預(yù)防艾滋病梅毒乙肝母嬰傳播實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

1、1,預(yù)防艾滋病、梅毒、乙肝母嬰傳播實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),內(nèi)蒙古婦幼保健院檢驗(yàn)科楊治理2015年4月,2,目 錄第一部分 艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)第二部分 梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)第三部分 乙肝實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),3,,第一部分艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),4,艾滋病病原學(xué)及分型,艾滋病由艾滋病病毒引起目前已發(fā)現(xiàn)艾滋病病毒分HIV-1型和HIV-2型，后者主要流行于西非。我國(guó)目前流行的絕大多數(shù)毒株是HIV-1型中的M亞型，而HIV-1型中的

2、O亞型、N亞型和HIV-2型主要在非洲某些局部地區(qū)流行。HIV屬于RNA病毒，是一種變異性很強(qiáng)的病毒，不同的病毒株之間差異很大，甚至同一毒株在同一感染者體內(nèi)僅數(shù)月就可以改變，使原中和抗體失去中和效能，這給疫苗的研制造成很大困難。,5,發(fā)病機(jī)理,艾滋病侵入人體后首先與細(xì)胞表面含有CD4受體CD4+T淋巴細(xì)胞（原始T細(xì)胞）結(jié)合，進(jìn)入細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制，部分整合于細(xì)胞染色體DNA中成為潛伏型。感染初期由于機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫對(duì)艾滋病毒的抵抗作

3、用，艾滋病毒低水平復(fù)制 。潛伏的艾滋病毒被激活而大量復(fù)制，廣泛侵入人體CD4+T淋巴細(xì)胞，使CD4+T淋巴細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞等功能受損，最后導(dǎo)致整個(gè)免疫功能缺陷，最終發(fā)生一系列頑固性機(jī)會(huì)感染和腫瘤的發(fā)生。,6,自然病程,途徑 HIV感染至AIDS AIDS后存活 性傳播 6-10年（平均8年） 12月 靜脈吸毒

4、 6年左右 8.4月 血源傳播 4-10年（平均6.2年） 10-14月,,,,,,7,感染后的臨床類型,典型進(jìn)展：8-10年內(nèi)免疫力下降?？焖龠M(jìn)展：CD4+T細(xì)胞2-5年內(nèi)迅速下降，HIV病毒一直維持較高病毒栽量。長(zhǎng)期不進(jìn)展：保持較高細(xì)胞計(jì)數(shù)12-15年以上。,8,感染后的自然病史,9,傳播方式,性接觸傳播：主要傳播途徑，包括同性及異性之間的性接觸。肛交、口交有

5、著更大的傳染危險(xiǎn)。血液傳播 ：輸入污染了艾滋病病毒的血液或血液制品；與艾滋病病毒感染的吸毒者共用注射器。共用醫(yī)療器械消毒不徹底或不消毒以及生活用具（如牙刷、剃刀等）,10,傳播方式,母嬰傳播：通過胎盤通過分娩時(shí)產(chǎn)道 通過哺乳傳染。 * 不會(huì)經(jīng)淺吻、握手、擁抱、共餐、共用辦公用品、共用廁所、游泳池、共用電話、打噴嚏等而感染，甚至照料病毒感染者或艾滋病患者都沒有關(guān)系。,11,實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),一、HIV實(shí)驗(yàn)室診斷二、母親為

6、HIV陽(yáng)性所生嬰幼兒HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),12,,一、HIV實(shí)驗(yàn)室診斷,13,HIV感染特點(diǎn),所有的HIV感染者體內(nèi)都會(huì)產(chǎn)生針對(duì)HIV的抗體這種抗體是針對(duì)病毒的特定蛋白而生成的，對(duì)HIV而言是獨(dú)一無二的。感染者終生都會(huì)帶有這種抗體。,14,HIV檢測(cè)種類,HIV抗體、抗原檢測(cè)HIV病毒栽量檢測(cè)HIV CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)HIV耐藥性檢測(cè),15,我國(guó)HIV抗體檢測(cè)程序,篩查試驗(yàn)重復(fù)試驗(yàn)確認(rèn)試驗(yàn),16,抗體篩查試驗(yàn)的流程圖,重復(fù)

