網(wǎng)織紅檢測(cè)方法學(xué)及在現(xiàn)代醫(yī)療診斷中的應(yīng)用推廣會(huì)

1、,汪靜濤邁瑞臨床應(yīng)用部,,網(wǎng)織紅細(xì)胞的檢測(cè)方法及在現(xiàn)代醫(yī)療診斷中的應(yīng)用,2024/3/4,目錄,網(wǎng)織紅細(xì)胞 Reticulocyte,Ret介于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間的過渡階段細(xì)胞其胞質(zhì)中殘存少量核酸物質(zhì)RNARNA經(jīng)堿性染料活體染色后形成藍(lán)色或紫色的點(diǎn)粒狀或絲網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 沉淀物,網(wǎng)織紅細(xì)胞定義,2024/3/4,血細(xì)胞發(fā)育,,紅細(xì)胞的發(fā)育,骨 髓,外周血,紅細(xì)胞的發(fā)育,原始紅細(xì)胞,早幼紅細(xì)胞,中幼紅細(xì)胞,晚幼紅細(xì)胞,

2、網(wǎng)織紅細(xì)胞,成熟紅細(xì)胞,,,,,,大 小,細(xì)胞體積,有 無,細(xì)胞核,核酸物質(zhì),多 少 無,,有核紅細(xì)胞（3d）,,成熟紅細(xì)胞（120d）,網(wǎng)織紅細(xì)胞（2d）,

3、檢測(cè)技術(shù)發(fā)展簡(jiǎn)介,第四級(jí),第三級(jí),第二級(jí),第一級(jí),網(wǎng)織紅細(xì)胞分型,,,,,ICSH將網(wǎng)織紅細(xì)胞分類四型：,網(wǎng)織細(xì)胞計(jì)數(shù)儀法和血液分析儀法：,,LFR,MFR,HFR,,IRF未成熟網(wǎng)織紅,網(wǎng)織紅細(xì)胞的檢測(cè)技術(shù),網(wǎng)織紅（RET）－分析原理,網(wǎng)織紅細(xì)胞的檢測(cè)技術(shù),1、稀釋液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行球形化處理2、花菁類熒光染料進(jìn)入細(xì)胞與核酸結(jié)合3、進(jìn)行光散射和熒光檢測(cè) FS：前向散射信號(hào)（檢測(cè)細(xì)胞體積）

4、 SS：側(cè)向散射信號(hào)（檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)部復(fù)雜程度） FL：熒光信號(hào) （檢測(cè)細(xì)胞核酸含量）4、收集細(xì)胞三維信號(hào)顯示在三維散點(diǎn)圖上 將網(wǎng)織紅細(xì)胞按熒光強(qiáng)度分為： 低、中、高三型（LFR、MFR、HFR）,網(wǎng)織紅細(xì)胞的檢測(cè)技術(shù),6項(xiàng)網(wǎng)織紅系參數(shù)及PLT-O,RBC-o,LFR,MFR,WBC,PLT-O,HFR,紅細(xì)胞的成長(zhǎng)調(diào)節(jié)及影響因素,腎臟疾病肝臟疾病,紅細(xì)胞過度破壞失血,造血

5、功能減退：藥物抑制（抗腫瘤藥物）物理因素抑制（ X線、核素照射）造血干細(xì)胞和造血微環(huán)境的損壞骨髓被異常細(xì)胞或組織所侵潤(rùn)造血原料不足：鐵代謝障礙珠蛋白合成障礙脫氧核苷酸合成障礙,紅細(xì)胞生成素的免疫性破壞（獲得性）：腫瘤免疫性疾?。愶L(fēng)濕）內(nèi)分泌腺功能不全，感染,正常樣本溶血性貧血急性再生障礙性貧血,2024/3/4,檢測(cè)病例,正常樣本,,正常樣本,,,,,,溶血性貧血,溶血性貧血,急性再生障礙性貧血,,,,,急

