人乳頭瘤病毒hpv核酸檢測(cè)對(duì)比分析匯編

1、人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測(cè),,內(nèi) 容,HPV與宮頸癌宮頸癌檢測(cè)方法比較HPV核酸檢測(cè)方法學(xué)比較臨床使用,宮 頸 癌,婦科第二大癌癥每年約有20余萬(wàn)婦女死于宮頸癌新發(fā)病: 全球---50萬(wàn)/年 我國(guó)---13.2萬(wàn)/年,姓名：哈拉爾德·楚爾·豪森國(guó)籍：德國(guó)民族：日耳曼課題：發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒（HPV）引發(fā)宮頸癌成績(jī)：獲得2008年度諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng),Hara

2、ld zur Hausen,宮 頸 癌,什么是HPV？,Human Papilloma virus 人乳頭瘤病毒雙鏈DNA無(wú)包膜病毒廣泛分布于高等脊椎動(dòng)物 定向感染皮膚及粘膜的復(fù)層鱗狀上皮,HPV病毒電鏡照片,,,逆轉(zhuǎn)錄區(qū)域包括控制病毒基因組復(fù)制的基因序列,E6、E7為兩種致癌蛋白編碼，它們是高危型HPV導(dǎo)致細(xì)胞變性的主要原因,E1、E2、E4和E5負(fù)責(zé)病毒復(fù)制,L1、L2為兩種病毒外殼蛋白編碼在預(yù)防HPV的疫苗中使用了L

3、1,HPV的類型,已經(jīng)鑒定的乳頭狀瘤病毒有200多種與人有關(guān)的約125種30-40種感染生殖道低危型：HPV6、11、42、43、44等中間型：HPV31、33、35、39、51、52、58、59、68高危型：HPV16、18、45、56等臨床最重要的型：6、11、16、18、31、33、35、38型8個(gè)亞型,HPV感染,HPV感染的途徑和危險(xiǎn)因素,性傳播直接皮膚接觸母嬰傳播,性行為混亂免疫抑制吸煙其他STD協(xié)

4、同感染口服避孕藥,HPV感染率與發(fā)病率,HPV感染與宮頸癌發(fā)病率變化圖，Int J Cancer 1993,53:919,HPV感染的不同階段,宮頸癌的癌前病變(CIN),CIN = Cervical Intraepithelial Neoplasia宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變,CIN,,宮頸不典型增生,宮頸原位癌：宮頸上皮細(xì)胞發(fā)生癌變，但癌變未突破基底膜、間質(zhì)無(wú)浸潤(rùn)。,,輕度（CINⅠ級(jí)）：病變局限在上皮層的1／3內(nèi),中度（CINⅡ級(jí)）：

5、病變局限在上皮層的下2／3,重度（CINⅢ級(jí)）：病變幾乎累及全部上皮層，僅 剩1－2 層表面的正常 鱗狀上皮,,宮頸上皮細(xì)胞部分或大部分被不同程度異型細(xì)胞所替代,,定義,宮頸癌的癌前病變(CIN),專家共識(shí),宮頸癌的“元兇”就是高危型HPV感染高危型HPV感染是宮頸癌的必要條件沒(méi)有HPV感染，就沒(méi)有宮頸癌防治HPV感染，就是防治宮頸癌,1995年，國(guó)際

6、癌癥研究協(xié)會(huì)認(rèn)為,高危固定價(jià)HPV的持續(xù)性感染是宮頸癌的主要病因,宮頸癌,感染HPV病毒? CIN?早期浸潤(rùn)癌,唯一 知道病因的癌癥唯一 可以通過(guò)早期干預(yù)阻斷的癌癥,,5-15年,內(nèi) 容,HPV與宮頸癌宮頸癌檢測(cè)方法比較HPV核酸檢測(cè)方法學(xué)比較臨床使用,,分子水平,細(xì)胞水平,組織水平,,,宮頸癌檢測(cè)方法學(xué)發(fā)展過(guò)程,1982年,醋酸、碘液肉眼檢測(cè)靈敏度為70.9%特異度為74.3%,1996年,新