7、檢測(cè),陰性反應(yīng),,篩查試劑,原有試劑+另一種篩查試劑,陰性報(bào)告,送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn),,,,均陽(yáng)性反應(yīng),均陰性反應(yīng),,,,,,,,,,,,,,,,樣 本,篩查檢測(cè),,陽(yáng)性反應(yīng),17,初篩試驗(yàn)報(bào)告方式,篩查實(shí)驗(yàn)呈陰性反應(yīng)出具HIV抗體陰性報(bào)告 篩查實(shí)驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)，可出具“HIV抗體待復(fù) 查”報(bào)告，不能出陽(yáng)性報(bào)告。,18,HIV篩查檢測(cè)結(jié)果的解釋,HIV篩查檢測(cè)結(jié)果“陰性(-)”：受檢者沒有感染HIV受檢者已經(jīng)感染了HI

8、V，但處于窗口期：3個(gè)月后再次進(jìn)行檢測(cè)HIV篩查檢測(cè)結(jié)果“陽(yáng)性(+)”：病人可能已經(jīng)感染HIV但應(yīng)再次重復(fù)檢測(cè)，如兩次重復(fù)檢測(cè)中1次或2次檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn),19,,,在產(chǎn)前檢查服務(wù)中開展整合的檢測(cè)咨詢所采用的HIV檢測(cè)流程,20,產(chǎn)時(shí)HIV抗體檢測(cè)流程,,21,HIV抗體初篩檢測(cè)試驗(yàn),酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA 常用方法）金標(biāo)快速檢測(cè)實(shí)驗(yàn)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)明膠顆粒凝聚實(shí)驗(yàn)（PA）,22,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（EL

9、ISA ）,特點(diǎn)：準(zhǔn)確性高、價(jià)格低廉、判斷結(jié)果有客觀標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)果便于記錄和保存，適合于大批樣本檢測(cè)。手工操作時(shí)應(yīng)注意點(diǎn)：標(biāo)本采集試驗(yàn)準(zhǔn)備加樣溫育洗板顯色比色,23,抗體初篩檢測(cè)中出現(xiàn)的問題,假陽(yáng)性：血液惡化病變自身免疫性疾病多發(fā)性膽汁型肝硬化酒精性肝炎疫苗接種（流感、乙肝）多發(fā)性骨髓瘤腎移植或慢性腎衰竭瘧疾或絲蟲病其它（如孕婦）,24,抗體初篩檢測(cè)中出現(xiàn)的問題,假陰性：窗口期免疫移植換血輸血惡性腫

10、瘤免疫功能喪失（B細(xì)胞功能缺失）其他（試劑或操作原因）,25,檢測(cè)HIV的ELISA診斷試劑的進(jìn)展,26,HIV抗體確認(rèn)試驗(yàn),免疫熒光試驗(yàn)（IFA）放射免疫沉淀試驗(yàn)（RIPA）免疫印跡（WB）（常用方法）,27,確認(rèn)試驗(yàn)報(bào)告方式,陰性陽(yáng)性不確定,28,HIV確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果的解釋,免疫印跡法（WB）確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果：陽(yáng)性：病人確認(rèn)感染HIV陰性：受檢者沒有感染HIV不確定：受檢者必須在4周后再次采血進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。,29,HIV

11、抗體確認(rèn)試驗(yàn)流程圖,,免疫印跡法（HIV1/2混合型),,HIV-1陽(yáng)性反應(yīng),不確定反應(yīng),出現(xiàn)HIV-2指示條帶,陰性反應(yīng),陰性報(bào)告,HIV-1陽(yáng)性報(bào)告,免疫印跡法（HIV-2),陽(yáng)性反應(yīng),陰性反應(yīng),陰性報(bào)告,不確定反應(yīng),報(bào)告HIV-2血清陽(yáng)性，必要時(shí)測(cè)核酸,每3個(gè)月隨訪一次，共2次，仍屬可疑，則作陰性報(bào)告。 如隨訪出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，則報(bào)告陽(yáng)性。,,,,,,,,,,,,,,,,,30,HIV抗體檢測(cè)類型,

12、31,,二、母親為HIV陽(yáng)性所生嬰幼兒HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),32,感染特點(diǎn),母親HIV抗體經(jīng)胎盤進(jìn)入胎兒，出生時(shí)新生兒和嬰兒早期抗體陽(yáng)性，不一定是感染。出生時(shí)嬰兒體內(nèi)的母親HIV抗體，80-90%在生后9-12月消失，出生后18個(gè)月基本上全部消失。18個(gè)月后兒童體內(nèi)HIV仍然陽(yáng)性，視為自身感染產(chǎn)生的抗體。18個(gè)月以下HIV暴露嬰兒早期診斷推薦檢測(cè)HIV DNA，原因是HIV前病毒DNA，以細(xì)胞內(nèi)前病毒感染狀態(tài)存在，所以它不受母親圍產(chǎn)期

