單股負(fù)鏈rna病毒

1、第二十四章 單股負(fù)鏈RNA病毒1．包括 副粘病毒科，彈狀病毒科，絲狀病毒科，波納病毒科2．特點(diǎn)：核衣殼螺旋對(duì)稱，含RNA聚合酶，出芽方式成熟， 有囊膜及囊膜粒，單股負(fù)鏈RNA，不分節(jié)段， 胞漿內(nèi)復(fù)制。第一節(jié) 副黏病毒科一、分類 呼吸道病毒屬（以前叫副粘病毒屬） 副黏病毒亞科

2、腮腺炎病毒屬 麻診病毒屬 肺病毒亞科 肺病毒屬 火雞肺病毒屬,,,,二、主要特征病毒顆粒多形性，可呈絲狀，有囊膜及纖突，核衣殼螺旋對(duì)稱，單分子單股負(fù)鏈RNA，含6~10個(gè)基因，編碼10~12個(gè)蛋白質(zhì)，多數(shù)為結(jié)構(gòu)蛋白。纖突具有2種糖蛋白：血凝素神經(jīng)氨酸酶（HN）及融合蛋白（F）。,一、呼吸道病毒屬

3、（一）人副流感病毒1型（二）牛副流感病毒3型：又稱運(yùn)輸熱病毒，是牛及綿羊在運(yùn)輸及其它應(yīng)激環(huán)境時(shí)發(fā)生的呼吸道綜合癥，如肺炎等。（三）鼠副流感病毒1型：又叫仙合病毒，1952年日本仙臺(tái)嬰兒發(fā)生肺炎并分離到該病毒。感染鼠后被毛粗亂，弓脊，呼吸困難，發(fā)育不良，消瘦，妊娠期延長(zhǎng)，新生鼠死亡。,二、麻診病毒屬 屬特征：核衣殼螺旋狀對(duì)稱，有囊膜，囊膜上纖突只含血凝素，無神經(jīng)氨酸酶，單股負(fù)鏈RNA，能凝哺乳動(dòng)物紅C，該屬病毒間抗原有效反應(yīng)。

4、（一）麻診病毒：引起人和猴的麻疹病。（二）犬瘟熱病毒：（CDV）1．犬瘟熱病毒與麻診病毒、牛瘟病毒有相同抗原成份。2．致病性：急性型出現(xiàn)雙相發(fā)熱（體溫兩次開高），眼鼻有卡他性或膿性分泌物。在第二次發(fā)熱時(shí)表現(xiàn)嘔吐，腹瀉，呼吸道卡他炎癥，有時(shí)發(fā)展為肺炎。有的神經(jīng)抑郁，體重下降，脫水，腳墊和鼻過度角質(zhì)化，肌肉痙攣或后肢癱瘓。,3．診斷： ①病毒分離鑒定：病料處理后接種犬腎或貂腎原代細(xì)胞培養(yǎng)， 經(jīng)雞胚絨毛尿囊膜適應(yīng)的毒可在

5、MDCK， Vero細(xì)胞上生長(zhǎng)產(chǎn)生 CPE，特點(diǎn)為出現(xiàn)放射狀細(xì)胞及形成合胞體。然后用熒光抗體或 瓊脂擴(kuò)散檢測(cè)。 ②血清學(xué)試驗(yàn)：中和試驗(yàn)，補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，免疫熒光試驗(yàn)， 瓊擴(kuò)試驗(yàn)。,三、腮腺炎病毒屬（一）新城疫病毒（New castle disease virus, NDV）又稱禽副粘病毒1型，1926年在英國(guó)新城發(fā)現(xiàn)。1．致病性：引起雞的新城疫，急性敗血癥，慢性神經(jīng)癥狀，鴨鵝大多為隱性感染，鴿、鸚鵡感染發(fā)

6、病。人感染發(fā)生一過性結(jié)膜炎。2．病毒特征：核衣殼螺旋狀對(duì)稱，有囊膜，單股負(fù)鏈RNA不分節(jié)段。囊膜上有血細(xì)胞凝集素H和神經(jīng)氨酸酶N。,由于有血凝素，故病毒能凝集多種動(dòng)物紅C，叫HA（血凝試驗(yàn)），這種凝集性能為特異性血清所抑制叫HI（血凝抑制）試驗(yàn)。 3．抵抗力（略）4．培養(yǎng)：①9~11日齡雞胚尿囊膜或尿囊腔中生長(zhǎng)好，雞胚24-72h死 亡胚體出血，腦炎。 ②細(xì)胞培養(yǎng)，雞胚腎原代或傳代C中增殖出現(xiàn)CPE，表現(xiàn)為

