抗生素知識培訓(xùn)

1、抗生素檢驗(yàn)知識培訓(xùn)資料,,提綱,一、抗生素定義及分類 二、微生物試驗(yàn)相關(guān)知識 三、抗生素微生物檢定法,第一部分：抗生素定義與分類,抗生素：抗生素（antibiotics）是由微生物（包括細(xì)菌、真菌、放線菌屬）或高等動植物在生活過程中所產(chǎn)生的具有抗病原體或其它活性的一類次級代謝產(chǎn)物。（事實(shí)上它不僅能殺滅細(xì)菌，而且對霉菌、支原體、衣原體其它致病微生物和癌細(xì)胞等也有良好的抑制和殺滅作

2、用）初級代謝：指生物從外界吸收各種營養(yǎng)物質(zhì)，通過分解代謝和合成代謝，生成維持生命活動所必需的物質(zhì)和能量的過程，稱為初級代謝。次級代謝：某些生物為了避免在初級代謝過程某種中間產(chǎn)物積累所造成的不利作用而產(chǎn)生的一類有利于生存的代謝類型。,第一部分：抗生素定義與分類,著抗生素研究工作的發(fā)展，抗生素可以是某些微生物生長繁殖過程中產(chǎn)生的一種物質(zhì)，用于治病的抗生素除由此直接提取外；還有完全用人工合成或部分人工合成的?，F(xiàn)在通常把經(jīng)過化學(xué)改造的天然來

3、源抗生或微生物代謝的其他產(chǎn)物，以低微濃度能夠抑制或影響它種生物機(jī)能的化學(xué)物質(zhì)通稱為抗生素。因此現(xiàn)代抗生素的定義應(yīng)當(dāng)為：由某些微生物產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)，能抑制微生物和其他細(xì)胞增殖的物質(zhì)叫做抗生素。,抗生素的分類,抗微生物藥：一、 β-內(nèi)酰胺類： （一）青霉素類 包括青霉素鈉、青霉素鉀、氨芐西林、氨芐西林鈉、海他西林、阿莫西林、阿莫西林鈉、苯唑西林鈉、氯唑西林鈉、芐星氯唑西林、普魯卡因青霉素、芐星青霉素等 （二）頭

4、孢菌素類 包括 頭孢噻呋、鹽酸頭孢噻呋、頭孢噻呋鈉、頭孢氨芐、頭孢維星鈉、硫酸頭孢喹肟等。,二、氨基糖苷類： 包括：硫酸鏈霉素、硫酸雙氫鏈霉素、硫酸卡那霉素、硫酸慶大霉素、硫酸新霉素、鹽酸大觀霉素、硫酸大觀霉素、硫酸慶大小諾霉素、硫酸安普霉素等。,三、四環(huán)素類： 包括土霉素、鹽酸土霉素、四環(huán)素、鹽酸四環(huán)素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環(huán)素等。,四、大環(huán)內(nèi)酯類： 包括紅霉素、乳糖酸紅霉素、硫氰酸紅霉素、

5、吉他霉素、酒石酸吉他霉素、泰樂菌素、酒石酸泰樂菌素、磷酸泰樂菌素、酒石酸泰萬菌素、替米考星、泰拉霉素等。,五、酰胺醇類 包括 甲砜霉素、氟苯尼考等。,六、林可胺類 主要有鹽酸林可霉素、鹽酸吡利霉素等。,七、多肽類 包括硫酸黏菌素、桿菌肽鋅、亞甲基水楊酸桿菌肽、恩拉霉素、維吉尼霉素、那西肽等。,八、多糖類 包括阿維拉霉素、黃霉素等。,九、其他： 包括延胡索酸泰妙菌素、泰妙菌素、

6、鹽酸沃尼妙林、賽地卡霉素等,抗寄生蟲藥：一、抗蠕蟲藥（抗線蟲藥） 包括 伊維菌素、阿維菌素、乙酰氨基阿維菌素、多拉菌素、越霉素A、潮霉素B等。二、抗原蟲藥（抗球蟲藥） 包括 莫能菌素、莫能菌素鈉、鹽霉素鈉、拉沙洛西鈉、甲基鹽霉素、馬杜米星銨、海南霉素鈉、賽杜霉素鈉等。,第二部分：微生物試驗(yàn)相關(guān)知識,一、名稱解釋1.消毒（disinfection）：殺死物體上或者環(huán)境中病原微生物并不一定殺死細(xì)菌芽胞或非病原微生物的方法

