艾滋病、梅毒和乙肝實驗室檢測

1、梅毒的實驗室檢測,甘肅省婦幼保健院臨床檢驗中心趙翠生,綜合產前檢查服務+ 檢測,孕產婦參加產前檢查服務,檢測前信息,HBV 檢測,梅毒檢測,HIV 檢測,全血細胞計數和其它檢測,取血樣,2,梅毒的實驗室檢測,3,梅毒篩查檢測,篩查檢測用于診斷產檢、臨產及分娩的孕產婦是否感染梅毒：梅毒血清學檢測篩查檢測應具有較高的靈敏度和特異度操作簡單、容易獲得、便宜盡可能在“當日”獲得結果,4,篩查檢測何時使用何種檢測？,5,梅毒血清

2、學試驗基本實驗室設備,6,血清學試驗檢測梅毒感染相關抗體 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗（檢測非特異性抗體） RPR（快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗） TRUST（甲苯胺紅不加熱血清試驗） VDRL（性病研究實驗室試驗）梅毒螺旋體抗原血清學試驗（檢測特異性梅毒螺旋體抗體） TPPA（梅毒螺旋體顆粒凝集試驗） ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗） POC（快速檢測、一站式檢測）,梅毒診斷檢測,7,梅毒早期診斷的依據之一是病原

3、學檢測，即在組織或分泌物中檢測到蒼白螺旋體： 暗視野顯微鏡 鍍銀染色鏡檢,梅毒診斷檢測,8,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗,梅毒螺旋體感染可產生非特異性抗體（非梅毒螺旋體抗體）非梅毒螺旋體抗體又稱之為反應素，是抗心磷脂等抗原的抗體隨菌體和宿主細胞的類脂質抗原量升高 除梅毒外，其他醫(yī)學情況會造成非梅毒螺旋體抗原血清學試驗假陽性結果，包括結核、瘧疾、妊娠和風濕關節(jié)炎、狼瘡及硬皮病等自體免疫學疾病,9,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗的

4、特點,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗： 快速、簡便、便宜 敏感性和特異性較高 硬下疳后1-2周變?yōu)殛栃?可用于 篩查樣本 評估對治療的反應 鑒別復燃還是再次感染,10,確保非梅毒螺旋體抗原血清學試驗質量的關鍵點,按照標準操作程序（SOPs）進行操作推薦使用評價特性較好的試劑*按照統(tǒng)一的標準報告結果開展實驗室質控（QC）和參加室間能力驗證（PT）,* 由中國疾病預防控制中心性病中心國家參比實驗室提供,11,非梅毒

5、螺旋體抗原血清學試驗,抗體滴度通常與疾病活動度有關。治療后（可能幾個月）非梅毒螺旋體抗原血清學試驗通常轉變?yōu)椴环磻绻猛环N實驗，相同試驗滴度4倍變化（如從1:16下降到1:4或從1:8上升到1:32）為臨床顯著變化有些病人，抗體滴度可始終處于較低水平，有時可持續(xù)終生（血清固定）注意：病人血清學監(jiān)測應在同一個實驗室使用同一種檢測方法（RPR、TRUST）進行連續(xù)多次檢測；RPR和TRUST方法均有效，但檢測的滴度結果不能直接進

6、行比較,12,治療后非梅毒螺旋體抗原血清學試驗抗體滴度變化的臨床意義,一期梅毒和二期梅毒： 成功治療，抗體滴度應3個月后下降2倍6個月后下降4倍 一期梅毒：1年后抗體滴度轉陰 二期梅毒：2年后抗體滴度轉陰晚期梅毒： 治療后抗體滴度緩慢下降 50%的病人2年后抗體滴度仍為陽性,13,梅毒螺旋體抗原血清學試驗,梅毒螺旋體抗原血清學試驗 檢測梅毒螺旋體抗原特異性抗體 可用于確認非梅毒螺旋體抗原血清學試驗的陽性