13、抗病毒治療和嬰幼兒預(yù)防性抗病毒治療的影響。,33,應(yīng)用DNA-PCR方法進(jìn)行嬰兒感染早期診斷（EID）（1）,采集干血斑（DBS）在嬰兒6周齡時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。如果PCR檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，盡快再次采血再次進(jìn)行DNA-PCR檢測(cè)，如果第二次PCR檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，嬰兒確定感染HIV如果PCR檢測(cè)結(jié)果陰性，嬰兒出生后3個(gè)月再次進(jìn)行PCR檢測(cè)。,34,應(yīng)用DNA-PCR方法進(jìn)行嬰兒感染早期診斷（EID）（2）,出生后3個(gè)月再次進(jìn)行HIV DNA-P

14、CR檢測(cè)如果PCR檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，盡快再次采血再次進(jìn)行DNA-PCR檢測(cè)，如果第二次PCR檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，嬰兒確定感染HIV。如果PCR檢測(cè)結(jié)果陰性，嬰兒視為未感染HIV，但在嬰兒滿12月齡時(shí)進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)（如有必要，在18月齡時(shí)再次進(jìn)行檢測(cè)）。 檢測(cè)結(jié)果陰性的嬰兒接受母乳喂養(yǎng)，必須在停止母乳喂養(yǎng)后6周再次進(jìn)行PCR檢測(cè)，以確保嬰兒沒有在母乳喂養(yǎng)期間感染HIV。,35,嬰兒HIV感染早期診斷流程,,36,HIV暴露嬰兒/兒童

15、的HIV抗體檢測(cè),所有HIV感染母親所生兒童，在出生后6周或3個(gè)月未接受EID檢測(cè)者，應(yīng)進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)間：滿12月齡 和滿18月齡（必要時(shí)，見HIV抗體檢測(cè)流程）出生后3個(gè)月EID檢測(cè)結(jié)果為陰性的兒童也應(yīng)接受HIV抗體檢測(cè) 滿18月齡HIV抗體檢測(cè)陽(yáng)性，可確認(rèn)兒童HIV感染。,37,HIV暴露兒童HIV抗體檢測(cè)流程,,38,收集、制備干血斑（DBS）,什么是干血斑（DBS）？干血斑是直接用濾紙收集一滴

16、全血進(jìn)行干燥用于血樣本的長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存DBS是用HIV DNA-PCR方法進(jìn)行嬰兒HIV感染早期診斷檢測(cè)的最佳采血方法HIV DNA和HIV抗體可穩(wěn)定地保存在干血斑中轉(zhuǎn)運(yùn)方便：無需冷藏,39,如何采集干血斑血樣本（1）,時(shí)刻遵循“普遍防護(hù)原則”采集足跟血選擇合適的采血部位，皮膚消毒（圖片中陰影部位）必要時(shí)保暖足跟使用一次性消毒采血針足跟置于心臟水平位或之下不要“擠”足跟,40,如何采集干血斑血樣本（2）,1. 用消毒紗布

17、擦掉第一滴血2. 收集此后滴出的大滴血液3. 快速、輕柔地用濾紙片的一面接觸血滴4. 讓血液滴到采血圈中 重復(fù)步驟1-4，直到整個(gè)采血圈全部充滿血液。在卡片上標(biāo)注患者的編號(hào)。每個(gè)兒童用一張新紙片。收集2-4個(gè)血斑。不要：用濾紙片按壓出血部位不要多次在同一個(gè)采血圈中涂抹血滴在濾紙片兩面均滴入血滴,41,如何采集干血斑血樣本（3）,采血圈充滿后：避免碰觸或涂抹血滴水平放置濾紙片，室溫下自然晾干（至少4小時(shí)）。避免

18、陽(yáng)光直射，不要加熱。不要將多張濾紙片疊放在一起，避免血滴接觸其他表面。一旦血樣本完全干燥：放入可封閉的塑料袋中加入干燥劑和濕度指示卡干燥、陰涼保存干血斑濾紙片包裝袋，直到轉(zhuǎn)送到相關(guān)實(shí)驗(yàn)室,42,采集樣本所需要的設(shè)備,血樣本采集卡 片(濾紙片)；可密封的塑料袋；濕度指示卡；干燥劑（1-2g/袋）；,43,怎樣采集抗凝靜脈血DBS,靜脈血充分與EDTA混合；足跟血采集到帶有EDTA 抗凝劑子彈頭內(nèi)；最好采集后立即制備

