免疫學(xué)的臨床應(yīng)用

1、第十章 免疫學(xué)的臨床應(yīng)用,■免疫學(xué)診斷■免疫學(xué)防治,第一節(jié) 免疫學(xué)診斷,●抗原或抗體的檢測(cè),●免疫細(xì)胞及其功能檢測(cè),第一節(jié) 體外抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)及影響因素,一、抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn),1．高度特異性,由抗原表位與抗體分子中的超變區(qū)互補(bǔ)結(jié)合所決定的。,2．表面化學(xué)基團(tuán)之間的可逆結(jié)合,3．適宜的抗原抗體濃度和比例,抗原抗體結(jié)合后能否出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)取決于兩者適當(dāng)?shù)臐舛群捅壤?二、抗原抗體反應(yīng)的影響因素,1．電解質(zhì),抗原、抗體通常為

2、蛋白質(zhì)分子，等電點(diǎn)分別為pH3~5和5~6不等 。,實(shí)驗(yàn)中常用0.85%的NaCl溶液，以提供適當(dāng)濃度的電解質(zhì)。,2．溫度,適當(dāng)提高反應(yīng)的溫度可增加抗原與抗體分子的碰撞機(jī)會(huì)，加速抗原抗體復(fù)合物的形成。通常37℃是抗原抗體反應(yīng)的最適溫度。,3．酸堿度,抗原抗體反應(yīng)的最適pH在6~8之間，pH過(guò)高或過(guò)低，均可直接影響抗原、抗體的理化性質(zhì)。,第二十二章 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù),（四）常見(jiàn)抗原抗體反應(yīng)的種類,1.凝集反應(yīng),類型： ★直接凝集反應(yīng),★

3、間接凝集反應(yīng),★間接凝集抑制試驗(yàn),★協(xié)同凝集試驗(yàn),概念：細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集團(tuán)塊稱凝集反應(yīng)。,凝集反應(yīng)原理圖解（一）,凝集反應(yīng)原理圖解（二）,凝集反應(yīng)原理圖解（三）,,,2.沉淀反應(yīng),概念：可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物稱沉淀反應(yīng)。,類型：★單向免疫擴(kuò)散,★免疫比濁法,★雙向免疫擴(kuò)散,★對(duì)流免疫電泳,單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),對(duì)流免疫電泳,三、免疫標(biāo)記技術(shù)（immunolabeling te

4、chnique）,將抗原抗體反應(yīng)與標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合，以檢測(cè)抗原或抗體的一類試驗(yàn)方法。,常用的標(biāo)記物有酶、熒光素、放射性核素、膠體金及化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等。,1.免疫酶測(cè)定法（EIA）,這是一種用酶標(biāo)記一抗或二抗檢測(cè)特異性抗原或抗體的方法。,①雙抗體夾心法,②間接EILSA,血清檢測(cè)中：肝癌、骨肉瘤-----血清堿性磷酸酶（ALP）升高。 前列癌-------血清酸性磷酸酶升高。,,2.免疫熒光技

5、術(shù),是用熒光素標(biāo)記一抗或二抗，檢測(cè)特異性抗原或抗體的方法。,,,1,2,3.放射免疫測(cè)定法,是用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行的免疫測(cè)定。敏感性可達(dá)到pg/ml水平，常用的放射性核素有131I和125I等。,于1977年因創(chuàng)建放射免疫測(cè)定法而獲得醫(yī)學(xué)諾貝爾獎(jiǎng)。,最敏感,,,4.化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù),是將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。,5.免疫膠體金技術(shù),用膠體金顆粒標(biāo)記抗體或抗原，以檢測(cè)未知抗原或抗體的方法稱免疫膠

