艾滋病檢測實驗室的質量控制與評價

1、艾滋病檢測實驗室的質量控制與評價,孫偉東北京市疾病預防控制中心北京市艾滋病確證中心,北京市疾病預防控制中心,一、質量控制,質量控制是指為確保檢測工作正常進行而在每一次實驗過程中必須采取的各種措施。涉及每一次試驗中，保證實驗正常進行必須包括的各種措施。是對檢測過程的監(jiān)控，盡可能減少實驗過程中產生的各種誤差。具體內容是將質控品（內部對照和外部對照）和檢測標本一起實驗操作，從而了解分析過程的質量情況。質控的最終結果可以了解本次實

2、驗是否有效、試驗條件是否正常、試驗結果是否可靠。,北京市疾病預防控制中心,采集標本前病人的準備正確的標本采集方法準確及時的運送標本實驗前正確地處理和保存標本,實驗前質量控制,北京市疾病預防控制中心,實驗中質量控制,質控品的準備試劑盒的評價開展質控圖質控（或“即刻法”質控）,北京市疾病預防控制中心,實驗后質量控制,實驗后準確填寫檢驗結果及時發(fā)出報告正確地解釋檢驗結果的臨床意義,北京市疾病預防控制中心,質控品,內部對照質控血清

3、內部對照質控血清是指每個試劑盒內廠方提供的一套陰性和陽性對照外部對照質控血清外部對照質控血清是各實驗室為了監(jiān)控每次檢測的重復性和穩(wěn)定性以及檢驗試劑盒批間差異而設置的一套陰性和陽性對照血清。設立外部對照還可以提示標本處于弱陽性和臨界值狀態(tài)時的檢驗操作情況,北京市疾病預防控制中心,外部對照質控血清的組成,理想的外部對照應該包括強陽性對照、弱陽性對照、臨界值對照和陰性對照。在每次實驗時可只使用一個單一濃度水平的質控品即弱陽性對照。

4、這個弱陽性對照的值以設定在該試劑盒Cut-off值的2－3倍為宜。,北京市疾病預防控制中心,外部對照質控血清的來源,購買自備混合試劑盒內部對照血清。稀釋HIV抗體強陽性血清。,北京市疾病預防控制中心,每一次試驗必須使用外部對照質控血清建立質控圖，即檢驗性能數據與計算出的“控制線”進行比較的圖上面標有一中心橫線及其上、下各一或兩條平行的質控線，并有按時間順序填入的各質控血清測定的數值，以便監(jiān)控實驗操作的一致性和結果的準確性。同時

5、可以了解各批試劑盒之間的誤差（批間差異）。,外部對照的使用,北京市疾病預防控制中心,算術平均值（ ）：采用至少20次（天）所測得的外部對照質控血清S/CO值結果計算出平均值標準差（s）：是描述樣本與均數之間離散程度的一個指標，是與對照質控血清S/CO值均值有關的預期范圍。一組S/CO值的標準差以s 表示變異系數（cv）：是反映各次S/CO 值相對均值的離散程度的一個指標，可以用于衡量被檢標本檢測的重復性或精密度,建立質控圖的參數,

6、,,北京市疾病預防控制中心,計算公式,北京市疾病預防控制中心,以每個質控對照的OD值 /CUT OFF比值（S/CO）為縱座標（Y軸），每一次實驗為橫座標（X軸）建立質控圖。 ①采用至少20次（天）所測的外部對照質控血清S/CO 值結果計算出平均值（ ）； ②計算20次S/CO值的標準差（s）； ③計算出 ±1s， ± 2s ，± 3s范圍；④標出每次實驗外部對照值，每次實驗質控的結果依次

7、點入該質控圖框架圖中。,質控圖的建立,北京市疾病預防控制中心,質控圖制作實例,北京市疾病預防控制中心,質控圖制作實例,1、計算均值=1.742、計算標準差=0.253、按標準差計算范圍如下：1S=1.74+/-（1×0.25）=（1.49-1.99）2S=1.74+/-（2×0.25）=（1.24-2.24）3S=1.74+/-（3×0.25）=（0.99-2.49）,北京市疾病預防控制中

8、心,=1.74 ±1s =1.49-1.99 ±2s =1.24-2.24 ±3s =0.99-2.49,質控圖,北京市疾病預防控制中心,質控圖,北京市疾病預防控制中心,①外部對照S/CO值超出±2s，系統處于告警狀態(tài)，應予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察； ②失控：外部對照S/CO值超出±3s，系統處于失控狀態(tài)，本次實驗結果不能被接受，需查找原因，重新檢測；③位

