生物制品學生物制品質量管理、檢定及標準化

1、第三章,生物制品的質量管理、檢定與標準化,2024年1月28日星期日,1,,第一節(jié) 生物制品的GMP管理,一、GMP概況即（Good Manufacturing Practices for Drugs ,GMP）是用科學、合理、標準化的條件和方法來控制藥品生產(chǎn)的全過程，將差錯發(fā)生的可能性降到最低，從而保證生產(chǎn)出優(yōu)質藥品的一套管理制度。GMP根據(jù)適用范圍可分為三類：,,國際性的GMP,國家性質的GMP,行業(yè)性的GMP,2024年1月2

2、8日星期日,2,,第一節(jié) 生物制品的BMP管理,二、GMP的基本內(nèi)容不同國家和組織頒布的GMP在具體條款上有差異，但基本內(nèi)容是一致的，涉及到以下三個方面的內(nèi)容：,,人員,硬件,軟件,2024年1月28日星期日,3,,第一節(jié) 生物制品的BMP管理,三、GMP的作用和特點：,1、GMP的實施涉及兩個方面：1）政府藥政管理部門從管理角度把GMP看成是政府對制藥廠提出的最低要求，并作為藥品質量監(jiān)督員檢查藥廠和藥品質量的依據(jù)；2）生產(chǎn)單位應

3、把GMP視為本廠所必須具備的技術水平，即生產(chǎn)管理、質量管理和質量監(jiān)測應達到的必需水平。,2024年1月28日星期日,4,,第一節(jié) 生物制品的BMP管理,三、GMP的作用和特點：,2、GMP是根據(jù)通用性的規(guī)定，針對本國所有藥廠而制定的。各藥廠應按GMP的要求，制定更具體的實施條例。,3、GMP是為了防患于未然，應把管理的重點放在生產(chǎn)過程中，通過對生產(chǎn)過程的嚴格控制來保證生產(chǎn)出安全有效的藥品。,4、GMP強調(diào)有效性的證實。對一個工序或一件用

4、具、設備在用于生產(chǎn)之前，要經(jīng)過驗證，證明是符合要求的、有效的，以確保產(chǎn)品質量。,2024年1月28日星期日,5,,第一節(jié) 生物制品的BMP管理,三、GMP的作用和特點：,5、在管理系統(tǒng)上，GMP要求有生產(chǎn)管理部門和質量管理部門兩權分立的特點，在組織上兩者的地位是惡行的，在人事上兩部門的負責人不能互相兼任。,6、GMP強調(diào)人員素質、衛(wèi)生要求、無菌要求、核對制度以及質量監(jiān)督檢查制度。,2024年1月28日星期日,6,,第一節(jié) 生物制品的BM

5、P管理,四、實施GMP的目的和意義,,實施GMP是我國醫(yī)藥產(chǎn)品進入國際市場的先決條件。,實施GMP是企業(yè)及其產(chǎn)品增強競爭力的重要保證,實施GMP，才能使藥品質量得到最大限度的保證。,2024年1月28日星期日,7,,第一節(jié) 生物制品的BMP管理,五、生物制品GMP檢查要點,保護環(huán)境和操作者防止交叉污染，嚴格分區(qū)，獨立空調(diào)局部負壓盡可能一個產(chǎn)品、一個車間徹底消毒和清場嚴格動物使用及動物管理環(huán)境溫度,2024年1月28日星期日,

6、8,,第一節(jié) 生物制品的BMP管理,六、生物制品GMP認證檢查要點,1．強毒與弱毒,“強毒”系指生物制品生產(chǎn)及檢定用細菌株及病毒株，其致病力強，傳染性強，感染的機率高，感染后癥狀較重，可危及生命健康，甚至引起傳染病爆發(fā)流行的細菌菌株及病毒株?！叭醵尽毕抵干镏破飞a(chǎn)及檢定用細菌株及病毒株，經(jīng)過天然或人工改造方法，去除或封閉其毒力因子，使其致病力減弱，一般不引起感染或發(fā)病的細菌菌株及病毒株。強毒株與弱毒株，不允許混放在一起，其生產(chǎn)及檢

