無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前項(xiàng)目簡(jiǎn)介

1、無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)簡(jiǎn)介,內(nèi)容提要,sd_bao@sina.com,一，染色體非整倍體概述（唐氏綜合征為例 ）,sd_bao@sina.com,,,21、18、13-三體綜合征是人類(lèi)最常見(jiàn)的三種染色體疾病，患兒面容特殊，絕大多數(shù)為嚴(yán)重智力障礙及器官畸形，對(duì)家庭和社會(huì)造成巨大危害和負(fù)擔(dān)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)胎兒染色體疾病尚無(wú)有效治療方法，最好的方法是在孕期通過(guò)產(chǎn)前篩查及診斷，發(fā)現(xiàn)異常并及時(shí)采取相應(yīng)措施,,染色體非整倍體疾病臨床表現(xiàn),21－三體照片,a.

2、 同源染色體不分離;b. 姐妹染色單體不分離,二，染色體非整倍體病發(fā)病機(jī)理 減數(shù)分裂中染色體不分離,第一次減數(shù)分裂,第二次減數(shù)分裂,三，現(xiàn)有的產(chǎn)前篩查與診斷手段,sd_bao@sina.com,產(chǎn)前篩查 母血清學(xué)篩查 頸項(xiàng)透明膜厚度篩查產(chǎn)前診斷 羊水穿刺 絨毛取樣 臍靜脈穿刺,7,,侵入性診斷方式,風(fēng)險(xiǎn)計(jì)算,,現(xiàn)有產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷的缺陷性,sd_bao@sin

3、a.com,1992-2006,傳統(tǒng)診斷方法（穿刺）導(dǎo)致的正常胎兒流失,5619,最緊迫任務(wù)：,新方法的探索：提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性與檢出率、降低檢測(cè)過(guò)程中的假陽(yáng)性率和假陰性率。,sd_bao@sina.com,,,,四，無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)技術(shù)產(chǎn)生前提一：孕婦外周血中存在胎兒DNA,胎兒DNA來(lái)源和特點(diǎn),來(lái)源：1 胎兒細(xì)胞通過(guò)胎盤(pán)滲透到母血中，被母體免疫系統(tǒng)破壞，胎兒DNA殘留下來(lái)；2 胎兒細(xì)胞凋亡；3 胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞的凋亡基本特

4、點(diǎn)：1 含量有一定的變化規(guī)律。妊娠第4周開(kāi)始可檢出胎兒游離DNA，隨著孕周增加而增加，存在個(gè)體差異，平均濃度。2 分娩后短時(shí)間內(nèi)消失，平均半衰期為16.3min (4-30min)， 2h就無(wú)法檢出。再次妊娠不影響檢測(cè)結(jié)果。3 DNA片段較小，平均166bp左右。常規(guī)技術(shù)很難檢測(cè),前提二：第二代高通量測(cè)序儀發(fā)明,6億個(gè)DNA片段/次，全基因組測(cè)序只要10天/臺(tái)；90個(gè)DNA片段/次，全基因組測(cè)通要50年/臺(tái)。,（2012年）,

5、無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)：母血漿DNA+高通量測(cè)序,2024/3/9,13,Unique reads (單一序列讀?。? no mismatch, one location,(Lo et al, PNAS, 2008),,,,,,,,,理論模型,母親Chr 21：95×2=190,以21-三體為例：100 DNA單位 /毫升血漿。其中，95個(gè)單位來(lái)源于母親， 5個(gè)單位來(lái)源于胎兒,通過(guò)大規(guī)模并行測(cè)序，獲得分布在每條染色體上的真

6、實(shí)的核酸片段數(shù)量，經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)與比較： 正常胎兒 或者 21-三體胎兒,,,,,正常胎兒 Chr 21：5×2=10,母親Chr 21：95×2=190,21-三體胎兒 Chr 21：5×3=15,,,醫(yī) 院,檢測(cè)機(jī)構(gòu),無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)流程,sd_bao@sina.com,準(zhǔn)確性高于99%；早期診斷，12孕周即可檢測(cè)；減少妊娠晚期引產(chǎn)對(duì)孕婦造成的傷害；非侵入性，減輕孕婦心理負(fù)擔(dān)，

7、無(wú)流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)以及產(chǎn)前診斷引起的并發(fā)癥；可以同時(shí)檢測(cè)其它染色體異常所需樣本量少，只需5毫升母體外周血。,,無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)：,無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)：保險(xiǎn)保障,檢測(cè)結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)受檢者產(chǎn)前診斷所產(chǎn)生的費(fèi)用{含：羊膜腔穿刺術(shù)(或經(jīng)皮臍靜脈穿刺術(shù))和染色體核型分析和染色體熒光原位雜交（或FISH）}，保險(xiǎn)公司給予報(bào)銷(xiāo)不超過(guò)2500元。檢測(cè)結(jié)果為低風(fēng)險(xiǎn)，若受檢者嬰兒出生后一年內(nèi)經(jīng)縣級(jí)以上檢測(cè)醫(yī)院專(zhuān)科醫(yī)生明確診斷患有“21-三體綜合征

