蒺藜提取物對(duì)adr所致大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響

1、蒺藜提取物對(duì)蒺藜提取物對(duì)ADR所致大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響所致大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響張曉丹，呂高照，蔡瑞雪(哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江哈爾濱150076)[摘要摘要]目的目的：研究蒺藜提取物對(duì)阿霉素(ADR)所致大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法方法：將蒺藜提取物灌胃于ADR所致心肌細(xì)胞凋亡的大鼠采用電鏡對(duì)大鼠心肌細(xì)胞進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察，采用TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)，免疫組化SP法檢測(cè)心肌細(xì)胞Bax、Bcl2蛋白的表達(dá)。結(jié)果結(jié)果：ADR

2、累積用量20mg?kg1可致大鼠心肌細(xì)胞凋亡，蒺藜提取物中、高劑量組(40mg?kg1、60mg?kg1)可減輕心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的損傷，蒺藜提取物中、高劑量組較模型組均可顯著降低細(xì)胞凋亡率(P0.05)。蒺藜提取物中、高劑量組可顯著上調(diào)Bcl2表達(dá)(P0.01)、下調(diào)Bax表達(dá)(P0.05)。結(jié)論結(jié)論：蒺藜提取物可抑制ADR所致大鼠心肌細(xì)胞的凋亡，對(duì)阿霉素所致的心臟毒性有保護(hù)作用。[關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞]蒺藜提取物；阿霉素；心肌細(xì)胞；凋亡Eff

3、ectofextractfromTribulusterrestrisLoncardiocyteapoptosiscausedbyadriamycininratsZHANGXiaodanLVGaozhaoCAIRuixue(SchoolofPharmacyHarbinUniversityofCommerceHarbin150076China)[Abstract]Objective:Tostudytheeffectofextractfrom

4、TribulusterrestrisLoncardiocyteapoptosiscausedbyadriamycininrats.Methods:Ratsweregivenintraperitonealinjectionofadriamycin(ADR)toinducecardiocyteapoptosis.AftercontinuousigofextractfromTribulusterrestrisLtheeveryexperime

5、ntalgroupwasobservedmyocardialultrastructurewithelectronmicroscope.TheapoptoticrateofmyocardialcellswasdeterminedbyterminaldeoxynucleotidyltransferaseediateddUTPnickendlabeling(TUNEL)theexpressionofbcl2baxwasdetectedbyus

6、ingimmunohistochemicalmethod.Results:ADRof20mg?kg1wasgiventoratsintermittentlyinduced1cardiocyteapoptosis.ExtractfromTribulusterrestrisLdlehighdosagegroups(40mg?kg160mg?kg1)couldreducecardiotoxicityinjuryofADR.Extractfro

7、mTribulusterrestrisLdlehighdosagegroupscouldsignificantlyincreasedthebcl2expression(P0.01)reducedbaxexpression(P0.05)Conclusion:ExtractfromTribulusterrestrisLmaydecreasedtheinducedcardiocyteapoptosisbyadriamycinhasaprote

8、ctiveeffectonadriamycininducedcardiotoxicity.作者簡(jiǎn)介：張曉丹(1958)，女，博士，教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要研究方向：心血管藥理Tel：045184605022，Email：zhangxd85@物每日灌胃給藥60mg?kg1。各組蒺藜提取物于實(shí)驗(yàn)第一天起開始給藥，每日灌胃1次，連續(xù)16d，同時(shí)，ADR給藥劑量、給藥時(shí)間、給藥次數(shù)同ADR組。蒺藜提取物灌胃給藥是在腹腔注射ADR前30min進(jìn)

9、行；(5)正常組：實(shí)驗(yàn)處理同ADR組，腹腔注射等劑量生理鹽水。2.2心肌組織的電鏡觀察大鼠心臟分離后，迅速取心尖部分約1mm1mm1mm大小，2.5%戊二醛固定1.5h，1%鋨酸固定1h，經(jīng)50%、70%、80%、90%、100%丙酮逐級(jí)脫水，以包埋劑環(huán)氧樹脂821包埋聚合，超薄切片機(jī)切片，醋酸雙氧鈾檸檬酸鉛雙染色，透射電鏡觀察。2.3TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率根據(jù)試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行操作，大致過(guò)程如下：用蛋白酶K消化以暴露DNA，在

10、末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)下，用連接堿性磷酸鹽的dUTP對(duì)DNA裂解部分進(jìn)行標(biāo)記，然后再用免疫組織化學(xué)方法顯色，正常心肌細(xì)胞核呈藍(lán)色，而凋亡陽(yáng)性心肌細(xì)胞核呈棕黃色。陰性對(duì)照用雙蒸水代替試劑盒中的反應(yīng)混合物，不用蘇木素復(fù)染，其余步驟不變。每組隨機(jī)選取6只大鼠，每只大鼠觀察5張切片，按說(shuō)明書操作，400倍光鏡下計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞總數(shù)，按公式：陽(yáng)性細(xì)胞細(xì)胞總數(shù)100%，取其比值的平均值為心肌細(xì)胞凋亡率。2.4免疫組化檢測(cè)Bax、Bcl2蛋白表達(dá)按照試劑

11、盒說(shuō)明書進(jìn)行免疫組化操作。主要步驟:組織切片在室溫中放置60分鐘或60℃恒溫箱中烘烤20分鐘，然后進(jìn)行脫臘、水化；3%H2O2室溫孵育10min，清除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，蒸餾水清洗；將切片放入0.01mol(pH6.0)枸櫞酸緩沖液中，置微波爐內(nèi)修復(fù)抗原15min；滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗(1∶100)，陰性對(duì)照用PBS代替一抗。冰箱中過(guò)夜，滴加生物素化IgG(二抗)工作液，37℃孵育30min，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，室溫下孵

12、育30min，應(yīng)用DAB溶液顯色，鏡下出現(xiàn)棕色反應(yīng)，即用自來(lái)水終止反應(yīng)，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。每組隨機(jī)選取6只大鼠，每只大鼠觀察5張切片，用ImageProPlus4.5圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)陽(yáng)性染色光密度值，每張切片隨機(jī)檢測(cè)5個(gè)視野，計(jì)算平均光密度值。2.5統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以s表示，采用SPSS16.0軟件進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)的單因素方差分析(ANOVA)，x組間多重比較采用最小顯著差法(LSD)，P0.05為差異有顯著性。3.結(jié)果結(jié)果