7、定操作場所須嚴格分開，并有專用設備。,2024年1月28日星期日,9,,第一節(jié) 生物制品的BMP管理,六、生物制品GMP認證檢查要點,2．死毒與活毒,“活毒”是制備滅活疫苗的第一階段或減毒活疫苗生產(chǎn)時，將生產(chǎn)用細菌或病毒株進行大規(guī)模培養(yǎng)制備，其生產(chǎn)過程和生產(chǎn)場所、生產(chǎn)設備、器材含有大量活的細菌或活的病毒生物體，稱之為“活毒”?！八蓝尽笔侵苽錅缁钜呙鐣r，第一階段生產(chǎn)出大量活細菌或或病毒后，到第二階段，對活生物體加入一定量甲醛或適宜滅活劑

8、，將全部細菌或病毒殺死，稱之為“死毒”?！盎疃尽迸c“死毒”的生產(chǎn)場所、生產(chǎn)設備及器材，須嚴格分開。,2024年1月28日星期日,10,,第一節(jié) 生物制品的BMP管理,六、生物制品GMP認證檢查要點,3．“脫毒前”與“脫毒后”,“脫毒前”系指破傷風梭狀菌、白喉桿菌繁殖培養(yǎng)時，生產(chǎn)大量破傷風毒素及白喉毒素，對人體有致病性，這一階段為“脫毒前”。“脫毒后”系指毒素中加入一定量甲醛或適宜脫毒劑，將毒素去掉毒性，不再具有致病性，仍保留其抗原性

9、和免疫原性，稱之為“脫毒后”?！懊摱厩啊迸c“脫毒后”的生產(chǎn)場所、生產(chǎn)設備及器材須嚴格分開。,2024年1月28日星期日,11,,第一節(jié) 生物制品的BMP管理,六、生物制品GMP認證檢查要點,4．血液制品、抗血清、人和動物組織制備的制品，其生產(chǎn)所用的原材料，為人血漿、動物免疫血清、人和動物器官、組織及組織液等，均含有大量的人和動物的異種蛋白質或細胞活性物質，具有較強的致敏原物質，不經(jīng)過相應處理和加工，可致人體過敏反應或血清病。因此，血

10、液制品、抗血清、人和動物組織生產(chǎn)制備制品時，須有專用生產(chǎn)場所、生產(chǎn)設備及器材，不可與其他生物制品混用。,2024年1月28日星期日,12,,第一節(jié) 生物制品的BMP管理,六、生物制品GMP認證檢查要點,5．芽孢菌制品，系用炭疽桿菌、破傷風梭菌、肉毒梭菌等含有芽孢菌來生產(chǎn)制備的制品，芽孢菌是微生物對外周環(huán)境抵抗力最強的生命單位。芽孢菌在自然界可存活數(shù)十年及百年之久，100℃可耐受2小時以上，在70％酒精中存活20年，低溫和干燥對其毫無作

11、用。生產(chǎn)芽孢菌制品的生產(chǎn)場所、生產(chǎn)設備和器材須專用，與其他制品生產(chǎn)嚴格分開。,2024年1月28日星期日,13,,第一節(jié) 生物制品的BMP管理,六、生物制品GMP認證檢查要點,6．卡介苗與結核菌制品生產(chǎn)場所，必須嚴格分開，其生產(chǎn)設備、器材、生產(chǎn)用菌種必須專用，不能混用。,2024年1月28日星期日,14,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,生物制品的基本屬性和特點,其起始材料均為生物活性物質；生物制品生產(chǎn)加工全過程是生物學過程，是無菌操作

12、過程；有些生物制品的生產(chǎn)過程是有毒或有菌的過程;生物制品多為蛋白質或多肽類物質，分子量較大，并具有復雜的分子結構, 較不穩(wěn)定，易失活，易被微生物污染，易被酶解破壞。,2024年1月28日星期日,15,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,生物制品的基本屬性和特點,其質量控制和質量檢定是采用生物學分析方法，其效價或生物活性檢定有其變異性；生物制品原材料、中間品、成品、運輸、貯存、甚至使用保持在“冷鏈”系統(tǒng)中；特別是預防制品使用對象不是病人