6、性再生障礙性貧血,檢測(cè)結(jié)果對(duì)比,正常樣本,溶血性貧血,再障性貧血,,2024/3/4,目錄,貧血的診斷、分型及治療監(jiān)測(cè)白血病和腫瘤放、化療對(duì)骨髓造血功能影響的監(jiān)測(cè)骨髓移植后造血功能恢復(fù)的監(jiān)測(cè)腎透析、慢性腎病病人貧血的觀察消化道出血病人所致貧血的恢復(fù)觀察兒童貧血和孕婦貧血的篩查……,現(xiàn)代醫(yī)療診斷中的應(yīng)用,判斷貧血類型 – RET和IRF,貧血的分型及治療監(jiān)測(cè),,,,兒童不同貧血網(wǎng)織紅細(xì)胞各參數(shù),120例1-2歲，HGB大于12

7、0g/L兒童作為對(duì)照組，貧血患兒組118例，其中缺鐵性貧血31例，溶血性貧血22例，再生障礙性貧血12例，白血病化療貧血25例，慢性腎功能不全貧血12例，失血性貧血16例,IRF在地貧中的應(yīng)用,國(guó)內(nèi)研究表明：HbH病（ α地中海貧血）LFR減低，且貧血程度越重LFR越低；MFR、HFR及IRF增高，且隨著貧血程度的加重而增高。,,,,,,,,,,,,,,缺鐵貧血治療跟蹤,叢玉隆教授收集10例缺鐵性貧血患者治療前后各項(xiàng)指標(biāo)變化,IRF是放

8、、化療時(shí)反映骨髓抑制和恢復(fù)較敏感的指標(biāo)。 在骨髓完全受抑制階段，IRF可降為零；骨髓早期恢復(fù)時(shí)，IRF首先升高，并明顯高于正常，而中性粒細(xì)胞及血小板升高較晚。,白血病和腫瘤放化療對(duì)骨髓造血功能監(jiān)測(cè),2024/3/4,During study randomly selected 40 healthy subjectswere taken to establish the reference values forreticulocyte

9、 profile in the laboratory. Fifty childrenwith ALL were 8 months to 15 years of age range and mean age of the patients was 5.5±3.2 years,IRF在急性淋系白血病患兒骨髓恢復(fù)期的預(yù)測(cè)價(jià)值,隨機(jī)抽選40位健康兒童建立參考值 ；50位急性淋系白血病患兒，年齡分布在8月至15歲，平均年齡5.5

10、7;3.2 歲,白血病和腫瘤放化療對(duì)骨髓造血功能監(jiān)測(cè),結(jié)果表明;IRF比Nue#恢復(fù)的早有顯著性差異,白血病和腫瘤放化療對(duì)骨髓造血功能監(jiān)測(cè),2024/3/4,放、化療對(duì)骨髓造血影響的監(jiān)測(cè),Lesesve et al. (1995) found earlier recovery of IRF in 88.4% cases than ANC by a period of 33.3 days. IRF recovery was 72.1% s

11、imilar or earlier than ANC13. In other studies, IRF were also used as a marker of recovery and showed similarresults3,16.,Lesesve 等人 （1995 年） 在治療后33.3天期間觀察，發(fā)現(xiàn)有88.4%病例IRF比Nue#更早發(fā)現(xiàn)恢復(fù)。其它研究也是類似結(jié)論。,白血病和腫瘤放化療對(duì)骨髓造血功能監(jiān)測(cè),IRF是最早出現(xiàn)

12、的骨髓造血功能恢復(fù)的敏感指標(biāo)（外周血粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和血小板用于移植監(jiān)測(cè)均不理想）網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)是一個(gè)獨(dú)立監(jiān)測(cè)骨髓造血恢復(fù)的附加參數(shù)：如第21 d RET# > 15×109/L ，常表示無移植并發(fā)癥,而感染和輸血都不會(huì)影響網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。但若< 15×109/L 并伴有中性粒細(xì)胞和血小板的上升，可能提示骨髓移植失敗。,骨髓移植后造血功能恢復(fù)的監(jiān)測(cè),2024/3/4,Between January 2008