7、 結果，排除其假陽性 陽性結果可持續(xù)存在，即使治療后仍可為陽性。*,梅毒螺旋體抗原血清學試驗與疾病的活動度無關，不能用于鑒別現(xiàn)癥感染還是既往感染，也不能用于判斷療效,* 一期梅毒治療病人中，15%-25%可在2-3年后轉為血清學陰性,14,妊娠期梅毒檢測,所有孕產婦應進行梅毒篩查檢測： 孕期盡早（如果可能，在孕早期時）以及 如果在分娩前/臨產時沒有篩查檢測結果，在分娩時檢測 篩查檢測可應用以下任何一類方法：非梅毒

8、螺旋體抗原血清學試驗（滴度）或 梅毒螺旋體抗原血清學試驗 所有篩查檢測結果陽性的孕產婦都應用另外一類檢測方法進行復檢確認是否為現(xiàn)癥梅毒 所有產婦及所生嬰兒出院前，產婦梅毒檢測結果都應記錄在病歷中，以確保需要時給予治療,15,孕產婦梅毒檢測流程,陰性反應,陽性反應,陰性反應,陽性反應,16,HIV感染病人的梅毒血清學試驗,一些HIV感染病人，其梅毒血清學試驗結果不典型，包括滴度超常高或超常低滴度不斷變動如果臨床表現(xiàn)提示早期梅毒

9、，而血清學試驗結果與此不一致，考慮病灶活檢 或暗視野顯微鏡檢查,注意：對于大多數HIV感染病人而言，梅毒血清學試驗是診斷梅毒感染、隨訪觀察療效準確、可靠的檢測方法,17,梅毒血清學檢測結果的解釋,*包括結核、瘧疾、風濕性關節(jié)炎或妊娠。,18,暴露嬰兒的梅毒檢測,19,梅毒暴露嬰兒先天梅毒檢測,母體非梅毒螺旋體和梅毒螺旋體IgG抗體可通過胎盤，所以應謹慎地對嬰兒梅毒血清學試驗結果進行解釋 嬰兒需要接受預防性治療還是規(guī)范的抗梅毒治

10、療應根據：母親確診梅毒感染母親治療情況嬰兒梅毒感染的臨床表現(xiàn)、實驗室或放射線檢查結果母親及嬰兒非梅毒螺旋體抗原血清學試驗滴度水平的比較（盡可能在同一個實驗室使用相同的試驗方法）,20,先天梅毒的診斷,先天梅毒的診斷標準：梅毒暴露嬰兒具有以下條件之一： 任何先天梅毒臨床表現(xiàn)暗視野顯微鏡檢梅毒螺旋體陽性（+）梅毒螺旋體IgM抗體陽性*RPR/TRUST檢測陽性，滴度比母親分娩前最近一次 滴度高4倍及以上RPR/T

11、RUST監(jiān)測隨訪中，任何一次滴度不下降或反 而上升滿18月齡后，TPPA檢測陽性,* IgM抗體反映近期感染，可幫助鑒別嬰兒先天梅毒，但我國尚不能廣泛開展,21,梅毒暴露嬰兒的評估,梅毒暴露嬰兒：嬰兒RPR檢測 嬰兒RPR檢測不能使用臍帶血，因其易被母體 血液 污染，從而出現(xiàn)假陽性結果檢查先天梅毒臨床表現(xiàn)： 非免疫性水腫、黃疸、肝脾大、鼻炎、皮疹、 末端肢體假性麻痹對可疑病灶或體液進行暗視

12、野顯微鏡檢查,22,先天梅毒檢測流程,23,梅毒,早期梅毒診斷可根據在組織或分泌物樣本中通過顯微檢測到蒼白螺旋體而診斷應用梅毒血清學試驗進行梅毒篩查非梅毒螺旋體抗原血清學試驗檢測梅毒感染過程中產生的非特異抗體。滴度通常與疾病的活動度有關，因此可用于監(jiān)測對治療的反應梅毒螺旋體抗原血清學試驗檢測對抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體，可用于確認臨床診斷或非梅毒螺旋體抗原血清學試驗的陽性結果，可反映任何階段的梅毒暴露先天梅毒的診斷復雜，應根據