13、，而是健康人群；生物制品的質量控制實行生產(chǎn)全過程監(jiān)控; 生產(chǎn)現(xiàn)場檢查時要充分考慮這些特點,2024年1月28日星期日,16,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,生物制品實行國家批簽發(fā) 《藥品管理法實施辦法》中規(guī)定，國家對所規(guī)定的生物制品實行國家批簽發(fā)制度。 國家批簽發(fā)——國家藥品監(jiān)督管理部門授權國家藥品檢定機構，對所規(guī)定的生物制品，在出廠前或進口時，按批進行審查和簽發(fā)，凡審查或檢定不合格的不允許銷售或者進口。

14、,2024年1月28日星期日,17,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,生物制品國家批簽發(fā)分為三種類型一、僅對某種制品每批的批記錄摘要進行審查，符合要求發(fā)給批簽發(fā)證；二、審查批記錄摘要 ＋ 對部分批次制品進行抽檢檢定、審查和檢定符合要求發(fā)給批簽發(fā)證；三、審查批記錄摘要 ＋ 批批檢定，審查和批批檢定符合要求發(fā)給批簽發(fā)證。,2024年1月28日星期日,18,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,生物制品必須具備兩個重要條件，即安全性和有效性。

15、為保證生物制品質量，世界衛(wèi)生組織要求各國生產(chǎn)的制品必須有專門的檢定機構負責成品的質量檢定，并且規(guī)定檢定部門有熟練的高級技術人員和精良的設備條件，以保證檢定工作的質量。未經(jīng)檢定審批發(fā)給正式檢定合格證的制品，不準出廠。,生物制品檢定的依據(jù)《中華人民共和國藥典》《中國生物制品規(guī)程》,2024年1月28日星期日,19,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,生物技術藥物質量標準研究的依據(jù),一、主要依照《重組DNA產(chǎn)品質量控制要點》、《中國生物制品規(guī)程

16、》、《中國藥典》等要求進行。二、參考世界衛(wèi)生組織（WHO）和美國FDA頒布的指南、ICH文件和《歐洲藥典》。檢定標準、檢定方法：準確可靠、切實可行；保證產(chǎn)品安全、有效。,2024年1月28日星期日,20,,生物技術藥物質量標準研究的內(nèi)容,1、目標產(chǎn)品的均一性2、建立目標產(chǎn)品生物學活性或免疫學效價測定方法3、研究建立目標產(chǎn)品的免疫學活性的測定方法及質控標準4、研究建立國家標準品或參考品5、建立目標產(chǎn)品生產(chǎn)相關雜質的限量分析方法

17、和標準6、制定出保證上述生物技術產(chǎn)品臨床安全、有效、與WHO標準相一致的質量控制標準和規(guī)范化的檢定方法,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,2024年1月28日星期日,21,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,研究建立靈敏、穩(wěn)定的理化性質、純度、含量的測定方法及質控標準。 研究建立目標產(chǎn)品的生物學功效的測定方法及質控標準；建立用于藥物生物學功效檢定用的細胞系和動物模型。 運用生化標準化原則，以WHO國際標準品為對照，

18、研制出國家標準品或參考對照品。在效價定義上要求與國際單位一致；沒有國際標準品的新藥，則根據(jù)標準品要求自行研制國家參比品。 外源DNA、菌體蛋白質、細菌內(nèi)毒素以及病毒、支原體、細菌等在工藝中加入有害物質的檢測。,2024年1月28日星期日,22,重組產(chǎn)品質量控制上存在的難點,建立重組藥物的生物學活性測定方法；理化測定標準品的穩(wěn)定性；人源化單抗中的人源化程度檢測方法及標準研究；重組人白蛋白等大劑量重組產(chǎn)品安全性評價問題；

19、反義核酸藥物理化特性測定和效力測定，即如何評價反義核酸的體內(nèi)及體外活力；基因治療藥物的安全性評價包括反轉錄病毒、生物分布和效力測定；DNA疫苗的安全性和效力檢測方法研究；干細胞治療產(chǎn)品的質量標準的建立（干細胞鑒定及活力測定） 。,2024年1月28日星期日,23,我國基因工程產(chǎn)品安全管理法規(guī)和技術指南,《傳代細胞系生產(chǎn)生物制品的規(guī)程》《人用鼠源性單克隆抗體質量控制要點》《預防用新生物制品臨床研究的技術要求》《人用重組DN