7、。2.滅菌（sterilization）：殺死物體上所有微生物的方法（病原微生物，非病原微生物）。,3.抑菌（bacteriostasis）：抑制人體內(nèi)部或外部細(xì)菌生長繁殖的。4.防腐（antisepsis）：體外防止或抑制細(xì)菌繁殖的方法。5.無菌（asepsis）：不存在任何活菌。,6.無菌操作：防止細(xì)菌進(jìn)入人體或其他物品的操作技術(shù)。7.清潔：能減少微生物附著在無機(jī)物體表面的數(shù)量的方法。8.凈化：能顯著減少或破壞一定空間中微

8、生物數(shù)量和生物活性的方法。,二、消毒滅菌方法： 1.物理消毒滅菌法 2.化學(xué)消毒滅菌法 3.生物學(xué)消毒滅菌法,1.物理消毒滅菌法 1）熱力滅菌法 ①干熱滅菌法 ②濕熱滅菌法 焚燒 巴氏消毒法 燒灼 煮沸法 干烤 高壓蒸氣滅菌法 紅外線,濕熱滅菌效

9、果好于干熱滅菌，原因如下： ①濕熱情況下菌體蛋白容易凝固; ②濕熱穿透力比干熱大； ③濕熱的蒸汽具有潛熱。,2）紫外線原理：作用于DNA，使一條DNA鏈上相鄰的兩個T共價結(jié)合形成二聚體，干擾DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細(xì)菌的變異和死亡。特點(diǎn)：①穿透力比較差。普通玻璃、紙張、塵埃等均可阻擋紫外線，因此它只適用于空氣消毒或物體表面的消毒。②紫外線可損傷皮膚、眼睛，使用時應(yīng)注意防護(hù)。,3）濾過除菌法4）

10、超聲波殺菌法5）干燥與低溫抑菌法,2.化學(xué)消毒滅菌法 化學(xué)消毒劑：迅速殺滅病原微生物的化學(xué)藥物。如：二氧化氯、戊二醛等。防腐劑：抑制病原微生物生長繁殖的化學(xué)藥物。如：苯甲酸鈉、山梨酸鉀、脫氫乙酸鈉等 ?；瘜W(xué)治療劑：用于治療傳染病的化學(xué)藥物，可選擇性地作用于細(xì)菌代謝不同環(huán)節(jié)，殺滅或抑制病原菌，對宿主無毒或很低，如異煙肼、無環(huán)鳥苷等。,3.生物學(xué)消毒滅菌法1）抗生素 臨床治療2）細(xì)菌素 為微生物代謝產(chǎn)物，破壞同源性細(xì)菌。

11、3）噬菌體 感染細(xì)菌、真菌、放線菌、螺旋體等微 生物的病毒。4）中草藥,三、影響消毒滅菌效果的因素 1.消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時間 2.微生物的種類與數(shù)量 3.溫度 4.酸堿度 5.有機(jī)物 有機(jī)物可消耗消毒劑， 降低消毒劑濃度,第三部分：抗生素微生物檢定法,一、概述： 抗生素微生物檢定法是利用抗生素在低微濃度下有選擇

12、地抑制或殺死微生物的特點(diǎn)，以抗生素的抗菌活性為指標(biāo)，來衡量抗生素中的有效成分效力的方法。該方法是與臨床要求相符，更能確定抗生素的臨床醫(yī)療價值。,抗生素微生物檢定法分為稀釋法、濁度法和瓊脂擴(kuò)散法（管碟法），每種方法的試驗(yàn)操作差別較大，但相同之處都是將標(biāo)準(zhǔn)和供試品兩者的抗菌效力比較。 稀釋法：通過觀察不同濃度的抗生素抑制試驗(yàn)菌的生長情況，從而測定抗生素最低抑菌濃度。常用于新藥研制及臨床藥敏試驗(yàn)。,濁度法： 采用分光光度法測

13、定不同濃度的抗生素抑制試驗(yàn)菌的生長情況（混濁程度），從而測定抗生素抑菌效力的方法。該方法國外使用較為普遍，而且快速（3-4小時），《中國獸藥典》（2010年版）收載了方法，如慶大霉素、鏈霉素、紅霉素、大觀霉素、安普霉素、泰樂菌素。,瓊脂擴(kuò)散法(管碟法）： 是使用固體培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基凝固前，將試驗(yàn)菌混進(jìn)去，采用一定的方法，將含有抗生素的物質(zhì)與含菌的培養(yǎng)基表面接觸。目前，國際上采用將抗生素加入到特定的小鋼管中，使小鋼管