19、干血斑；血漿與血細(xì)胞分層的全血在 制備干血斑前，應(yīng)輕柔地上下 顛倒采血管（避免血細(xì)胞破裂）， 使血液混勻后制備；,44,,用移液槍加代濾芯槍頭 移取50-80ul血液；槍頭對(duì)準(zhǔn)印圈的中心緩 慢將血液滴于濾紙上；避免有氣泡；,45,在包裝前DBS充分干燥,,46,怎樣包裝DBS易于保存,最好一個(gè)樣本一個(gè)包裝，多個(gè)樣本一個(gè)包裝時(shí)，樣本間用稱量紙隔開；放入可密封塑料袋中；加干燥劑；加濕度指示卡；標(biāo)記包裝

20、中的內(nèi)容物并密封；,47,,,48,,,49,,,50,怎樣保存DBS,將干燥后的DBS冷藏干燥-20度保存；避免陽(yáng)光暴曬和加熱；,51,怎樣為運(yùn)輸樣本包裝,第一層包裝好的DBS 放入結(jié)實(shí)的紙袋中，放入相應(yīng)的文件（采樣單）， 將上述兩樣放入郵寄信封 中并密封，,52,,有效的樣本,血液充分吸收透過濾紙，填滿印圈，不要在一個(gè)圈上重復(fù)采血，避免觸摸或涂抹血斑。,53,,,54,,,55,,樣本在干燥小于4小時(shí)前即寄

21、出,1、吸附血液過多；2、雙面貼,56,干血斑送檢,1、填寫送樣表2、單位：北京海淀區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科 地址：北京海淀區(qū)蘇州街53號(hào) 聯(lián)系人：盧新（主任） 楊海珊、王孟濱 電話：010-62538899-9614 郵編：100080 郵箱：hdfyHiv@126.com,57,,三、HIV感染的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè),58,HIV感染的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè),

22、實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)主要用于：決定開始抗病毒治療還是預(yù)防性應(yīng)用抗病毒藥物；效果監(jiān)測(cè):抗病毒治療效果；毒性監(jiān)測(cè):抗病毒藥物引起的毒副作用。,59,孕產(chǎn)婦抗病毒治療的相關(guān)檢測(cè),用藥前，進(jìn)行CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、病毒載量檢測(cè)及其他相關(guān)檢測(cè)（包括血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能、血脂、血糖等）。 用藥過程中，每三個(gè)月進(jìn)行1次CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及其他相關(guān)檢測(cè)（同前）。 孕晚期，進(jìn)行1次病毒載量檢測(cè)，并在分娩前獲得檢測(cè)結(jié)果。,60,HIV感染孕

23、產(chǎn)婦常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),61,HIV感染孕產(chǎn)婦常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),62,,第二部分梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),63,梅毒病原學(xué),梅毒螺旋體呈細(xì)長(zhǎng)形似細(xì)密的彈簧大小為5-15×0.1-0.2um，一般染料不易著色。梅毒螺旋體有生活發(fā)育周期，平均約30小時(shí)增殖一代。發(fā)育周期與所致疾病周期、隱伏發(fā)作及慢性病程有關(guān)。,64,梅毒致病性,梅毒螺旋體只感染人類人是梅毒的唯一傳染源根據(jù)感染方式不同可分期：見圖。,65,,66,梅毒免疫性,梅毒

24、的免疫是以細(xì)胞免疫為主，體液免疫只有一定的輔助防御作用，意義不大。當(dāng)螺旋體從體內(nèi)清除后仍可再感染梅毒，而且仍可出現(xiàn)一期梅毒癥狀。 梅毒螺旋體侵入人體后，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生梅毒螺旋體特異性抗體以及抗磷脂的自身抗體（非特異性抗體）稱之為反應(yīng)素。,67,梅毒傳播途徑,性接觸傳播：是主要的傳染途徑。 未經(jīng)治療的患者在感染后1年內(nèi)最具有傳染性 ；隨著病期的延長(zhǎng)，傳染性越來越小 ；到感染后2年，通過性接觸一般無傳染性； 母嬰傳播： 梅毒螺旋體