20、A制品質量控制要點》《人的體細胞治療申報臨床試驗指導原則》《人基因治療申報臨床試驗指導原則》《藥理毒理檢查指導原則》《藥品生產(chǎn)質量管理辦法》《藥品注冊管理辦法》,2024年1月28日星期日,24,生物技術藥物的質量控制,生物技術藥物的特點：1、來源：活的生物體（細菌或細胞）；2、結構：復雜（包括組成、空間結構）；3、生產(chǎn)：涉及生物材料和生物學過程（發(fā) 酵、細胞培養(yǎng)，分離純化等），

21、 有其固有的易變性。,2024年1月28日星期日,25,生物技術藥物的質量控制,質量控制包括兩個方面：1、生產(chǎn)過程中質量控制GMP（硬件、軟件）2、最終目標產(chǎn)品的質量控制（方法學研究）,2024年1月28日星期日,26,質量控制方法學研究具體內(nèi)容,一、生物學活性測定和比活性二、蛋白質純度檢查三、蛋白質含量測定四、蛋白質藥物理化性質的鑒定五、蛋白質的二硫鍵分析六、對糖蛋白的特殊要求七、殘余雜質檢

22、查八、安全性及其他檢測項目九、生物技術藥物待測樣品保存,2024年1月28日星期日,27,一、生物學活性測定和比活性,1、意義：1）基因工程產(chǎn)品的化學本質為蛋白質、多肽，其活性由產(chǎn)品的氨基酸序列或其空間結構所形成 的活性中心所決定的，與其絕對質量不一致。2）基因工程產(chǎn)品的生物學活性與藥效學基本相一致。3）利用生物學活性建立的測定效價體系，是給藥品定量的依據(jù)，保證產(chǎn)品藥效的重要手段。,2024年1月28日星期日,28,效價測定

23、一般原則1、國際通用方法；2、測定結果須用國際或國家標準品校 正，以國際單位表示。,2024年1月28日星期日,29,生物學活性測定方法分類,1）體外細胞培養(yǎng)測定法　 a、促進細胞生長作用（G-CSF:NFS-60）　 b、抑制細胞生長作用 (TNF:L929)　 c、間接保護細胞作用 (IFN:VISH;VSV)2）離體動物器官測定法 采用家兔主動脈條測定重組腦利鈉肽生物活性。3）體內(nèi)測定法4）生化酶促反

24、應測定法5）免疫學活性測定法,2024年1月28日星期日,30,利用動物體內(nèi)某些指標變化，定出產(chǎn)品的單位，如EPO活性測定，體內(nèi)注射EPO后，計算小鼠網(wǎng)織紅細胞增加的數(shù)量與標準品比較，確定其活性單位。,2024年1月28日星期日,31,生物學活性測定方法選擇,體內(nèi)測定和體外測定方法 a、體內(nèi)測定：即整體動物測定，能為較大范圍的重組產(chǎn)品的效價提供有用信息，但費時、昂貴、難操作及同時存在倫理問題，大多數(shù)情況下傾向于選擇體外測定方法。

25、 b、體外測定：可使用分離的器官或組織、原代細胞或傳代細胞系，目前最常用方法是連續(xù)生長、因子依賴的、克隆化的細胞系的方法，其測定結果比較準確、重現(xiàn)性好、經(jīng)濟、容易使用和便于統(tǒng)計分析。,2024年1月28日星期日,32,生物學活性測定方法選擇,2、定量、半定量、定性方法 a、通過研究首先選擇能夠定量評價的方法，最好的選擇是背景較低的反應，并且對相關產(chǎn)品有陡峭的、可重復的劑量-反應曲線；其次考慮半定量方法（如NGF），最后考慮定性（如

26、BMP）方法。 b、對生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，生物學活性測定方法復雜，可采用其他替代方法（如重組人生長激素用HPLC定量方法代替復雜生物活性測定方法）。,2024年1月28日星期日,33,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,一、生物制品的理化檢定(附常規(guī)的檢定方法),生物制品的檢定一般分理化檢定、安全檢定和效力檢定三個方面1、物理性狀檢定1）外觀檢定：通過特定的人工光源檢測生物制品的外觀，其顏色、狀態(tài)及加入蒸餾水后的澄清度應符合藥物的規(guī)程要求。

