腺苷對(duì)豬DCD供胰低溫機(jī)械灌注后胰島細(xì)胞功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　當(dāng)前，心臟死亡供者(Donor after Cardiac Death，DCD)已成為國際上接受的三大捐贈(zèng)者資源之一，其應(yīng)用逐年增加，臨床療效得到許多國際權(quán)威機(jī)構(gòu)的認(rèn)可。然而，因?yàn)闊崛毖獣r(shí)間較長，DCD器官在移植術(shù)后所產(chǎn)生的原發(fā)性無功能(primary nonfunction，PNF)和移植物功能障礙(initial poor function，IPF)的幾率比較高，因此器官的移植前的修復(fù)和保存尤為重要。
　　機(jī)

2、械灌注不再是基礎(chǔ)器官移植研究的一個(gè)新課題，特別是在已有近30年歷史的腎移植領(lǐng)域。但是，這項(xiàng)研究一直保持在基礎(chǔ)水平的研究，并沒有廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)踐，主要原因是受技術(shù)條件和設(shè)備技術(shù)水平的制約。近年來，隨著器官移植需求量的增加，器官移植醫(yī)生務(wù)必限制移植前移植物的丟失量并保證移植物的活力達(dá)到最大可利用率。并且新一代的灌注設(shè)備不斷完善，機(jī)械灌注再次成為移植界熱門話題。但在國內(nèi)，胰腺的機(jī)械灌注剛剛起步。
　　目前器官保存液主要已UW液為主，但

3、是其僅限于器官的冷保存，是否能在機(jī)械灌注中發(fā)揮其作用還有待研究。針對(duì)機(jī)械灌注對(duì)微循環(huán)要求的特點(diǎn)，如何使組織得到有效且充分的灌注，將是移植醫(yī)生工作的重點(diǎn)。腺苷(ADO)是一種內(nèi)生性的核苷。它能夠參與到體內(nèi)糖，蛋白質(zhì)，脂肪等多種物質(zhì)的代謝，改善機(jī)體代謝。它可使低溫保存的胰腺在機(jī)械灌注時(shí)達(dá)到能量的供給作用。
　　方法:
　　1、以雜交豬（杜洛克、大白、長白）構(gòu)建出DCD模型，采取機(jī)械灌注和單純冷保存的方法，分析研究兩者胰腺的病理學(xué)

4、變化，觀察機(jī)械灌注對(duì)胰腺保存的功效;
　　2、對(duì)比研究分析機(jī)械灌注不同時(shí)間后胰腺組織中其caspase-3的表達(dá)，反映不同時(shí)間的機(jī)械灌注對(duì)胰腺保存的作用;
　　3、分析研究經(jīng)過低溫機(jī)械灌注的方法，在不同時(shí)間段所獲取供體豬的胰島當(dāng)量，胰島純度，活性以及胰島素釋放指數(shù)的情況，明確不同時(shí)間的低溫機(jī)械灌注對(duì)豬DCD供胰提取胰島質(zhì)量的作用;
　　4、對(duì)比研究分析單純UW液機(jī)械灌注組與UW液加腺苷機(jī)械灌注組提取胰島當(dāng)量，純度，活性

5、及胰島素釋放指數(shù)的變化，反映腺苷在機(jī)械灌注中對(duì)提取胰島質(zhì)量的作用，并應(yīng)用微量透析技術(shù)進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果:
　　病理學(xué)評(píng)分:單純冷保存組為3.9±0.63，機(jī)械灌注組分為8.2±1.21，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著機(jī)械灌注時(shí)間的延長，細(xì)胞凋亡逐步出現(xiàn)，并且出現(xiàn)血管壁細(xì)胞，外分泌腺體細(xì)胞及胰島細(xì)胞依次凋亡的順序。機(jī)械灌注后，提取胰島的當(dāng)量、純度、活性及胰島素釋放指數(shù)明顯增多，對(duì)比未灌注組提取胰島的質(zhì)量存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

6、。對(duì)比研究分析低溫機(jī)械灌注后，不同時(shí)間段所提取豬DCD供胰的胰島當(dāng)量，胰島純度，活性以及胰島素釋放指數(shù)的情況，明確不同時(shí)間的低溫機(jī)械灌注對(duì)豬DCD供胰提取胰島質(zhì)量的作用，得出結(jié)論。機(jī)械灌注后，提取胰島當(dāng)量，純度，活性及胰島素釋放指數(shù)明顯增多，對(duì)比未灌注組提取胰島的質(zhì)量存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并且在機(jī)械灌注180分鐘時(shí)，胰島的質(zhì)量達(dá)到最佳，針對(duì)機(jī)械灌注也存在冷缺血時(shí)間長的特點(diǎn)，如何使組織進(jìn)行有效的能量供給，我課題組應(yīng)用了腺苷改良灌注液。腺苷

7、(ADO)是一種內(nèi)生性的核苷。它能夠參與到體內(nèi)糖，蛋白質(zhì)，脂肪等多種物質(zhì)的代謝，改善機(jī)體代謝。它可使低溫保存的胰腺在機(jī)械灌注時(shí)達(dá)到能量的供給作用。并且通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)相同灌注時(shí)間后，對(duì)比單純UW液灌注組，UW液加腺苷灌注組提取胰島當(dāng)量，純度，活性及胰島素釋放指數(shù)明顯增多，存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并且通過微量透析技術(shù)加以證實(shí)。
　　結(jié)論:
　　對(duì)DCD供胰實(shí)行機(jī)械灌注180分鐘，為最佳的灌注時(shí)間，使得胰腺的修復(fù)效果達(dá)到最佳，而組織水