9、移：如果幾個連續(xù)質控對照值（3-5次）都落在均值的一側稱之為位移，通常表示存在大的變化（失控）。引起位移的原因有使用新批號的試劑盒、使用新試劑、實驗員的更換、孵育溫度的改變、儀器故障等。④趨勢：當幾個連續(xù)質控對照值（5-7個）幾乎按一個方向分布時稱之為趨勢，通常由參數的緩慢改變引起，如試劑失效和移液器逐漸不準確等。發(fā)生位移和趨勢的最常見的原因是試劑（如酶標記物）或對照的失效。,質控圖的判定和分析,北京市疾病預防控制中心,北京市疾病預防

10、控制中心,①建立質控圖的目的是發(fā)現出現的問題，所以在每次實驗時應該觀察外部對照值是否在允許范圍之內；②為減少試劑盒更換造成的變化，最好長期穩(wěn)定地使用一種質量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒及改用新批號試劑盒應重新制作質控圖；③每月定期召開質控分析會，討論本月質控情況；④質控結果失控時，應填寫報告單交質量負責人，分析原因并決定是否發(fā)出檢測報告；⑤使用新批次的外部對照質控血清時，必須重新繪制質控圖。變異系數小于20%，表示處于穩(wěn)定狀

11、態(tài)。,質控圖分析要點,北京市疾病預防控制中心,過去認為OD值在CUT OFF值±10%~15%范圍內的樣本定為灰色帶反應。對這類標本最好復檢，或用其他方法再檢測，通過灰區(qū)的判斷有助于發(fā)現早期感染者目前的EIA試劑已有較高的靈敏度，EIA檢測應該只有兩種結果：陽性或陰性,灰區(qū)問題,北京市疾病預防控制中心,即刻法質控,在對同一批外部質控血清連續(xù)測定3次后，即可對第三次檢驗結果進行質控計算方法：1、將質控血清的測定值從小到大

12、排列：X1, X2 , X3 … Xn（X1為最小值， Xn 為最大值）；2、計算 和 s ；3、計算SI上限值和SI下限值,北京市疾病預防控制中心,4、將SI上限和SI下限與表中數字比較當SI上限和SI下限 n3s值時表示該值已在3s范圍之外， 屬“失控” 數值處于“告警” 和“失控”狀態(tài)應舍去，重新測定該質控血清和病人樣品。舍去的只是失控的數值，其它值仍可繼續(xù)使用,即刻法質控,北京市疾病預防控制中心,必須使用經衛(wèi)生部

13、批準或注冊，中國藥品生物制品檢定所批批檢定合格、有效期內且保存條件符合要求的國產或進口HIV1+2混合型抗體初篩試劑盒按照SOP中規(guī)定的要求進行操作，對影響檢驗的物理因素，如孵育時間、反應溫度、洗滌程序和次數等，均應按試劑盒說明書的要求操作，以保證質量控制實驗前必須檢查待檢標本的質量，如標本不符合要求必須重新采集標本。冰凍的標本應全部融化，搖勻后檢測每次檢驗，內部對照和外部對照的結果必須在允許的范圍內，否則應視為無效,質量控制的基

14、本要求,北京市疾病預防控制中心,二、質量評價,質量評價是一種手段，用于判定實驗室測定結果的質量。通常使用有關權威機構提供的一套質控品(質量控制參比血清)從外部來評價實驗室的工作，即對數個實驗室的檢測結果進行統計分析和評價。這種評價方式常稱為室間質量評價（EQA）。質量評價用于評價質量保證體系的效果，其目的在于幫助發(fā)現其質控與質保系統有無問題。各實驗室可根據上一級提供的質評檢驗報告的結果，檢查其質量控制狀況。,北京市疾病預防控制中心,必要

15、性,是監(jiān)督檢驗質量、得到質量保證的重要途徑之一是一種有系統、有組織的外部約束和橫向參比措施。不僅有助于提高各參評實驗室的檢測質量，增加實驗室間檢驗結果的可比性，還可通過試劑評價、方法比較和技術交流等方式，促進實驗方法的進步和檢驗試劑的優(yōu)化，這些工作都直接或間接地提高了檢驗質量,北京市疾病預防控制中心,也稱為能力驗證（PT），是指多家實驗室分析統一標本并由外部獨立機構收集、反饋實驗室上報結果并評價實驗室檢測能力的活動。主要用途：評