25、可通過胎盤傳染給胎兒。未經(jīng)治療者，病期>2年雖性傳播危險(xiǎn)性較低，但妊娠時(shí)仍可傳染給胎兒。 血液傳播：輸血、吸毒、紋身、醫(yī)源性傳播等。,68,梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法,暗視野顯微鏡病原學(xué)檢測(cè) 鍍銀染色鏡檢 非特異性抗體：即抗心磷脂抗體等（反應(yīng)素） 血清學(xué)檢測(cè) 特異性梅毒螺旋體抗體：,,

26、,,,69,暗視野顯微鏡,,70,鍍銀染色鏡檢,,71,病原學(xué)檢測(cè)特點(diǎn),直接鏡檢找梅毒螺旋體，可確診梅毒。具有快速、方便易操作的特點(diǎn)。 早期診斷、及時(shí)治療預(yù)后和盡早切斷傳染源都具有十分重要的意義。 如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。,72,梅毒血清學(xué)檢測(cè),非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（檢測(cè)非特異性抗體）RPR（快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)）TRUST（甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)）VDRL（性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)）梅毒螺旋體

27、抗原血清學(xué)試驗(yàn)（檢測(cè)特異性梅毒螺旋體抗體）TPPA（梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)）:WHO公認(rèn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)） POC（快速檢測(cè)、一站式檢測(cè)）,73,梅毒血清學(xué)試驗(yàn)基本實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,74,非梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)（一）,梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主迅速對(duì)螺旋體表面脂質(zhì)作出免疫應(yīng)答，在3-4 周產(chǎn)生抗類脂質(zhì)抗原的抗體（反應(yīng)素），并且在不斷升高?？贵w主要是IgM和IgG。除梅毒外，其他醫(yī)學(xué)情況如結(jié)核、瘧疾、妊娠和風(fēng)濕關(guān)

28、節(jié)炎、狼瘡及硬皮病等自體免疫學(xué)疾病也可導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長(zhǎng)期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應(yīng)素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。,75,非梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)（二）,抗體滴度通常與疾病活動(dòng)度有關(guān)。治療后（可能幾個(gè)月）非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)通常轉(zhuǎn)變?yōu)椴环磻?yīng)；如果用同一種實(shí)驗(yàn)，相同試驗(yàn)滴度4倍變化（如從1:16下降到1:4或從1:8上升到1:32）為臨床顯著變化；有些病人，抗體滴度可始終處于較低水平，有時(shí)可持續(xù)終生（

29、血清固定）。注意：病人血清學(xué)監(jiān)測(cè)應(yīng)在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用同一種檢測(cè)方法（RPR、TRUST）進(jìn)行連續(xù)多次檢測(cè)；RPR和TRUST方法均有效，但檢測(cè)的滴度結(jié)果不能直接進(jìn)行比較。,76,非梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)特點(diǎn),快速、簡(jiǎn)便、便宜、敏感性和特異性較高；早期梅毒感染后1-2周內(nèi)可呈陰性；出現(xiàn)硬下疳后1-2周變?yōu)殛?yáng)性。二期梅毒時(shí)也可出現(xiàn)陰性反應(yīng)。前帶現(xiàn)象 ：血清中存在高濃度的抗體時(shí)出現(xiàn)的弱陽(yáng)性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又象二期梅毒，此

30、時(shí)將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)，出現(xiàn)了陽(yáng)性結(jié)果。可用于：篩查樣本；評(píng)估對(duì)治療的反應(yīng)；鑒別復(fù)發(fā)還是再次感染。,77,治療后非梅毒螺旋體抗體試驗(yàn) 抗體滴度變化的臨床意義,一期梅毒和二期梅毒：成功治療，抗體滴度應(yīng)3個(gè)月后下降2倍6個(gè)月后下降4倍一期梅毒：1年后抗體滴度轉(zhuǎn)陰二期梅毒：2年后抗體滴度轉(zhuǎn)陰晚期梅毒：治療后抗體滴度緩慢下降50%的病人2年后抗體滴度仍為陽(yáng)性,78,,RPR(加速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)) 基本原理

31、：在心磷脂、卵磷脂和膽固醇等組成的抗原中加入活性碳顆粒，與待檢血清中的反應(yīng)素結(jié)合，形成肉眼可見的黑色絮狀物TRUST（甲苯胺紅試驗(yàn))特點(diǎn)： 其原理和成分與RPR試驗(yàn)相同 用紅色的甲苯胺紅替代了碳顆粒 其余的特點(diǎn)均與RPR相同,79,,定性試驗(yàn) (1)加樣：吸取50微升血清（漿）放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個(gè)圈中。 (2)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號(hào)針頭加1滴抗原。

