肝功能檢查指標的選擇與評價

1、肝功能檢查指標的選擇與評價,一、實驗目的,,掌握：血清轉氨酶、膽紅素測定的方法和原理；熟悉：重氮試劑法測定血清膽紅素的操作步驟；了解：血清轉氨酶、膽紅素測定的臨床意義。,ALT、AST測定,,測定方法：連續(xù)監(jiān)測法、賴氏法連續(xù)監(jiān)測法測定丙氨酸氨基轉移酶基本原理： L-丙氨酸+α-酮戊二酸 α-丙酮酸+L-谷氨酸 α-丙酮酸+NADH 乳酸+NAD+連續(xù)監(jiān)測法測定天門冬

2、氨酸氨基轉移酶基本原理： L-天門冬氨酸+α-酮戊二酸 草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+NADH+H+ L-蘋果酸+NAD+ 連續(xù)監(jiān)測法測定NADH被氧化為NAD+,可在340nm處連續(xù)監(jiān)測到NADH被氧化引起吸光度下降速率，該下降速率與ALT、AST活性呈正比。,二實驗原理,,,ALT,LDH,,,AST,MDH,三、試劑與器材,丙氨酸氨基轉移酶試

3、劑盒：R1: α-酮戊二酸、NADH、乳酸脫氫酶（LDH）R2：L-丙氨酸 、Tris緩沖液天冬氨酸氨基轉移酶試劑盒：R1: α-酮戊二酸、NADH、蘋果酸脫氫酶（MDH）、 乳酸脫氫酶（LDH）R2：L-天門冬氨酸 、Tris緩沖液,四、操作步驟,1.試劑準備：取 10ml的R2，溶解一瓶R1，充分溶解后即為工作液。2.儀器準備：水浴鍋調溫 37 ℃。紫外分光光度計，預熱，波長340nm。2.按表操作：

4、 3. 混勻，37℃水浴1min，于空白管校零，精確讀取1、2、3min吸光度，計算樣本每分鐘吸光度變化率△A/min。注：為減小誤差，可先把工作液37℃水浴5min，混勻直接上機檢測。,五、結果計算,ALT或AST（U/L）=△A/min× × =△A/min× ×,,1000 ε,,VtVs,,10

5、006.22,,VtVs,△A/min為兩次測定的平均值Vt=反應總體積 Vs=血清體積ε =6.22為NADH在340nm波長，比色皿光徑1cm時的摩爾吸光系數(shù)。,六、參考范圍,ALT（37℃）：男性≤40U/L 女性≤31U/L AST（37℃）：男性≤37U/L 女性≤31U/L,七、臨床意義1.肝細胞損傷的靈敏指標2.肝癌、肝硬化3.某些化學藥

6、物引起的肝臟損害4.其他疾病或因素（肌炎、胸膜炎、腎炎、肺炎）,八、注意事項,1.血清不易反復凍融，避免影響酶活性；2.避免標本溶血；3.試劑變渾濁或者空白吸光度小于0.900，試劑不能使用。,TBIL、DBIL測定,結合膽紅素 未結合膽紅素+加速劑（破壞氫鍵）,二、實驗原理,,,+重氮試劑,,偶氮膽紅素 呈紫紅色，測A546nm,重氮鹽法：（亞硝酸鈉、對氨基苯磺酸） 對氨基苯磺酸+HC

7、L+NaNO2→氯化重氮苯磺酸+NaCL,三、試劑與器材,,TBIL試劑R1主要成分：對氨基苯磺酸 鹽酸 十二烷基三甲基氯化銨DBIL試劑R1主要成分：EDTA 對氨基苯磺酸 鹽酸TBIL、DBIL試劑R2主要成分：亞硝酸鈉TBIL、DBIL校準品（2.0mL蒸餾水復溶后使

8、用）,,四操作步驟,TBIL測定：1.TBIL工作液配制：取R1和R2按5:1的比例混合待用；2.TBIL校準液配制：取2ml蒸餾水復溶待用；3.按表操作：4.混勻，37℃保溫10min，于546nm測定“A”。DBIL測定：1.DBIL工作液配制：取R1和R2按40:1的比例混合待用；2.DBIL校準液配制：取2ml蒸餾水復溶待用；3.按表操作：4.混勻，37℃保溫2min，于546nm

9、測定“A”。,五、結果計算,,C樣品=A樣品/A校準* C校準,六、參考范圍,TBIL：3.4-17.1umol/LDBIL：0-3.4umol/L,七、注意事項,1.血液標本和標準液應避免陽光直照2.溶血、脂血對測定有干擾；3.試劑具有一定的強酸性，注意個人防護。,八、臨床意義,1.血清總膽紅素測定的意義： （1）黃疸及黃疸程度的鑒別 （2）肝細胞損傷程度和預后的判斷 （3）新生兒溶血癥 （4）再生障礙性貧血及數(shù)種繼發(fā)性