13、：母親梅毒感染狀態(tài)母親梅毒治療情況嬰兒梅毒感染的臨床表現(xiàn)、實驗室或X線檢查結果母親、嬰兒非梅毒螺旋體抗原血清學試驗滴度水平的比較隨訪,24,HIV和HBV的實驗室檢測,HIV和HBV篩查檢測,篩查檢測 用于診斷產檢、臨產及分娩的孕產婦是否感染 HIV和HBVHIV抗體檢測乙肝表面抗原（HBsAg）檢測 篩查檢測應具有較高的靈敏度和特異度操作簡單、容易獲得、便宜盡可能在“當日”獲得結果,26,何時使用何

14、種檢測？,27,HIV試驗和檢測,28,HIV檢測：抗體檢測,一個人感染了HIV病毒后，體內將產生特異性抗體 對抗HIV病毒* 。 HIV抗體通常在感染后4 – 6周出現(xiàn)，但也有時也會 在感染后3個月才出現(xiàn)。 從感染HIV病毒到出現(xiàn)特異的HIV抗體的一段時期 稱為“窗口期”。,標準的HIV診斷檢測是識別HIV抗體* *,注意： *與其他大多數疾病不同，HIV抗體沒有保護性作用。,29,HIV抗體檢

15、測類型,30,HIV檢測：病毒核酸檢測,這些檢測檢測HIV感染者血液或血漿中的病毒必須由經過專門培訓的實驗室人員操作實驗室需有資質，并配備專門設備昂貴，不是針對所有人進行的常規(guī)檢測方法PCR（多聚酶連反應法）檢測HIV DNA定性檢測血液中是否含有病毒，用于診斷 18月齡內嬰兒是否感染HIVHIV RNA定量檢測病毒載量，即血漿中的病毒數量， 用于監(jiān)測對抗病毒治療的反應。,31,HIV篩查檢測結果的含義,HI

16、V篩查檢測結果“陰性(-)”： 受檢者沒有感染HIV或者受檢者已經感染了HIV，但處于窗口期：3個月后 再次進行檢測HIV篩查檢測結果“陽性(+)”： 病人可能已經感染HIV, 但應再次重復檢測,32,HIV確認試驗結果的含義,如果篩查檢測結果陽性，兩次重復檢測中1次 或2次檢測結果為陽性，需要進行確認試驗 免疫印跡法（WB）確認試驗結果：陽性病人確認感染HIV陰性受檢者沒有感染H

17、IV不確定結果為“不確定”受檢者必須在4周后再次采血，重復前述所有步驟進行檢測,33,中國預防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播HIV檢測流程,在產前檢查服務中開展整合的檢測咨詢所采用的HIV檢測流程,34,產時HIV抗體檢測流程,中國預防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播HIV檢測流程,35,兒童HIV 檢測,36,HIV暴露嬰兒和兒童的HIV抗體檢測,不是所有HIV感染母親所生兒童都會感染HIV，但是如果對12-18個月以內的嬰兒進行HIV抗

18、體檢測，所有HIV感染母親所生嬰兒都將是HIV檢測結果陽性。 即使嬰兒并沒有感染HIV 由于母體自身抗體可通過胎盤進入胎兒體內,母體傳入的抗體可在嬰兒體內持續(xù)18個月，所以12-18月齡以內的嬰兒不能應用抗體檢測方法進行診斷。,37,嬰兒感染早期診斷（EID）HIV病毒檢測（DNA-PCR）,HIV病毒檢測（DNA-PCR） 檢測細胞內的HIV病毒， 能夠檢測低至1 – 10 拷貝前病毒DNA，以及 可在HIV

19、暴露嬰兒出生后6周內診斷HIV感染 用于HIV暴露嬰兒HIV感染早期診斷（EID）,38,應用DNA-PCR方法進行嬰兒感染早期診斷（EID）（1）,如果可以開展HIV DNA-PCR檢測，應用干血斑（DBS）在嬰兒6周齡時進行PCR檢測。如果PCR檢測結果陽性 盡快再次采血再次進行DNA-PCR檢測如果第二次PCR檢測結果陽性，嬰兒確定感染HIV如果PCR檢測結果陰性 嬰兒出生后3