32、(3)反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘[(100±5)轉(zhuǎn)/分鐘]，立即在亮光下觀察結(jié)果,80,,凝集反應(yīng)強(qiáng)度分級(jí)：3+～4+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)中到大的黑色絮狀物，液體清亮。2+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小到大的黑色絮狀物，液體較清亮。1+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小的黑色絮狀物，液體渾濁?！簣A圈內(nèi)僅見黑色集中于中央一點(diǎn)或均勻分散。,81,操作步驟,孔 號(hào) 1 2 3 4 5 6 7

33、 8稀釋倍數(shù) 原倍 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 陽(yáng)性K 陰性K生理鹽水(ul) - 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 - -樣 品(ul) 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 棄50.0 - -陽(yáng)性血清(ul) - - - - - -

34、 50.0 -陰性血清(ul) - - - - - - - 50.0抗原懸液(ul) 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7,,,,,,82,,,83,,,84,確保非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)質(zhì)量的關(guān)鍵點(diǎn),按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOPs）進(jìn)行操作推薦使用評(píng)價(jià)特性較好的試劑

35、*按照統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告結(jié)果開展實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控（QC）和參加室間能力驗(yàn)證（PT）* 由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病中心國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室提供,85,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn),檢測(cè)梅毒螺旋體抗原特異性抗體可用于確認(rèn)非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)的陽(yáng)性結(jié)果，排除其假陽(yáng)性。陽(yáng)性結(jié)果可持續(xù)存在，即使治療后仍可為陽(yáng)性。* 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)與疾病的活動(dòng)度無關(guān)，不能用于鑒別現(xiàn)癥感染還是既往感染，也不能用于判斷療效。* 一期梅毒治療病人中，15%-2

36、5%可在2-3年后轉(zhuǎn)為血清學(xué)陰性,86,TPPA,基本原理：用超聲裂解梅毒螺旋體制備抗原，致敏明膠顆粒，其致敏粒子與待檢血清中的抗梅毒螺旋體特異性抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見的凝集。,87,操作步驟,1. 試劑準(zhǔn)備：試驗(yàn)前將試劑和待檢標(biāo)本恢復(fù)到室溫。   2. 加稀釋液：每份樣本做4孔，加標(biāo)本稀釋液加至微量反應(yīng)板孔內(nèi)，第1孔100微升，第2～4孔各25微升。3. 樣本稀釋：取血清25微升加至第1孔，混勻后取2

37、5微升至第2孔，混勻后取25微升至第3孔，混勻后取25微升至第4孔，混勻后棄去25微升。4. 加對(duì)照液：第3孔加未致敏顆粒25微升，第4孔加致敏顆粒25微升。5. 混合：將反應(yīng)板置振蕩器振蕩30秒。6.反應(yīng)：置有蓋濕盒，孵育2 h，或放4℃冰箱過夜觀察結(jié)果。,88,結(jié)果判斷,1.觀察加未致敏顆粒的第3孔，不出現(xiàn)凝集為有效試驗(yàn)。2. 觀察凝集反應(yīng)強(qiáng)度：分級(jí)如下。 4+： 顆粒光滑覆蓋整個(gè)孔底，有時(shí)邊緣有折疊。 

38、  3+： 顆粒光滑覆蓋大部分孔底。   2+： 顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán)。 1+： 顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán)。 ±： 顆粒沉集孔底，中央形成一小點(diǎn)。 一： 顆粒緊密沉積孔底中央。,89,,,90,RPR與TPPA的關(guān)系,RPR(初篩） TPPA(確證試驗(yàn)）關(guān)系RPR是為TPPA排除是既往感染還