7、 多核合胞體形成。5．抗原性（本科不講） NDV只有1個(gè)血清型，但毒株的毒力有較大差異，主要取決于其HN及F的裂解及活化。無毒株的HN和F為無活性的前體，有毒株的這些前體可被裂解切割并活化。據(jù)毒力的差異可將NDV分成3個(gè)類型：,①強(qiáng)毒型；②中毒型；③弱毒型。根據(jù)以下致病指數(shù)即：病毒對(duì)一日齡雛雞腦內(nèi)接種的致病指數(shù)（ICPI）；42日齡雞靜脈接種的致病指數(shù)（IVPI）；最小致死量致死雞胚的平均死亡時(shí)間（MDT）。強(qiáng)毒：

8、MDT在40~70 h之間 ICPI＞2.0 IVPI＞2.0中毒：MDT在44~70h , ICPI=0.6~1.8弱毒：MDT＞68h , ICPI≤0.25IVP作為參考,6．微生物診斷①病毒分離培養(yǎng)：病料（腦，脾，肺，血）→稱重剪碎用滅菌生理鹽水作1:5~1:10稀釋→研磨→（37℃~-20℃）凍融3次→2000~3000rPM離心15min取上清→ 加雙抗4℃過夜

9、→接種雞胚尿囊腔或細(xì)胞 0.22μM濾膜過濾 →收獲尿囊液或細(xì)胞培養(yǎng)液，進(jìn)行下列試驗(yàn)。① HA試驗(yàn)：檢驗(yàn)是否含有病毒。HI試驗(yàn)（血凝抑制試驗(yàn)）：不能抑制則不是NDV，若能抑制則為NDV。②熒光抗體：檢查病料中病毒；③ELISA；④中和試驗(yàn)⑤電鏡；⑥HI抗體的水平是衡量免疫力的指標(biāo),,7．免疫治療①弱毒疫苗：自然弱毒株 如： F株（Ⅲ系）； B1株（Ⅱ系苗）； Lasota株（Ⅳ系苗）

10、 Ⅴ4株。毒力弱適于1—2周齡雛雞免疫。②中等毒力疫苗：I系苗 ， Roakin株， Komorov株 ， Herts33株。這些是強(qiáng)毒通過雞胚致弱而成，適于2個(gè)月以上雞 的加強(qiáng)免疫。先用弱毒苗免疫，再用中等毒力疫苗免疫。,第二節(jié) 彈狀病毒科包括4個(gè)屬： 狂犬病毒屬， 水泡病毒屬， 暫時(shí)熱病毒屬，

11、 水生動(dòng)物彈狀病毒屬。一、狂犬病毒屬狂犬病病毒（RABV）（一）致病性：引起人和各種動(dòng)物的狂犬病。潛伏期15~25天，有的達(dá)1年。病毒通過傷口感染，在傷口附近肌肉細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，而后從外周N向中樞N傳播，在中樞N中大量復(fù)制，引起腦組織受損出現(xiàn)N癥狀，病毒從腦沿傳出N至唾液腺，在其中復(fù)制產(chǎn)生大量病毒分泌到唾液中 。,,（二）病毒特征：病毒子呈子彈狀，有囊膜，但底部缺少囊膜，核衣殼螺旋對(duì)稱，單股負(fù)鏈RNA。有5種主要病毒蛋白：①G蛋

12、白：為囊膜表面的突起的糖蛋白，能凝集鵝和雛雞紅C②N蛋白：為核衣殼主要蛋白，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生非中和抗體， 主要誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫③NS蛋白：（磷酸蛋白）與N蛋白和L蛋白一起負(fù)責(zé)病毒RNA轉(zhuǎn) 錄和復(fù)制④M蛋白：基質(zhì)蛋白，與維持病毒結(jié)構(gòu)和形態(tài)有關(guān)⑤L蛋白：RNA聚合酶,（三）抗原性：從自然病例分離的病毒叫“街毒”，對(duì)動(dòng)物感染力強(qiáng)，不同地域分離的病毒其抗原上十分接近。街

13、毒連續(xù)通過兔腦或脊髓內(nèi)傳代，對(duì)家兔潛伏期縮短，固定化，神經(jīng)組織親和性增強(qiáng)，此時(shí)稱“固定毒”。固定毒對(duì)原宿主（狗）的毒力下降，用來制作狂犬病疫苗。,（四）防治1．巴氏德研制“固定毒”制成干燥減毒疫苗。在人被狂犬咬后接種增殖比野毒快的疫苗，在野毒侵入中樞N之前，使機(jī)體產(chǎn)生抗體。最好同時(shí)注射高免球蛋白。2．細(xì)胞滅活苗3．基因工程苗狂犬病感染后動(dòng)物無一耐過，均告死亡。（五）檢查：將海馬角等部位腦組織作觸片，用包涵體染色法染色可見嗜酸