20、個月再次進行PCR檢測,39,應用DNA-PCR方法進行嬰兒感染早期診斷（EID）（2）,出生后3個月再次進行HIV DNA-PCR檢測如果PCR檢測結果陽性 盡快再次采血再次進行DNA-PCR檢測如果第二次PCR檢測結果陽性，嬰兒確定感染HIV如果PCR檢測結果陰性 嬰兒視為未感染HIV考慮在嬰兒滿12月齡時進行HIV抗體檢測（如有必要，在18月齡時再次進行檢測）,檢測結果陰性的嬰兒接受母乳喂養(yǎng)，必須在停止母

21、乳喂養(yǎng)后6周再次進行PCR檢測，以確保嬰兒沒有在母乳喂養(yǎng)期間感染HIV。,40,嬰兒HIV感染早期診斷流程,41,HIV暴露嬰兒/兒童的HIV抗體檢測,所有HIV感染母親所生兒童，在出生后6周或3個月未接受早期感染檢測者，應進行HIV抗體檢測。檢測時間：滿12月齡 和滿18月齡（必要時，見HIV抗體檢測流程）出生后3個月（接受早期感染檢測者）檢測結果為陰性的兒童也應接受HIV抗體檢測,滿18月齡HIV抗體檢測陽性，可確認兒童

22、HIV感染。,42,HIV暴露兒童HIV抗體檢測流程,43,HIV感染的實驗室監(jiān)測,44,HIV感染的實驗室監(jiān)測,實驗室監(jiān)測主要用于：決定開始抗病毒治療還是預防性應用抗病毒藥物是否有抗病毒治療指征？ 效果監(jiān)測抗病毒治療有效嗎？毒性監(jiān)測抗病毒藥物是否引起了其他問題？,45,CD4+ T淋巴細胞是HIV病毒攻擊的靶細胞 CD4+ T淋巴細胞檢測用于： 決定開始抗病毒治療還是預防性應用抗病毒藥物 為判斷抗病毒治療成功或失敗

23、提供定量依據 對調整抗病毒治療方案提供指導 孕期每3個月及產后4 – 6周應進行CD4+ T淋巴細胞檢測 急性感染時可適當推遲檢測，(因為在急性感染期， CD4+ T淋巴 細胞通常會下降）,CD4+ T淋巴細胞檢測,46,病毒載量測量血漿中的病毒數量 病毒載量檢測可用于： 是抗病毒治療失敗早期、最可靠的標記物監(jiān)測對抗病毒治療的反應 診斷HIV感染后和

24、孕晚期各進行一次病毒載量檢測,病毒載量（RNA-PCR）檢測,47,HIV感染孕產婦常規(guī)實驗室監(jiān)測（1）,48,HIV感染孕產婦常規(guī)實驗室監(jiān)測（2）,49,HBV感染的檢測,50,妊娠期HBV感染篩查,所有孕產婦均應在孕期盡早接受HBsAg檢測篩查是否感染HBV 如果分娩前尚未有檢測結果，應在分娩前盡快進行檢測 如果HBsAg檢測陽性，有條件可考慮進行其他HBV標記物檢測。 注意，暴露嬰兒的處置不受母親其他HBV標記

25、物檢測結果的影響,51,乙肝標記物列表,52,HBV暴露嬰兒的實驗室檢測,HBsAg陽性母親所生嬰兒，出生時應接受乙肝疫苗接種，并在完成全部3劑乙肝疫苗接種后的 6個月接受HBsAg和抗HBs抗體檢測（即出生后12個月時）結果解釋： 如果HBsAg陽性并持續(xù)6個月，嬰兒慢性感染 如果抗Hbs抗體陽性（>1000萬IU/ml），嬰 兒有免疫保護 如果HBsAg陰性和抗HBs抗體< 1000萬IU/ml，

26、 嬰兒應再次接受3劑乙肝疫苗接種,53,要點-HIV,使用快速篩查試驗診斷HIV感染。篩查檢測結果陽性 進行確認試驗以保證結果的準確性。 HIV感染抗病毒治療應根據： CD4+ T淋巴細胞計數檢測結果，反映HIV對免疫系統(tǒng) 的影響 HIV病毒載量檢測結果，反映血液中HIV病毒的數量 如果有條件，應用 PCR方法檢測HIV-DNA診斷嬰兒 是否HIV感染 兒童滿12-