16、價實驗室的分析能力；監(jiān)控實驗室可能出現的技術問題；改正存在的問題；改進分析能力、實驗方法和其它實驗室的可比性；評價實驗室工作人員的能力；教育和訓練實驗室工作人員；作為實驗室質量保證的外部監(jiān)督工具。,室間質量評價,北京市疾病預防控制中心,PT報告中可以回答兩個重要問題,比較本實驗室與使用同一方法（試劑）的其他實驗室的結果差異與做同一試驗但使用不同方法（試劑）的實驗室結果進行比較通過比較可以提示實驗室室內質控難以發(fā)現的偏

17、差或系統誤差。,北京市疾病預防控制中心,PT失敗時應注意,核查原始記錄，確認沒有轉抄錯誤；確認當時測定時，室內質控可接受審核儀器維護和校準記錄查對標本處理記錄核對與PT標本同時測定的其它實驗記錄若有剩余PT標本，重復分析,北京市疾病預防控制中心,PT的不足,評價的可能不是實驗室的正常水平而是它的最好水平有時成績不好并不代表實驗室水平不行有時成績比實際檢測水平要好，靶值確定是一個十分重要的因素PT不可能確認分析前和分析后存

18、在的許多問題整個過程時間較長,北京市疾病預防控制中心,室間質評與室內質控的關系⑴,室內質控是對檢驗結果的即時性評價，通過對室內質控結果的連續(xù)觀察，監(jiān)測實驗室檢驗結果的精密性。室內質控是實驗室檢測質量保證的基礎，沒有完善的室內質控措施就談不上質量保證，即使在室間質評中取得很好的成績也不能說明實驗室檢驗結果的可靠性。因此，實驗室的質量保證工作，應首先從室內質控抓起，持之以恒，不斷的觀察、分析和解決實驗中的質量問題，才能使檢驗工作的質量得到

19、穩(wěn)步提高。,北京市疾病預防控制中心,,室間質評是對檢驗結果的回顧性評價，其主要目的是評價和修正實驗室檢驗結果的準確性，并與各參評單位結果比較，了解本室結果的偏倚程度，是發(fā)現實驗室系統誤差的重要手段之一。,室間質評與室內質控的關系⑵,北京市疾病預防控制中心,室間質評與室內質控的關系⑶,室間質評應在室內質控具有相當水平的基礎上進行，因為實驗室沒有穩(wěn)定可靠的室內質控措施，就不可能獲得良好的精密性，沒有良好的精密性是談不上準確性的。因此，實驗室

20、不能好高騖遠，舍本求末,只重視室間質評的成績，而不實實在在地抓好室內質控。當然，室內質控和室間質評都是質量保證的重要環(huán)節(jié)之一，兩者應互為補充，辯證統一，缺一不可。,北京市疾病預防控制中心,室間質量評價體系,1.國家艾滋病參比實驗室和一些省級艾滋病確 證中心接受國際相關機構的質量評價。2.國家艾滋病參比實驗室對全國各省、自治區(qū)和直轄市的艾滋病確證中心實驗室和其他艾滋病確證實驗室進行質量評價，并負責提供質量評價標本、標準以及有

21、關文件。3.艾滋病確證中心實驗室對所在省份內各級艾滋病篩查實驗室進行質量評價。,北京市疾病預防控制中心,室間質評方式,1.隨機派調查員到實驗室實地調查2.發(fā)放問卷調查表3.發(fā)放質控物4.以上方法相結合,北京市疾病預防控制中心,儀器設備的檢定、維護或校準,儀器設備的檢定：以下國家強檢儀器設備是否由計量認證部門進行了定期檢定？ 酶標儀 移液器 溫度計,北京市疾病預防控制中心,儀器設備的檢定、維護或校準,儀器設備的

22、維護或校準:以下儀器設備是否定期要求廠家、供應部門或自行維護和校準？ 洗板機 生物安全柜高壓蒸汽滅菌器,北京市疾病預防控制中心,是否有生物安全柜,是否有使用記錄？是否有高壓蒸汽滅菌器使用記錄？高壓蒸汽滅菌器使用人員是否經過培訓并取得上崗資質？是否配置了洗眼器？是否進行人員健康監(jiān)護？,實驗室生物安全,北京市疾病預防控制中心,是否有以下SOP文件,樣品的接收、登記和處理檢測方法和步驟儀器的使用維護和校準實驗的質控計