14、性紅色的包涵體。,第二十五章 分節(jié)段的負(fù)鏈RNA病毒包括正粘病毒科，布尼病毒科，砂粒病毒科，都為分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA病毒。第一節(jié) 正粘病毒科1．分類：分4個(gè)屬 甲型流感病毒屬：引起馬，豬，貂，海豹，鯨，禽 及人的感染 乙型流感病毒屬：僅感染人 丙型流感病毒屬：感染人與豬，但極少引起嚴(yán)重疾病 托高土病毒屬：以蜱為

15、媒介的蟲媒病毒，感染人及家畜。,,囊膜上的糖蛋白纖突包括棒狀血凝素H及蘑菇狀的神經(jīng)氨酸酶N是兩個(gè)最為重要的分類指標(biāo)，由于發(fā)生抗原性漂移或轉(zhuǎn)移，甲型流感病毒可分為15個(gè)H型及9個(gè)N型，又可根據(jù)病毒的宿主/地理來源/毒株號(hào)/分離年代，進(jìn)一步分類命名。如：甲型流感病毒 / 馬/ 布拉格 / 1/ 56（H7N7）馬流感病毒1型甲型流感病毒/ 人 / 香港 / 1 /68（H3N2）人流感1968年大流行株。 H1~15 N1~

16、9存在多種組合，但以下幾種組合導(dǎo)致出現(xiàn)重要病原：①H7N7 H3N8 引起馬流感 ； ②H1N1 H3N2 常從豬上分離③H7N7 H4N5 從流感海豹上分離 ； ④H10N4 貂上分離⑤H1N1 H2N2 H3N3 H5N1 引起人流感 ；⑥幾乎所有H1~15 N1~9組合都在禽類中發(fā)現(xiàn)，特別是H5N2 H7N1引起禽流感。,2．主要特性：病毒子多形性，有球形，新分離的為絲狀，有囊膜和纖突，核衣殼

17、螺旋對(duì)稱，線狀單股負(fù)鏈RNA，甲型、乙型基因組分8個(gè)節(jié)段，丙型7個(gè)節(jié)段，托高土病毒6個(gè)節(jié)段，囊膜上有2種糖蛋白纖突，即H和N，有血凝性，細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制。有10個(gè)蛋白（PB2 、PB1、 PA、 NP、 HA、 NA、 M1 、 M2 、 NS1 、 NS2）。3．抗原性：主要抗原成分有：NP 、M1 、HA 、NANP 、M1具有型特異性，相應(yīng)抗體對(duì)病毒感染無保護(hù)力；HA、 NA是種特異性抗原，HA使動(dòng)物產(chǎn)生中和抗體，有保護(hù)作

18、用，NA抗體不能中和病毒但可減少病毒增殖改變病理程度。HA和NA變異頻率很高，有H1~15 N1~9，各亞型之間無血清交叉反應(yīng)。,一、禽流感病毒（AIV）（一）致病性：引起雞，火雞，鴨的流感，也叫真性雞瘟。（二）病毒特征：（見科特征）（三）培養(yǎng)：1．在9~11日齡雞胚尿囊膜或尿囊腔中生長(zhǎng)，使雞胚死亡2．雞胚細(xì)胞，雞胚成纖維C中生長(zhǎng)產(chǎn)生CPE（四）診斷：1．病毒分離：新鮮病料（分泌物，脾，肝，腎）常規(guī)處理接種尿囊腔或雞

19、胚細(xì)胞，收獲尿囊液或細(xì)胞培養(yǎng)液作HA-HI試驗(yàn)。2．血清學(xué)試驗(yàn)：ELISA，中和試驗(yàn)，熒光抗體，補(bǔ)體結(jié)合,第二十六章 套式病毒目這類病毒均采用套式系列的轉(zhuǎn)錄方式，也就是基因表達(dá)通過一系列3′端相同的亞基因組mRNA完成。本目包括 ：冠狀病毒科，動(dòng)脈炎病毒科。第一節(jié) 冠狀病毒科1．分類：由于病毒外膜有突起似日冕狀或王冠狀，故名冠狀病毒，本科有2個(gè)屬 冠狀病毒屬：代表種為傳染性支氣管炎病毒