8、”、“18-三體綜合征”、“13-三體綜合征”，保險(xiǎn)公司支付受檢者保險(xiǎn)四十萬(wàn)元整,孕期各項(xiàng)檢測(cè)信息圖,10-13.5周,早孕期篩查(檢出率85%),中孕期篩查 (檢出率81%),15-20周,16-22周羊水穿刺（流產(chǎn)率0.5-1%）,9-11周絨毛取樣（流產(chǎn)率1-5%）,24-28周 臍帶血取樣（流產(chǎn)率1-3%）,0,40周,,12-24周無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)（準(zhǔn)確率>99%）,適應(yīng)人群和適應(yīng)癥,經(jīng)B超確認(rèn)為單、活胎

9、孕婦；可檢測(cè)胎兒-13三體、18三體和21三體；孕12周以上均可進(jìn)行檢測(cè)。,禁忌人群、禁忌癥,懷多胞胎的孕婦；孕婦本人為染色體非整倍體疾病患者；孕婦接受過(guò)異體輸血、移植手術(shù)、干細(xì)胞治療、接受過(guò)配偶或親屬淋巴細(xì)胞免疫治療等；無(wú)法精確檢測(cè)胎兒染色體嵌合型、易位型、微缺失、微重復(fù)、微缺失等結(jié)構(gòu)性異常；,院內(nèi)流程,檢測(cè)前確認(rèn)事項(xiàng)：1.單活胎（超聲確認(rèn)）2.孕后未接受過(guò)異體的血液制品；3. 孕12周以后開(kāi)始檢測(cè),產(chǎn)前診斷中心/

10、產(chǎn)科就診,醫(yī)生解釋該項(xiàng)目孕婦簽署知情同意書(shū)/送檢單,保險(xiǎn)單,孕婦交費(fèi)后返回抽血（附知情同意/送檢單）,采血：常溫采血管采集外周血5ml（輕微顛倒采血管10次）,產(chǎn)科醫(yī)生粘貼條形碼，送檢單、保單、采血管,采血后立即交給標(biāo)本處理人員（附申請(qǐng)單）（標(biāo)本室溫放置）；標(biāo)本處理人員72小時(shí)內(nèi)寄送至檢驗(yàn)所,,,,,,全血采集,抽取孕婦外周血5 mL，采用 常溫采血管；采血完畢后，輕微顛倒采血管10次，室溫保存，在72小時(shí)內(nèi)送至檢驗(yàn)所處理?！咀?/p>

11、意事項(xiàng)】采血時(shí)孕婦無(wú)需空腹；采血管為 常溫管顛倒混勻時(shí)動(dòng)作不能太劇烈，防止溶血。,數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)（截至2012年3月）,全球100多家合作醫(yī)院。完成核型驗(yàn)證3476例，產(chǎn)后隨訪驗(yàn)證5489例。,病例分析：?jiǎn)渭冃?標(biāo)準(zhǔn)型,標(biāo)準(zhǔn)型T21,樣本編號(hào)： PDP10003761孕婦年齡：31唐 篩：1/510 （低風(fēng)險(xiǎn)）無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：T21核型分析：47，XX，+21,,,T13 樣本編號(hào)：PDP100003321 孕婦年齡：

12、32 無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：T13 核型分析：47，XX，+13,病例分析：?jiǎn)渭冃?標(biāo)準(zhǔn)型,T18 樣本編號(hào)：PDP100002190 孕婦年齡：32 無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：T18 核型分析：47，XY，+18,T9 PDB11AJ00026，41歲，孕23w+4周 無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：T9 羊水核型：T9,,T16 PDB11AJ00783 ，30歲，孕19周 無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：16號(hào)染色體偏多 羊水FISH：T16,,,,病例

13、分析：其它染色非整倍體,病例分析：T9嵌合體,PDB11AG00106，39歲，孕20周無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：兩次測(cè)序結(jié)果均顯示9號(hào)染色體偏多羊水核型：47,XX,+9[55]/46,XX[33]臍血核型：47,XX,+9[3]/46,XX,[225]晚期B超發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重畸形，已引產(chǎn),,胎兒核型,,,,,項(xiàng)目總結(jié),該檢測(cè)技術(shù)覆蓋所有染色體，可精確檢測(cè)21、18、13、X、Y等染色體非整倍體。建立了較完善的檢測(cè)流程和質(zhì)量控制體系自主開(kāi)發(fā)的信息