宮頸癌檢測方法學發(fā)展過程,1982年,醋酸、碘液肉眼檢測靈敏度為70.9%特異度為74.3%,1996年,新

7、柏氏TCT靈敏度為80.8%特異度為 51-60%,2000年,HPV核酸檢測靈敏度為98.6%特異度為99%,巴氏涂片靈敏度為50%以下特異度為？%,1941年,,宮頸癌篩查發(fā)展史,組織學檢測,肉眼觀察 陰道鏡觀察 組織檢查優(yōu)點： 操作簡單，價格低廉， 適宜作初步篩查； 缺點： 準確率低，人員素質(zhì) 要求高，病人痛

8、苦程度大。,細胞學檢測,傳統(tǒng)巴氏涂片,液基細胞學,傳統(tǒng)巴氏涂片（CV） 液基薄層細胞學技術(shù)(TCT)自動細胞學檢測系統(tǒng)（LCT）計算機輔助細胞檢測系統(tǒng)（CCT）,細胞學檢測的假陰性,液基細胞學檢測假陰性結(jié)果高達20%水平差的地方更高原因分析：1、視野局限 2、人為因素 1）取標本、片子制備 2）技

9、術(shù)差異 3）耐心、責任心,細胞學檢測的假陽性,1、 凹空細胞是HPV 感染的主要形 態(tài)學改變，但不是特異性改變2、 HPV正在清除階段,細胞學檢測的性價比低,TCT陰性 要求每年做同樣的檢查HPV陰性 可以把篩查時間延長到3-5年,衛(wèi)生部《宮頸癌篩查及早診早治指南》,核酸檢測,直接檢查導致宮頸癌的元兇---HPV病毒靈敏度高，特異性好操作簡便，可作為療效評估

10、 和監(jiān)測指標,宮頸癌篩查三方案,最佳方案：HPV核酸檢測+液基細胞,基本方案：醋酸白實驗,一般方案：HPV核酸檢測+傳統(tǒng)巴氏涂片,中國癌癥研究協(xié)會推薦方法,內(nèi) 容,HPV與宮頸癌宮頸癌檢測方法比較HPV核酸檢測方法學比較臨床使用,HPV第一代核酸檢測產(chǎn)品,產(chǎn)品：HC2、港龍13型原理：雜交捕獲技術(shù)特點：檢測核酸、不分型、不能科學定量、檢測時間長,HPV核酸第二代檢測產(chǎn)品,產(chǎn)品：凱普21型、亞能2

11、3型、透景26型、達安19型、港龍29型原理：膜條雜交、液相雜交特點：可以分型，而且高低危都能做需要雜交、時間長。5-10個小時不等。開放式雜交、極易導致實驗室生物污染。結(jié)果需肉眼判讀，增加人為誤差。不能定量,HPV核酸第三代檢測方法,產(chǎn)品：上海之江13型分型檢測試劑原理：分別采用HPV13種型別的特異性引物及 熒光探針，應(yīng)用PCR+Taqman技術(shù)，對

12、 HPV13種型的特異性核酸片段進行分型 定量檢測。特點： 分型、定量、快捷、安全,優(yōu)勢一：分型,HPV59,IC,高危13型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68,,優(yōu)勢二：快捷,,上機檢測,,,30min,60min,30min,,2小時！,優(yōu)勢三：安全,,,,,,之江： 封閉式實時熒光PCR 無需洗滌

13、 減少污染,傳統(tǒng)膜條雜交： 反復洗滌 操作繁瑣 污染幾率增加,優(yōu)勢四：定量（唯一）,3、便于文章的發(fā)表。,1、宮頸病毒載量和CIN分期呈正相關(guān)。,2、用于對病程的觀察和療效的評估。,,5萬IU,1萬 IU,傳統(tǒng)方法為什么不能定量？,,一、標本量采集不準確。,二、上皮細胞過少，也會出現(xiàn)假陰性的結(jié)果,,,5萬IU/10個,1萬 IU/2個,之江的定量方法—科學,1、MNBH是人單拷貝基因-----測MNBH基因的數(shù)量

14、相當于檢測取了多少個上皮細胞,2、如果沒有檢測出MNBH基因，或MNBH量太少?？梢员苊饧訇幮越Y(jié)果,內(nèi) 容,HPV與宮頸癌宮頸癌檢測方法比較HPV核酸檢測方法學比較臨床使用,HPV檢測結(jié)果的用途,篩查：與細胞學檢測配合確定篩查頻率和周期，確保早期發(fā)現(xiàn)，及時干預(yù)。分流：根據(jù)篩查結(jié)果，將高危人群和患者群進行分流，制定不同的干預(yù)、治療方案。隨診：根據(jù)HPV結(jié)果的變化情況，判斷治療效果和病情轉(zhuǎn)歸。,HPV檢測送檢流程,宮頸刷

15、、保存液及取樣示意圖,,,,,,,HPV檢測后處理,HPV基因分型檢測,常規(guī)篩查,液基細胞學檢查,根據(jù)最后結(jié)果按ASCCP指南處理,,,,,,,,,陽性,正常,CINⅠ,CINⅡ、Ⅲ,陰性,1年后重復HPV檢測和細胞學檢查,半年后重復HPV檢測和細胞學檢查或陰道鏡檢查,陰道鏡檢查、多點活檢,,,,HPV感染的治療,通過治療HPV 感染達到防治宮頸病變的目的是近年來研究的熱點，但目前仍缺乏公認有效的治療手段。30歲之前的感染者，如果沒有

16、宮頸細胞學改變，主要通過消除易感因素、提高機體免疫能力、輔助局部藥物治療，幫助感染者自我清除。30歲以后的感染者，以及無論年齡有細胞學改變者，治療包括： 抗HPV治療+宮頸病變治療 其中抗HPV治療包括： 全身抗病毒藥物、免疫增強劑、生物學治療、中藥治療、局部藥物（抗病毒、改善內(nèi)環(huán)境、促進上皮修復）治療；現(xiàn)有宮頸病變治療手段也能清除部分HPV病毒。,HPV疫苗是最大希望,項目一：HPV16、18分型檢測

17、 特點：1、可以分型檢測 2、可以覆蓋70%-80%的病毒 3、收費低，容易推廣 目標：1、常規(guī)婦科體檢,HPV兩個項目推薦,HPV兩個項目推薦,項目二：HPV16、18、31、33、35、39、45、 51、52

18、、56、58、59、68共13種高 危型分型檢測 特點： 1、可以分型檢測 2、可以覆蓋99%的病毒 目標： 1、宮頸病變患者 2、對健康有體檢需求者,宮頸癌是目前唯一可防可治的癌癥、提高檢查意識，就可以遠離宮頸癌。