雄性生殖細(xì)胞特異性表達(dá)gfp小鼠的繁殖及其表型鑒定

1、雄性生殖細(xì)胞特異性表達(dá)GFP小鼠的繁殖及其表型鑒定王志茹12，李軍2，劉曉梅1，吳紅聯(lián)2，朱德生2（1.吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，長春130021；2.北京大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，北京100871）【摘要】目的目的繁殖雄性生殖細(xì)胞特異性表達(dá)綠色熒光蛋白（GFP）小鼠，為進(jìn)行小鼠生殖系統(tǒng)毒性研究提供有效的工具。方法方法將Ddx4cre轉(zhuǎn)基因雄鼠與Rosa26mTmG轉(zhuǎn)基因雌鼠交配，產(chǎn)生子代動(dòng)物，利用分子生物學(xué)、組織病理學(xué)及活體成像等技術(shù)，分別從分子

2、、細(xì)胞和組織水平對(duì)子代及其親代小鼠進(jìn)行表型鑒定。結(jié)果結(jié)果PCR結(jié)果表明在子代小鼠的睪丸組織中發(fā)生了Cre酶介導(dǎo)的特異性基因重組；活體成像可以看到在F1代小鼠的睪丸組織中具有GFP的表達(dá)；睪丸冰凍切片及精子熒光觀察顯示GFP主要表達(dá)于次級(jí)精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和精子中。結(jié)論結(jié)論雄性生殖細(xì)胞特異性表達(dá)GFP小鼠繁殖成功?！娟P(guān)鍵詞】睪丸；特異性；基因重組；GFPProductionphenotypeidentificationofspecific

3、expressedgreenfluescentproteininmalemicegermcellsWANGZhiru12，LIJun2，LIUXiaomei1，WUHonglian2，ZHUDesheng2(1.Schoolofpublichealth，JilinUniversity，Changchun130021，China；2.PekingUniversityLabatyanimalcentre，Beijing100871，Chin

4、a)【Abstract】ObjectiveTheaimofthisstudyisproductionofganspecificanimalmodelfstudyingreproductivetoxicityinmice.MethodsF1generationwasgottenbymatingtheDdx4cretransgenicmalemicewiththeRosa26mTmGtransgenicfemalemice.F1offspr

5、ingitsparentsphenotypewasscreenedbymolecularbiologicalhistopathologicalinvivoimagingtechnology.ResultsAtmolecularlevelspecificDNAfragmentwasonlyfoundintestisofF1offspringAttheganleveltheexpressionofgreenfluescentproteinc

6、ouldonlybeobservedintestisofF1offspringTesticularfrozensectionsspermfluescenceobservationshowedthatgreenfluescentproteinweremainlyexpressedinthegermcelllineagesuchassecondaryspermatocytespermatocytespermatozoon.Conclusio

7、nsTheproductionofthemicewithspecificgermcellexpressedgreenfluescentproteinbyCreloxPrecombinationsystemwerebuiltsuccessfully.【Keywds】TestisSpecificityGenerecombinationGreenfluescentprotein[作者簡介]王志茹（1988）女，在讀碩士研究生，研究方向：納米毒

8、理學(xué)，Email：843872569@[通訊作者]朱德生(1960)男，高級(jí)工程師，研究方向：轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，Email：4cre小鼠在Ddx4啟動(dòng)子調(diào)控下在生殖系統(tǒng)中特異性表達(dá)Cre酶的轉(zhuǎn)基因小鼠[4]。Rosa26mTmG小鼠是全身組織器官表達(dá)紅色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠，當(dāng)其與Cre轉(zhuǎn)基因小鼠交配產(chǎn)生的后代將發(fā)生Cre酶介導(dǎo)的特異性基因重組，將敲除mT基因，從而激活mG基因的表達(dá)，產(chǎn)生綠色熒光蛋白（圖1）[5]。1.2動(dòng)物交配Ddx4cr

9、e小鼠4只，雌雄各半，雄性為雜合子，雌性為純合子，1：1交配，擴(kuò)大種群。Rosa26小鼠4只，雌雄各半，均為純合子，1：1交配，擴(kuò)大種群。Ddx4cre小鼠6只，雄性，雜合子（TW）；與Rosa26小鼠6只，雌性，純合子（mutmut）；1：1交配，獲得F1代雄性小鼠，其基因型可分為兩種Ddx4cre（TW）；Rosa26mTmG（mutwt）與Ddx4cre（WW）；Rosa26mTmG（mutwt）。而在表達(dá)Cre酶的組織，會(huì)產(chǎn)生C