14、中的抗生素與培養(yǎng)基表面接觸，此方法稱為“管碟法”。經(jīng)過培養(yǎng)后，由于抗生素不斷向培養(yǎng)基中擴(kuò)散，凡抑菌濃度能到達(dá)之處，試驗(yàn)菌不能生長，從而形成透明的抑菌范圍，此范圍一般都呈圓形，稱為“抑菌圈”。,二、管碟法材料、儀器及試劑的準(zhǔn)備及基本要求 1、操作間：要求凈化級別達(dá)到萬級，安裝紫外線殺菌燈，安裝空調(diào)設(shè)備，能控制室溫在20-25度之間。,2、雙碟 為硬質(zhì)玻璃或塑料培養(yǎng)平皿，內(nèi)徑約90mm，高16-17

15、mm，碟底厚度均勻一致。使用前應(yīng)清洗干凈后置150℃-160 ℃干熱滅菌2小時或者121 ℃高壓蒸汽滅菌30分鐘。,3、陶瓦蓋 內(nèi)徑約103mm，外徑108mm，平坦，吸水性強(qiáng)，應(yīng)定期清洗、干燥。,4、鋼管（牛津杯） 每次使用后應(yīng)置1：1000新潔爾滅溶液內(nèi)浸泡2個小時以上，進(jìn)行滅菌后再進(jìn)行洗滌，在150℃-160 ℃干熱滅菌2小時備用。 使用同一批次的鋼管。鋼管內(nèi)外壁要求清潔光滑，兩端面應(yīng)平坦光潔，管壁應(yīng)厚薄一

16、致，重量差異不超過0.05g,,5、鋼管放置器： 有全自動和半自動之分，一般為四孔，要求鋼管下落時應(yīng)垂直平穩(wěn)、位置正確。應(yīng)定期用75%酒精擦拭。 如果沒有鋼管放置器，也可用干熱滅菌過的鑷子放置鋼管。,,,,6、恒溫培養(yǎng)箱： 有隔水式、電熱式。要求溫度控制在35 ℃ -37 ℃，隔板要求水平，用于細(xì)菌培養(yǎng)。,,,7、抑菌圈測定儀：用于測定細(xì)菌所致抑菌圈直徑，也可以用游標(biāo)卡尺進(jìn)行測量直徑。,,,,8、超凈工作臺：

17、 用于菌種的接種、傳代和菌懸液的制備。超凈臺應(yīng)放在潔凈工作間或半無菌室內(nèi)。,,9、磷酸鹽緩沖液： 根據(jù)獸藥典附錄或者品種項(xiàng)下要求的配方進(jìn)行配制、分裝、滅菌后備用。常用的緩沖液pH值有6.0、7.0、7.8等。 緩沖液的pH值對樣品液的穩(wěn)定性、細(xì)菌生長速度和抑菌圈邊緣清晰等有影響。,10、培養(yǎng)基： 盡量購置質(zhì)量穩(wěn)定的干粉培養(yǎng)基（如中國獸藥藥品監(jiān)察所、中國藥品生物制品監(jiān)察所等生產(chǎn)的培養(yǎng)基）。

18、 常用的培養(yǎng)基有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ號等培養(yǎng)基，用前應(yīng)按使用說明書進(jìn)行配制，注意調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值。,11、菌種： 菌種應(yīng)由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所和中國藥品生物制品檢定所等國家法定的菌種保藏中心提供。 常用的菌種包括： 枯草芽孢桿菌（CMCC63501)、 短小芽孢桿菌（CMCC63202）、 藤黃微球菌（CMCC28001)、 金黃色葡萄球菌（CMCC26

19、003）等。,12、標(biāo)準(zhǔn)品 標(biāo)準(zhǔn)品是指用于生物檢定、抗生素或生化藥品中含量或者效價測定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，一般以效價單位標(biāo)示，標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)由國家法定的單位制備、標(biāo)定和供應(yīng)，一般常用的標(biāo)準(zhǔn)品來源于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所和中國藥品生物制品檢定所。,三、管碟法操作步驟 1、稱量：標(biāo)準(zhǔn)品從冰箱內(nèi)取出后，應(yīng)放置至室溫后稱取。標(biāo)準(zhǔn)品的稱取量往往少于100mg，需選用十萬分之一的分析天平精密稱量，稱取量應(yīng)大于10mg，并且為了減少實(shí)驗(yàn)誤差，應(yīng)使用小