7、柏氏TCT靈敏度為80.8%特異度為 51-60%,2000年,HPV核酸檢測(cè)靈敏度為98.6%特異度為99%,巴氏涂片靈敏度為50%以下特異度為？%,1941年,,宮頸癌篩查發(fā)展史,組織學(xué)檢測(cè),肉眼觀察 陰道鏡觀察 組織檢查優(yōu)點(diǎn)： 操作簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉， 適宜作初步篩查； 缺點(diǎn)： 準(zhǔn)確率低，人員素質(zhì) 要求高，病人痛

8、苦程度大。,細(xì)胞學(xué)檢測(cè),傳統(tǒng)巴氏涂片,液基細(xì)胞學(xué),傳統(tǒng)巴氏涂片（CV） 液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)(TCT)自動(dòng)細(xì)胞學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)（LCT）計(jì)算機(jī)輔助細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)（CCT）,細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的假陰性,液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)假陰性結(jié)果高達(dá)20%水平差的地方更高原因分析：1、視野局限 2、人為因素 1）取標(biāo)本、片子制備 2）技

9、術(shù)差異 3）耐心、責(zé)任心,細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的假陽(yáng)性,1、 凹空細(xì)胞是HPV 感染的主要形 態(tài)學(xué)改變，但不是特異性改變2、 HPV正在清除階段,細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的性價(jià)比低,TCT陰性 要求每年做同樣的檢查HPV陰性 可以把篩查時(shí)間延長(zhǎng)到3-5年,衛(wèi)生部《宮頸癌篩查及早診早治指南》,核酸檢測(cè),直接檢查導(dǎo)致宮頸癌的元兇---HPV病毒靈敏度高，特異性好操作簡(jiǎn)便，可作為療效評(píng)估

10、 和監(jiān)測(cè)指標(biāo),宮頸癌篩查三方案,最佳方案：HPV核酸檢測(cè)+液基細(xì)胞,基本方案：醋酸白實(shí)驗(yàn),一般方案：HPV核酸檢測(cè)+傳統(tǒng)巴氏涂片,中國(guó)癌癥研究協(xié)會(huì)推薦方法,內(nèi) 容,HPV與宮頸癌宮頸癌檢測(cè)方法比較HPV核酸檢測(cè)方法學(xué)比較臨床使用,HPV第一代核酸檢測(cè)產(chǎn)品,產(chǎn)品：HC2、港龍13型原理：雜交捕獲技術(shù)特點(diǎn)：檢測(cè)核酸、不分型、不能科學(xué)定量、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng),HPV核酸第二代檢測(cè)產(chǎn)品,產(chǎn)品：凱普21型、亞能2

11、3型、透景26型、達(dá)安19型、港龍29型原理：膜條雜交、液相雜交特點(diǎn)：可以分型，而且高低危都能做需要雜交、時(shí)間長(zhǎng)。5-10個(gè)小時(shí)不等。開(kāi)放式雜交、極易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室生物污染。結(jié)果需肉眼判讀，增加人為誤差。不能定量,HPV核酸第三代檢測(cè)方法,產(chǎn)品：上海之江13型分型檢測(cè)試劑原理：分別采用HPV13種型別的特異性引物及 熒光探針，應(yīng)用PCR+Taqman技術(shù)，對(duì)

12、 HPV13種型的特異性核酸片段進(jìn)行分型 定量檢測(cè)。特點(diǎn)： 分型、定量、快捷、安全,優(yōu)勢(shì)一：分型,HPV59,IC,高危13型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68,,優(yōu)勢(shì)二：快捷,,上機(jī)檢測(cè),,,30min,60min,30min,,2小時(shí)！,優(yōu)勢(shì)三：安全,,,,,,之江： 封閉式實(shí)時(shí)熒光PCR 無(wú)需洗滌