27、,（1）透明液制品：不得含有異物、白點、凝塊、渾濁或搖不散的沉淀物。,2024年1月28日星期日,34,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,一、生物制品的理化檢定(附常規(guī)的檢定方法),1、物理性狀檢定1）外觀檢定：,（2）懸濁液制品：應為乳白色渾懸液，不得有搖不散的菌塊或其他異物。,（3）凍干制品：應為淡黃色或白色疏松體，呈海綿狀或結晶狀，應無融化現(xiàn)象。,2024年1月28日星期日,35,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,2）真空度凍干制品進

28、行真空封存，可進一步保證制品的生物活性和穩(wěn)定性?？捎酶哳l火花真空測定器檢查其真空程度，凡有真空度者瓶內(nèi)應出現(xiàn)藍紫色光輝。,3）溶解時間,按規(guī)程要求，加適量溶劑，檢查溶解時間，其溶解速度應在規(guī)定時限內(nèi)。,2024年1月28日星期日,36,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,2、化學檢定：除水分檢定外，按規(guī)定加入一定量無菌注射用水后進行檢定1）pH值測定：常用電極法2）水分含量測定：常用卡爾.費休水分測定法，一般水分不能高于3％，卡爾.費休法

29、的基本原理是：依據(jù)卡爾非休法測定水份含量時，在存在甲醇和堿的情況下，水會按照下列化學反應式與碘和二氧化硫進行化學反應：H2O + I2 + SO2 + CH30H + 3RN → [RHN]SO4CH3 + 2[RHN]I 方法： 卡爾費休容量法測定樣品中的水含量是根據(jù)滴定過程中消耗的卡氏試劑的量，計算出樣品中的水含量。該方法具有操作簡單、速率快、精度高等優(yōu)點。,2024年1月28日星期日,37,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,

30、3）蛋白質含量測定（1）凱氏定氮法（2）酚試劑法（3）雙縮脲法（4）紫外分光光度法（5）考馬斯亮藍法4）防腐劑含量測定（1）氣相色譜法（2）液相色譜法（3）薄層層析法,2、化學檢定,2024年1月28日星期日,38,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,2、化學檢定5）等電點的測定用等電聚焦電泳法6）分子量的測定a、滲透壓法b、超速離心法c、凝膠過濾法d、SDS－PAGE法,2024年1月28日星期日,39,,第

31、二節(jié) 生物制品的質量檢定,2、化學檢定5）等電點的測定用等電聚焦電泳法6）分子量的測定a、滲透壓法b、超速離心法c、凝膠過濾法d、SDS－PAGE法7)外源性殘留DNA含量的檢定8）宿主菌殘留蛋白含量的測定9）殘留抗生素含量的測定,2024年1月28日星期日,40,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,2、化學檢定10）純度測定(1)區(qū)帶電泳a、乙酸纖維膜電泳b、聚丙烯酰胺凝膠電泳c、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（2

32、）免疫電泳a、對流免疫電泳b、單向定量免疫電泳（火箭電泳）c、雙向定量免疫電泳（3）凝膠層析,2024年1月28日星期日,41,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,二、生物制品的安全檢定1、一般安全性檢查1）異常毒性試驗2）無菌試驗3）熱原試驗2、殺菌、滅活和脫毒情況的檢查3、外源性污染檢查1）野毒（菌）檢查2）支原體檢查3）乙肝表面抗原、丙肝抗體和艾滋抗體的檢查4）殘余細胞DNA檢查4、過敏性物質檢查,2024

33、年1月28日星期日,42,,第二節(jié) 生物制品的質量檢定,三、生物制品的效力檢定理想的效力試驗應具備的條件1、試驗方法具最佳代表性，與人體使用應大體相似2、試驗方法不應煩瑣3、結果應明確4、試驗結果要能與流行病學高枝基本一致5、所用試驗動物應標準化,2024年1月28日星期日,43,,第三節(jié) 基因工程生物制品的質量檢測與控制,一、基因工程生物制品的特點二、基因工程生物制品的質量要求三、基因工程生物制品的質控要點四、基因工