39、是現(xiàn)癥感染；TPPA是為RPR排除是試驗(yàn)假陽(yáng)性還是現(xiàn)癥感染；兩者互為現(xiàn)癥梅毒的確認(rèn)試驗(yàn)。,,,91,妊娠期梅毒檢測(cè),所有孕產(chǎn)婦應(yīng)進(jìn)行梅毒篩查檢測(cè)：孕期盡早（如果可能，在孕早期時(shí)）以及 如果在分娩前/臨產(chǎn)時(shí)沒有篩查檢測(cè)結(jié)果，在分娩時(shí)檢測(cè)。所有篩查檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性的孕產(chǎn)婦都應(yīng)用另外一類檢測(cè)方法進(jìn)行復(fù)檢確認(rèn)是否為現(xiàn)癥梅毒所有產(chǎn)婦及所生嬰兒出院前，產(chǎn)婦梅毒檢測(cè)結(jié)果都應(yīng)記錄在病歷中，以確保需要時(shí)給予治療,92,孕產(chǎn)婦梅毒檢測(cè)流程,,93,

40、,,94,HIV感染病人的梅毒血清學(xué)試驗(yàn),一些HIV感染病人，其梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果不典型，包括：滴度超常高或超常低；滴度不斷變動(dòng)。如果臨床表現(xiàn)提示早期梅毒，而血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果與此不一致，考慮：病灶活檢 或暗視野顯微鏡檢查注意：對(duì)于大多數(shù)HIV感染病人而言，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)是診斷梅毒感染、隨訪觀察療效準(zhǔn)確、可靠的檢測(cè)方法,95,梅毒血清學(xué)試驗(yàn)報(bào)告方式,如果RPR陽(yáng)性，要做稀釋滴度。 報(bào)告：RPR為陽(yáng)性（如滴度1：32）

41、 如TPPA陽(yáng)性：報(bào)告TPPA陽(yáng)性如ELISA陰性: 報(bào)告ELISA陽(yáng)性,96,梅毒血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果的解釋,備注：* 包括結(jié)核、瘧疾、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或妊娠。 以上診斷標(biāo)準(zhǔn)不適宜診斷胎傳梅毒和神經(jīng)梅毒 檢驗(yàn)結(jié)果要結(jié)合病史、臨床癥狀，才能作出正確診斷,97,梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的特點(diǎn),臨床表現(xiàn) 取材部位 檢查方

42、法一期梅毒 潰瘍 淋巴結(jié) 病原學(xué)檢查　　 　　　　　　　　 血液 血清學(xué)檢查 二期梅毒 皮損 淋巴結(jié) 病原學(xué)檢查

43、 血液 血清學(xué)檢查 潛伏梅毒 血液 血清學(xué)檢查 三期梅毒 血液 血清學(xué)檢查 神經(jīng)梅毒 血液 血清學(xué)檢查

44、 腦脊液 細(xì)胞、蛋白量檢查、VDRL等,98,,二、暴露嬰兒的梅毒檢測(cè),99,梅毒暴露嬰兒先天梅毒檢測(cè),因母體非梅毒螺旋體和梅毒螺旋體IgG抗體可通過胎盤，所以應(yīng)謹(jǐn)慎地對(duì)嬰兒梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行解釋。嬰兒需要接受預(yù)防性治療還是規(guī)范的抗梅毒治療應(yīng)根據(jù)：母親確診梅毒感染母親治療情況嬰兒梅毒感染的臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查或x線檢查結(jié)果母親

45、及嬰兒非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)滴度水平的比較（盡可能在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用相同的試驗(yàn)方法）,100,先天梅毒的診斷標(biāo)準(zhǔn),梅毒暴露嬰兒具有以下條件之一： 任何先天梅毒臨床表現(xiàn)；暗視野顯微鏡檢梅毒螺旋體陽(yáng)性（+）；梅毒螺旋體IgM抗體陽(yáng)性；RPR/TRUST檢測(cè)陽(yáng)性，滴度比母親分娩前最近一次滴度高4倍及以上；RPR/TRUST監(jiān)測(cè)隨訪中，任何一次滴度不下降或反而上升；滿18月齡后，TPPA檢測(cè)陽(yáng)性。*嬰兒RPR檢測(cè)不能使用臍帶

46、血，因其易被母體血液污染，從而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。,101,,第三部分 乙肝實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),102,乙肝病原學(xué),乙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)是由一個(gè)不完全雙鏈DNA組成，約3200個(gè)氨基酸。乙型肝炎病毒基因結(jié)構(gòu)可分為四組可編碼蛋白基因。即： S基因：編碼外膜蛋白。 C基因：編碼核心抗原和e抗原。 P基因：編碼DNA聚合酶。 X基因：編碼X蛋白。,103,乙肝病原學(xué)