13、 減少污染,傳統(tǒng)膜條雜交： 反復(fù)洗滌 操作繁瑣 污染幾率增加,優(yōu)勢(shì)四：定量（唯一）,3、便于文章的發(fā)表。,1、宮頸病毒載量和CIN分期呈正相關(guān)。,2、用于對(duì)病程的觀察和療效的評(píng)估。,,5萬(wàn)IU,1萬(wàn) IU,傳統(tǒng)方法為什么不能定量？,,一、標(biāo)本量采集不準(zhǔn)確。,二、上皮細(xì)胞過(guò)少，也會(huì)出現(xiàn)假陰性的結(jié)果,,,5萬(wàn)IU/10個(gè),1萬(wàn) IU/2個(gè),之江的定量方法—科學(xué),1、MNBH是人單拷貝基因-----測(cè)MNBH基因的數(shù)量

14、相當(dāng)于檢測(cè)取了多少個(gè)上皮細(xì)胞,2、如果沒(méi)有檢測(cè)出MNBH基因，或MNBH量太少?？梢员苊饧訇幮越Y(jié)果,內(nèi) 容,HPV與宮頸癌宮頸癌檢測(cè)方法比較HPV核酸檢測(cè)方法學(xué)比較臨床使用,HPV檢測(cè)結(jié)果的用途,篩查：與細(xì)胞學(xué)檢測(cè)配合確定篩查頻率和周期，確保早期發(fā)現(xiàn)，及時(shí)干預(yù)。分流：根據(jù)篩查結(jié)果，將高危人群和患者群進(jìn)行分流，制定不同的干預(yù)、治療方案。隨診：根據(jù)HPV結(jié)果的變化情況，判斷治療效果和病情轉(zhuǎn)歸。,HPV檢測(cè)送檢流程,宮頸刷

15、、保存液及取樣示意圖,,,,,,,HPV檢測(cè)后處理,HPV基因分型檢測(cè),常規(guī)篩查,液基細(xì)胞學(xué)檢查,根據(jù)最后結(jié)果按ASCCP指南處理,,,,,,,,,陽(yáng)性,正常,CINⅠ,CINⅡ、Ⅲ,陰性,1年后重復(fù)HPV檢測(cè)和細(xì)胞學(xué)檢查,半年后重復(fù)HPV檢測(cè)和細(xì)胞學(xué)檢查或陰道鏡檢查,陰道鏡檢查、多點(diǎn)活檢,,,,HPV感染的治療,通過(guò)治療HPV 感染達(dá)到防治宮頸病變的目的是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)，但目前仍缺乏公認(rèn)有效的治療手段。30歲之前的感染者，如果沒(méi)有

16、宮頸細(xì)胞學(xué)改變，主要通過(guò)消除易感因素、提高機(jī)體免疫能力、輔助局部藥物治療，幫助感染者自我清除。30歲以后的感染者，以及無(wú)論年齡有細(xì)胞學(xué)改變者，治療包括： 抗HPV治療+宮頸病變治療 其中抗HPV治療包括： 全身抗病毒藥物、免疫增強(qiáng)劑、生物學(xué)治療、中藥治療、局部藥物（抗病毒、改善內(nèi)環(huán)境、促進(jìn)上皮修復(fù)）治療；現(xiàn)有宮頸病變治療手段也能清除部分HPV病毒。,HPV疫苗是最大希望,項(xiàng)目一：HPV16、18分型檢測(cè)

17、 特點(diǎn)：1、可以分型檢測(cè) 2、可以覆蓋70%-80%的病毒 3、收費(fèi)低，容易推廣 目標(biāo)：1、常規(guī)婦科體檢,HPV兩個(gè)項(xiàng)目推薦,HPV兩個(gè)項(xiàng)目推薦,項(xiàng)目二：HPV16、18、31、33、35、39、45、 51、52

18、、56、58、59、68共13種高 危型分型檢測(cè) 特點(diǎn)： 1、可以分型檢測(cè) 2、可以覆蓋99%的病毒 目標(biāo)： 1、宮頸病變患者 2、對(duì)健康有體檢需求者,宮頸癌是目前唯一可防可治的癌癥、提高檢查意識(shí)，就可以遠(yuǎn)離宮頸癌。