20、燒杯或特制的稱量壺作為稱量容器。,供試品稱取量若少于100 mg，稱取方法同標(biāo)準(zhǔn)品；供試品取量若多于100 mg，可直接使用稱量紙?jiān)谌f分之一的分析天平上精密稱量。稱量過程中，不能裸手接觸稱量紙或稱量容器。 液體制劑量取供試品體積的方法，粘稠的液體不便量取時，可采取稱重，然后測定相對密度，折算稱體積。,2.稀釋 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和供試品所用的緩沖液應(yīng)用同一瓶內(nèi)或同一次制備和緩沖液幾瓶混勻后使用。為避

21、免抗生素被玻璃吸附，在量取溶液時，要用被量取的溶液流洗3次。,3.制備底層 用滅菌的吸管吸取已融化的培養(yǎng)20ml注入培養(yǎng)皿中，稍后蓋上陶瓦蓋吸收水蒸汽，以免培養(yǎng)基溫度過高，加蓋陶瓦蓋后冷凝水影響菌層的表面平整性（由于冷凝水的局部冷卻和稀釋作用，可使菌層培養(yǎng)基凝固后表面不平）。,4.制備菌層 取出試驗(yàn)菌懸液，吸取已試驗(yàn)妥的菌量加入已融化并保溫在水浴中（一般細(xì)菌48℃，芽孢60 ℃）

22、，搖勻作為菌層培養(yǎng)基。然后吸取菌層培養(yǎng)基5ml，使其均勻攤在底層培養(yǎng)基上，置水平臺上，用陶瓦蓋覆蓋，放置20-30分鐘，備用。,5. 滴加抗生素溶液至小鋼管 采用膠頭滴管或者定量加液器向鋼管中加溶液。 由于滴加先后順序及時間的不同，抗生素在培養(yǎng)基內(nèi)擴(kuò)散有差異。在滴加抗生素溶液時采用S2→T2→S1→T1（標(biāo)準(zhǔn)品高濃度、樣品高濃度、標(biāo)準(zhǔn)品低濃度、樣品低濃度）的順序滴加，以減少試驗(yàn)誤差。,6.培養(yǎng)

23、 加液完畢后，用陶瓦蓋覆蓋，平穩(wěn)地移入培養(yǎng)箱中，至35-37 ℃培養(yǎng)至所需的時間。 雙碟在培養(yǎng)時，不易使雙碟靠近培養(yǎng)箱熱源較近處，以免造成培養(yǎng)溫度不均勻，使同一雙碟上細(xì)菌生長速度不一致，造成抑菌圈變小或抑菌圈不圓。,7、抑菌圈測量 從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)皿，將鋼管倒入盛有1：1000新潔爾滅或其他消毒液內(nèi)，蓋上玻璃蓋。用抑菌圈測量儀或者游標(biāo)卡尺測量，然后按生物統(tǒng)計(jì)法測定其效價。,相關(guān)知識,一、抗生

24、素含量表示方法 1、重量單位：以抗生素中所含特定的抗菌活性部分的重量作為效價單位，一般以1mg相當(dāng)于1000單位計(jì)算，但由于抗生素多以鹽的成分存在。紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品的理論效價為1000單位/mg，但實(shí)際生產(chǎn)中紅霉素（p97）效價不低于920紅霉素單位/mg 、硫氰酸紅霉素（p288）效價不低于750紅霉素單位/mg。,2、特定單位 如粘菌素理論值為每1mg相當(dāng)于30000粘菌素單位（2003版p191）。

25、桿菌肽鋅原料效價要求每1mg不少于40桿菌肽單位。,3、半合成青霉素類： 如氨芐西林、阿莫西林等都是以百分含量計(jì)算。 以阿莫西林（p115）為例，原料要求以無水物計(jì)算，含C16H19N3O5S不得少于95.0%.,4、重量折算單位: 以青霉素鈉（P121)為例，原料要求，以無水物計(jì)算，含C16H17N2NaON4S不少于96.0%。注射用青霉素鈉標(biāo)示量卻以單位計(jì)，每1mg青霉素鈉相當(dāng)于1670青霉素單位。,