47、,S基因區(qū)可分為三段：前S1區(qū)、前S2區(qū)、和S區(qū)。乙型肝炎病毒為嗜肝DNA 病毒，感染對(duì)象為肝細(xì)胞。HBV的抵抗力較強(qiáng)，但65℃ 10小時(shí)、煮沸10分鐘或高壓蒸氣均可滅活。環(huán)氧乙烷、戊二醛、過氧乙酸和碘伏也有較好的滅活效果。 對(duì)干燥、紫外線均有耐受性。,104,乙肝傳播途徑,血液、體液（唾液、精液、陰 道分泌物、乳汁、淚液、尿液） 母嬰 輸血及血制品 性傳播 皮膚、粘膜 *HBV不經(jīng)呼吸道和消化道傳播 ，

48、流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)研究亦未發(fā)現(xiàn)HBV能經(jīng)吸血昆蟲（蚊、臭蟲等）傳播。,105,HBV的母嬰阻斷,對(duì)乙肝表面抗原陽(yáng)性孕產(chǎn)婦所生新生兒，在出生后24小時(shí)內(nèi)注射： 乙肝免疫球蛋白 + 乙肝疫苗阻斷率能達(dá)到85%以上。,106,乙肝實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法,電化學(xué)發(fā)光免疫分析法ECLIA法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法ELISA法金標(biāo)法放免法PCR等。

49、 * ECLIA法測(cè)定靈敏度為0．08ng／ml；ELISA法測(cè)HBsAg靈敏度為0．7ng／ml，金標(biāo)法靈敏度1ng／ml。,107,臨床上診斷乙肝的血清標(biāo)志物,臨床上診斷乙肝的血清標(biāo)志物：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、前S1或S2抗原及抗體、定量PCR技術(shù)檢測(cè)HBV DNA。,108,乙肝五項(xiàng)的臨床意義,HBsAg陽(yáng)性，目前感染，患者或病毒攜帶者。見于：急性乙肝、慢性乙肝、乙

50、肝病毒攜帶者、乙肝后肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌。HBsAb是保護(hù)性抗體。陽(yáng)性為曾經(jīng)感染或免疫，機(jī)體已產(chǎn)生免疫力。見于：感染HBV后的恢復(fù)期，在HBsAg消失后間隔一定時(shí)間HBsAb出現(xiàn)；隱性感染的健康人，小劑量多次接觸HBV，自身產(chǎn)生了免疫力。注射乙肝疫苗或乙肝免疫球蛋白后，產(chǎn)生免疫。,109,乙肝五項(xiàng)的臨床意義,HBeAg陽(yáng)性，HBV復(fù)制，傳染性強(qiáng)，轉(zhuǎn)為慢性肝炎者多。HBeAb陽(yáng)性，感染恢復(fù)期，傳染性低，病情趨于穩(wěn)定。HBcA

51、b為總抗體，一般在HBsAg出現(xiàn)3-5周后陽(yáng)轉(zhuǎn)。 HBcAb-IgG，感染過HBV，無論病毒是否清除，多為陽(yáng)性； HBcAb-IgM，HBV復(fù)制，乙型肝炎急性期，慢性乙型肝炎急性發(fā)作。,110,,“兩對(duì)半”結(jié)果的陽(yáng)性，反映的只是感染了HBV，與臨床病情輕重之間毫無因果關(guān)系?！皟蓪?duì)半”結(jié)果的實(shí)質(zhì)是機(jī)體感染HBV后免疫應(yīng)答結(jié)果的反映，與乙型肝炎的發(fā)生和發(fā)展過程之間并無必然的聯(lián)系。HBV DNA檢測(cè)（PCR方法）是乙肝病毒抗病毒治療唯

52、一有效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。HBV一旦感染機(jī)體，將終身攜帶該病毒，不可能出現(xiàn)所謂的“轉(zhuǎn)陰”。使用PCR沒有檢出來，只是說明血液中病毒的含量低于所用方法能檢出的量而已。,111,前S1或S2抗原臨床意義,乙肝病毒早期感染的指標(biāo)；慢性乙型肝炎急性發(fā)作的最佳指標(biāo)；可以彌補(bǔ)乙型肝炎表面抗原陰性的乙型肝炎感染造成的漏檢；優(yōu)于乙肝e抗原，并可彌補(bǔ)因乙肝病毒C區(qū)基因變異導(dǎo)致的e抗原陰性造成的漏檢 ；乙肝患者病情預(yù)后的可靠指標(biāo)；與兩對(duì)半聯(lián)合檢測(cè)，優(yōu)勢(shì)