13、and July 2009, studied 46 adult patients with hematologic malignancies who underwent allogeneic PBPC transplant: 37 related and 9 unrelated grafts,未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞和網(wǎng)織血小板在同種異體移植病人造血恢復(fù)的預(yù)測(cè)價(jià)值,2008年1月至2009年7月,研究惡性血液病患者46成人接受同種異體干細(xì)胞

14、移植:其中37 人具有相關(guān)性,骨髓移植后造血功能恢復(fù)的監(jiān)測(cè),2024/3/4,Fig . Evaluation of leukocytes(WBC), platelets (PLT), immature reticulocyte fraction (IRF), and immature platelet fraction (IPF) in the pre- and posttransplant period.,骨髓移植后造血功能恢復(fù)的監(jiān)

15、測(cè),自體移植后不同時(shí)期細(xì)胞變化,,0 5 10 15 20 25 30,0,,,,,,,,,,,,,（DAY）,自體移植后不同時(shí)期細(xì)胞變化,2024/3/4,目錄,PLT-O（光學(xué)血小板）,2024/3/4,PLT是一個(gè)常用參數(shù)在很多疾病的診療過程中有著重要意義功能：止血、血栓、損傷修復(fù)。 新發(fā)現(xiàn)功能：抗感染。（禽流感）臨床應(yīng)用

16、：了解造血功能、感染、化療； 伴隨發(fā)熱的血小板減少：糖尿病、肝硬化等。,所有的血液分析儀均采用：傳統(tǒng)電阻抗法測(cè)量PLT，速度快，成本低。但是經(jīng)常存在電子噪聲、大血小板、小紅細(xì)胞、血小板凝集 、破碎紅細(xì)胞、白血病性白細(xì)胞碎片等的干擾。,PLT-O（光學(xué)血小板）,如此重要的參數(shù)，為什么有時(shí)報(bào)告單上的結(jié)果與臨床癥狀不符呢？,,大血小板,PLT-Histogramm,(x 1000),PLT-O（光學(xué)血小

17、板）,把血小板算成了紅細(xì)胞,結(jié)果PLT假性減少,,1.冷凝集（37℃水浴預(yù)溫20min）2.EDTA依賴型血小板聚集（更換抗凝劑沖抽或加入1%丁胺卡那）,血小板聚集,(x 400),PLT-O（光學(xué)血小板）,把血小板算成了白細(xì)胞,結(jié)果PLT假性減少,,細(xì)胞碎片干擾,PLT-O（光學(xué)血小板）,細(xì)胞碎片算作血小板,結(jié)果PLT假性增加,不是檢驗(yàn)科的工作沒有做好，這是因?yàn)橐郧暗募夹g(shù)水平還不能實(shí)現(xiàn)：以低廉的價(jià)格，很少的分析時(shí)間，得到正確的結(jié)果。

18、,2024/3/4,對(duì)于這些干擾，以前的做法：,相差顯微鏡,流式分析儀,是檢驗(yàn)科不想做好嗎？還是另有隱情？,那怎么解決這個(gè)漏洞呢？,臨床案例1：溶血性貧血,某醫(yī)院血液科，兒科住院部綁定網(wǎng)織紅?；颊?，男，41歲，血液內(nèi)科門診患者，2013年5月16日抽取抗凝靜脈血進(jìn)行血常規(guī)測(cè)試，后診斷為溶血性貧血 。,背景信息,人工鏡檢信息,鏡下觀察可見：1 淋巴細(xì)胞2 盔形紅細(xì)胞3 淚滴狀紅細(xì)胞4、 5紅細(xì)胞碎片6 血小板,BC-6

19、800結(jié)果界面,,臨床案例1：溶血性貧血,簡(jiǎn)要定義：由于各種原因使紅細(xì)胞生存時(shí)間縮短，破壞增多或加速，而骨髓的代償造血功能不足以補(bǔ)償其損耗所發(fā)生的一類貧血;,（正常樣本）,（溶血性貧血樣本）,,臨床案例1：溶血性貧血,,,BC-6800研究界面,報(bào)告單結(jié)果界面,光學(xué)血小板（PLT-O）反映了正確的血液學(xué)特征報(bào)告了正確的結(jié)果！,臨床案例1：溶血性貧血,上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院，是一所三級(jí)甲等大型綜合性教學(xué)醫(yī)院名列：全國(guó)前列。,4

