大黃魚TLR13、TLR7和TLR8的分子特征與免疫功能的初步研究.pdf

1、Toll樣受體(TLRs)是一類保守的跨膜蛋白家族，是典型的用于檢測入侵病原體的分子傳感器。它們能夠廣泛的識別病原相關(guān)分子模式(PAMPs)，如細(xì)菌和真菌的細(xì)胞壁成分、細(xì)菌脂蛋白、細(xì)菌和病毒的核酸;識別PAMPs后緊接著級聯(lián)效應(yīng)，促進(jìn)炎癥反應(yīng)、激活先天性免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答。大黃魚(Pseudosciaenacrocea)是我國重要的海水經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚種，本研究中，我們克隆和鑒定了大黃魚內(nèi)三個TLRs，Lyc TLR13，LycTLR7和L

2、ycTLR8，希望有助于加深對大黃魚先天性免疫的認(rèn)識，同時為大黃魚病害防治提供新的思路。
　　 Lyc TLR13，LycTLR7和LycTLR8的全長分別是2745 bp，3165 bp，3093 bp，依次編碼914，1054，1030個氨基酸的蛋白。這三個蛋白具有典型的Toll樣受體結(jié)構(gòu)域:胞外段有數(shù)個富含亮氨酸的重復(fù)序列(Leucine-rich repeats，LRR)，胞內(nèi)段有一個保守的Toll/IL-1受體區(qū)域(T

3、oll/IL-1 receptor domain，TIR)。值得注意的是LycTLR7胞外區(qū)比LycTLR8和LycTLR13多一個N-端LRR序列(LRR-NT)。此外，我們還在LycTLR7和LycTLR8胞外區(qū)域的氨基酸序列上發(fā)現(xiàn)了保守的CxRCxxxxxPCxxC結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域是它們感受刺激并激活下游信號通路所必須的。亞細(xì)胞定位分析表明，這三個TLRs在鯉魚上皮細(xì)胞(EPC)中都定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，這結(jié)果與它們在哺乳動物中的同源蛋

4、白相似。組織分布方面，它們在各種受試組織中都有表達(dá)，尤其在免疫相關(guān)組織中高表達(dá)，比如脾臟和腎臟。
　　 受病毒類似物poly(I∶C)刺激后，LycTLR7和LycTLR8的在大黃魚腎臟和脾臟組織中的表達(dá)水平都發(fā)生上調(diào);細(xì)菌23S rRNA上的保守序列(')ACGGAAAGACCCCG'是小鼠TLR13的特異性配體，在受到它刺激后，LycTLR13在大黃魚腎細(xì)胞中的表達(dá)水平發(fā)生上調(diào)。
　　 值得一提的是，TLR13是一個