6、體金技術(shù)。,四、蛋白質(zhì)芯片技術(shù),是指固定于支持介質(zhì)上的大量蛋白質(zhì)構(gòu)成的微陣列。,6.免疫印跡技術(shù)又稱Western blotting,,蛋白定性定量應(yīng)用最廣泛,,第二節(jié) 免疫細(xì)胞功能的檢測(cè),一、免疫細(xì)胞的分離,1.外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離,2.淋巴細(xì)胞及其亞群的分離和分析,有：免疫吸附分離法 、磁珠分離法 、熒光激活細(xì)胞分離儀分離法、抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù),流式細(xì)胞術(shù)可用于分離混合的T、B細(xì)胞。用于細(xì)胞分離鑒定的最好方法。,,二、

7、免疫細(xì)胞功能的測(cè)定,1.T細(xì)胞功能測(cè)定,①T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)：T細(xì)胞受到特異性抗原或有絲分裂原（PHA、ConA）刺激后可發(fā)生增殖，可通過(guò)以下三種方法檢測(cè)。,形態(tài)計(jì)數(shù)法,3H-TdR或125Ｉ-UdR摻入法,,MTT比色法,②遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）的檢測(cè),此方法為體內(nèi)檢測(cè)細(xì)胞免疫功能的簡(jiǎn)便易行的皮試方法。,2. B細(xì)胞功能測(cè)定,抗體形成細(xì)胞測(cè)定：常用溶血空斑試驗(yàn)。,3.細(xì)胞毒試驗(yàn),培養(yǎng)4-6小時(shí),51Cr釋放法,乳酸脫氫酶釋放法,細(xì)胞

8、染色法,凋亡細(xì)胞檢測(cè)法,,第二十二章 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù),4.吞噬功能測(cè)定,①硝基藍(lán)四氮唑試驗(yàn),②巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn),5.細(xì)胞因子的檢測(cè),①生物活性檢測(cè)法,②免疫學(xué)檢測(cè)法,酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn),第二十二章 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù),用于功能性細(xì)胞的定量檢測(cè),,,第二節(jié)、免疫學(xué)防治,一、免疫預(yù)防,特異性免疫的獲得方式 ：1、自然免疫：自然主動(dòng)免疫（感染病原體后）自然被動(dòng)免疫（經(jīng)胎盤(pán)、乳汁獲得抗體）2、人工免疫：人為獲得人工主動(dòng)免疫（也稱預(yù)防接種

9、）人工被動(dòng)免疫過(guò)繼免疫,,人工主動(dòng)免疫制品人工被動(dòng)免疫制品,疫苗類毒素,抗毒素（動(dòng)物血清）人丙種球蛋白（人血漿和胎盤(pán)）細(xì)胞因子與單克隆抗體,,1.滅活疫苗（死疫苗）2.減毒活疫苗,,,,1、死疫苗（death vaccine）,用物理或化學(xué)方法將病原微生物殺死或滅活而制成如霍亂、百日咳、傷寒疫苗等優(yōu)點(diǎn)：安全，穩(wěn)定，易保存缺點(diǎn)：主要誘導(dǎo)體液免疫，不能通過(guò)內(nèi)源性抗原呈遞途徑誘導(dǎo)產(chǎn)生效應(yīng)性CTL。不能繁殖，需多次

10、刺激注射局部和全身反應(yīng)嚴(yán)重,,,2、減毒活疫苗（live-attenuated Vaccine） 用毒力高度減弱或基本無(wú)毒的病原微生物制成優(yōu)點(diǎn)：一次免疫即可獲得長(zhǎng)久免疫力，類似隱性感染。誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫缺點(diǎn)：不易保存，存在回復(fù)突變的危險(xiǎn) 如卡介苗 牛痘 麻疹等,死疫苗與活疫苗的特點(diǎn)比較,區(qū)別要點(diǎn) 死疫苗 活疫苗制劑特點(diǎn)

11、 強(qiáng)毒株制成 弱毒或無(wú)毒株制成接種方式 多為皮下注射 多模擬自然感染途徑接種劑量次數(shù) 量較大，2~3次 量較小，多為1次副作用 較大 較小免疫效果 較差，維持 較好，維持3~5年 數(shù)月~數(shù)年 或