20、6,醫(yī)院背景,臨床案例2：血小板聚集,農(nóng)村患者，男，41歲，咳嗽，發(fā)熱；到當(dāng)?shù)匦l(wèi)生所就診按普通感冒處理，查血常規(guī)發(fā)現(xiàn)PLT嚴(yán)重偏低；感冒癥狀消失，患者多次復(fù)查血常規(guī)，PLT結(jié)果一直嚴(yán)重偏低，當(dāng)?shù)蒯t(yī)院查不出PLT嚴(yán)重偏低的原因?；颊叻浅?dān)心自己得了什么絕癥（患者實(shí)際已經(jīng)恢復(fù)正常），到上海市第一人民醫(yī)院查找PLT偏低的原因。LH-750儀器提示PLT聚集，科室手工鏡檢后備注：血小板成簇可見（藍(lán)蓋枸櫞酸納抗凝管），RBC無明顯異常。,

21、患者初次就診,患者二次就診,47,患者不放心，又到交大瑞金醫(yī)院檢查，醫(yī)院開始把患者樣本放在LH755上檢測(cè)PLT結(jié)果嚴(yán)重偏低，同時(shí)提示“血小板聚集”；再把樣本在XE-5000上檢測(cè)PLT還是偏低，同時(shí)也提示“血小板聚集”；醫(yī)生在BC-6800上檢測(cè)一次，PLT檢測(cè)結(jié)果正常，同時(shí)也提示“血小板聚集”。老師很震驚，最后醫(yī)生按BC-6800的結(jié)果報(bào)告。患者看到PLT結(jié)果正常，那種心情無法形容，一塊石頭終于落地。,患者三次就診,終于得到滿意

22、結(jié)果,臨床案例2：血小板聚集,,,,,48,PLT結(jié)果報(bào)： 135,報(bào)“PLT聚集，PLT直方圖異常報(bào)警”,BC-6800數(shù)據(jù),PLT-O 135 PLT-I 2,PLT聚集樣本彰顯PLT-O強(qiáng)大分析能力,數(shù)據(jù)比對(duì),PLT聚集樣本彰顯PLT-O強(qiáng)大分析能力,這不是一個(gè)孤立的事件,2013年1-4月，解放軍總醫(yī)院，檢驗(yàn)科樂家新主任在科室內(nèi)部做了相關(guān)調(diào)查：假性血小板減低：2200例(其中EDTA依賴 21例)；脂

23、質(zhì)干擾1700余例RBC冷凝集：30例；糾正血液系統(tǒng)疾?。?6例(其中白血病21例),對(duì)于PLT聚集樣本：為什么RET通道的PLT-O更可靠？,1、檢測(cè)前通過反應(yīng)池的攪拌桿混勻，打散了部分聚集血小板；2、使用DR稀釋液對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行了球形化處理，部分聚集的PLT被球形化后自動(dòng)散開。 3、熒光染色后，通過收集前向散射信號(hào)（細(xì)胞體積）、熒光信號(hào)（細(xì)胞核酸含量）在散點(diǎn)圖上可以非常清楚的將PLT與RBC分開，即使通過前面兩個(gè)步驟仍然

24、聚集的PLT也會(huì)被劃分到PLT一邊（在阻抗通道中往往被劃分到RBC一邊）。,蘇州大學(xué)第一附屬醫(yī)院采集PLT聚集樣本，對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)：PLT_O值更加接近于真值說明：PLT在受到聚集干擾時(shí)，PLT-o值與真值較接近，且有很好的相關(guān)性。,PLT聚集模擬實(shí)驗(yàn),網(wǎng)織紅相關(guān)參數(shù)（RET%、IRF）的應(yīng)用：各種貧血的診斷、分型貧血的療效觀察監(jiān)測(cè)白血病和腫瘤放、化療對(duì)骨髓造血功能影響的監(jiān)測(cè)骨髓移植后造血功能恢復(fù)的監(jiān)測(cè)光學(xué)