20、 凸隆病毒屬,,2．主要特征： 病毒子呈球狀，有囊膜及棒狀纖突，核衣殼螺旋對(duì)稱，單分子正股RNA，為已知RNA病毒中基因組最大的，纖突規(guī)則排列為冠狀，外膜由雙層脂蛋白組成。有3或4種主要蛋白：核衣殼蛋白N及若干囊膜纖突糖蛋白（包括主要纖突糖蛋白S，主要嵌膜蛋白M，次要嵌膜蛋白E）。C漿內(nèi)復(fù)制 。 一、雞傳染性支氣管炎病毒 IBV（一）致病性：引起雞的急性高度接觸性呼吸道疾病，特征為咳嗽，噴嚏，氣管啰音。有的毒株

21、可使病雞產(chǎn)生腎臟及腸道病變，腎腫大，尿酸鹽沉積。,冠狀病毒顆粒為不規(guī)則形狀的，直徑約為60-220nm 具有一層外包膜，上附有特色的棒型包膜子粒 (大約20nm 長(zhǎng) x 10nm 寬末端). 它的花冠(Latin, corona)樣外觀賦予它的族名。顆粒的中央顯示EM制備不規(guī)則陰性染色，核蛋白殼呈現(xiàn)松散纏繞相當(dāng)無序的狀態(tài)。,（二）主要特征：病毒呈球形，有囊膜，囊膜表面有棒狀纖突。單分子單股正鏈RNA有感染性，胞漿內(nèi)復(fù)制，以出芽方式

22、獲得囊膜，形成胞漿內(nèi)包涵體。 IBV有3種主要結(jié)構(gòu)蛋白： ①S蛋白，構(gòu)成病毒纖突，位于病毒最外層，它刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，決定病毒組織嗜性，并在病毒與細(xì)胞吸附過程中起重要作用。S蛋白中抗原決定簇某些氨基酸變化，可能產(chǎn)生一個(gè)新的突變種。②M蛋白與病毒復(fù)制有關(guān)。③N蛋白，包裹核酸，使之容易裝于病毒殼內(nèi)，并參與RNA復(fù)制。 病毒經(jīng)1%胰酶在56℃水浴中處理30min后，能凝集雞紅C，而尿囊液中未經(jīng)處理的IBV不凝集雞紅C

23、。,二、牛冠狀病毒 BCV本病毒是新生犢牛腹瀉的重要病原之一，還可引起牛的呼吸道感染和成年牛的冬季血痢。三、犬冠狀病毒 CCV引起犬發(fā)生胃腸炎，以頻繁嘔吐，腹瀉為主，臨床癥狀消失后14~21天復(fù)發(fā)為特征。,第二節(jié) 動(dòng)脈炎病毒科1．分類：本科僅一個(gè)屬即動(dòng)脈類病毒屬，過去歸于被膜病毒科，代表種為馬動(dòng)脈炎病毒，其他還有豬呼吸與繁殖綜合征病毒，猴出血病毒。2．主要特征：核衣殼立方體對(duì)稱(可能為20面體)，有囊膜，囊

24、膜表面有纖突，單分子線狀正股單股RNA，具有5′端帽子結(jié)構(gòu)及3′端尾巴。病毒蛋白有：核衣殼蛋白N，非糖基化的嵌膜蛋白M，2種糖蛋白膜粒GS及GL。,（三）病毒分離1．病料處理：從肺，腎，輸卵管，扁桃體采樣常規(guī)處理；活雞可從氣管和池殖腔棉拭子擦取，無菌處理后接種雞胚或細(xì)胞。2．雞胚接種：9-10日齡雞胚尿囊腔接種。收獲48~96h尿囊液。3．細(xì)胞培養(yǎng)：在雞胚中適應(yīng)6-10代后，接種雞胚肝，肺，腎細(xì)胞，氣管輪培養(yǎng)物增殖，產(chǎn)生

25、包涵體，產(chǎn)生CPE。（四）鑒定 1．中和試驗(yàn)VN 2．HI-HA 3．瓊脂擴(kuò)散 4．熒光抗體 5．ELISA,一、豬呼吸與繁殖綜合征病毒 PRRSV(一)致病性 引起母豬發(fā)生繁殖障礙及呼吸癥狀等。感染豬表現(xiàn)為厭食，發(fā)熱，耳發(fā)紺(過去稱藍(lán)耳病)流涕，母豬在懷孕110天流產(chǎn)，可見早產(chǎn)，死產(chǎn)，木乃伊胎，不死的豬崽十分衰弱，呼吸困難，在出生1