12、更長(zhǎng)疫苗保存 較易保存 不易保存,,,,,3.亞單位疫苗（Subunit Vaccine）提取有效免疫原成分,去除無(wú)關(guān)或有害成分如提取乙肝表面抗原--乙肝亞單位疫苗優(yōu)點(diǎn)：免疫效果高，不良反應(yīng)少,,4.基因工程疫苗,原理：編碼免疫原基因→載體→酵母菌、大腸桿菌體內(nèi) ↓ 體外培養(yǎng)，表達(dá)目的基因產(chǎn)物,（2）類

13、毒素（Toxid）,細(xì)菌外毒素經(jīng)0.3-0.4%甲醛處理，使其毒性減弱而保留其免疫原性。白百破：白喉類毒素+百日咳桿菌死疫苗+破傷風(fēng)類毒素,,二、人工被動(dòng)免疫,(一)概念：是人為的給機(jī)體輸入抗毒素、免疫血清等免疫效應(yīng) 物質(zhì)，使機(jī)體立即獲得特異性免疫力的方法。,(二)特點(diǎn)：免疫力出現(xiàn)快、維持時(shí)間短，可用于傳染病的特異性治療和緊急預(yù)防。,(三)常用人工被動(dòng)免疫制劑,■抗毒素 用細(xì)菌類毒素多次給馬注射，待其產(chǎn)生大量抗體后，放血并分離馬

14、血清經(jīng)提純后制成的制劑。,■胎盤(pán)球蛋白 從胎盤(pán)血中提取的免疫球蛋白（IgG）。,■血漿丙種球蛋白 從正常人血中提取的免疫球蛋白（IgG、IgM）。,是指給患者轉(zhuǎn)輸具有在體內(nèi)繼續(xù)擴(kuò)增效應(yīng)細(xì)胞的一種療法。,四、過(guò)繼免疫治療,（四）計(jì)劃免疫,1.概念 根據(jù)特定傳染病的疫情監(jiān)測(cè)和人群免疫狀況分析，按照規(guī)定的免疫程序有計(jì)劃地進(jìn)行人群預(yù)防接種，以提高人群免疫水平，控制或消滅相應(yīng)傳染病。,2.我國(guó)兒童計(jì)劃免疫程序（表

15、）,第三節(jié) 免疫治療,免疫治療是指利用免疫學(xué)原理，針對(duì)疾病的發(fā)生機(jī)制，人為地調(diào)整機(jī)體的免疫功能，達(dá)到治療目的所采取的措施。,,第二十三章 免疫學(xué)防治,一、分子治療,分子治療指給機(jī)體輸入分子制劑，以調(diào)節(jié)機(jī)體的特異性免疫應(yīng)答，例如使用抗體、細(xì)胞因子以及微生物制劑等。,1.分子疫苗,2.抗體,3.細(xì)胞因子,4.微生物抗原疫苗,二、細(xì)胞治療,細(xì)胞治療指給機(jī)體輸入細(xì)胞制劑，以激活或增強(qiáng)機(jī)體的特異性免疫應(yīng)答，例如使用細(xì)胞疫苗、干細(xì)胞移植、過(guò)繼免疫

16、治療等。,1.細(xì)胞疫苗,腫瘤細(xì)胞疫苗 、基因修飾的瘤苗 、樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗 。,2.過(guò)繼免疫治療,取自體淋巴細(xì)胞經(jīng)體外激活、增殖后回輸患者，直接殺傷腫瘤或激發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫效應(yīng)。如TIL。,3.造血干細(xì)胞移植,干細(xì)胞是具有多種分化潛能，自我更新能力很強(qiáng)的細(xì)胞，在適當(dāng)條件下可被誘導(dǎo)分化為多種細(xì)胞組織。,骨髓 、外周血、臍血,第二十三章 免疫學(xué)防治,三、生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑與免疫抑制劑,1.生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑,,,2.免疫抑制劑,免疫功能低下者有促進(jìn)或