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1、免疫組化操作步驟(SP法):(1)石蠟切片脫蠟和水化:脫蠟之前將切片置于60℃恒溫箱中烘烤30min。a:二甲苯Ⅰ,5min;b:二甲苯Ⅱ,5min;c:二甲苯Ⅲ,5min;d:無(wú)水乙醇,5min;e:90%酒精,5min;f:80%酒精,5min;g:70%酒精,5min;(2)新鮮配制0.5%過(guò)氧化氫甲醇液,靜置10min,以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性(3)自來(lái)水沖洗3遍,35min(4)抗原修復(fù):將載玻片侵入已加入新鮮配制的001
2、MEDTA,(pH9.0)(或001M枸櫞酸鹽緩沖液pH6.0)的修復(fù)容器槽中,置于高壓鍋高火加熱,高壓噴氣后調(diào)至低火3min,室溫冷卻30min(5)PBS緩沖液沖洗3遍,35min(6)甩去PBS,放于濕盒中,滴加一抗(7)將濕盒放在4℃冰箱過(guò)夜(8)置于37℃恒溫箱復(fù)溫30min(9)PBS緩沖液沖洗3遍,35min(10)甩去PBS,滴加二抗(11)置于37℃恒溫箱復(fù)溫30min(12)PBS緩沖液沖洗3遍,35min(13)甩
3、去PBS,滴加三抗(14)置于37℃恒溫箱復(fù)溫30min(15)PBS緩沖液沖洗3遍,35min(16)甩去PBS,滴加新鮮配制的DAB顯色劑顯色,顯微鏡下控制著色,PBS緩沖液沖洗,流水洗滌(17)蘇木素復(fù)染3min,0.1%鹽酸酒精酸化數(shù)秒,沖洗返藍(lán)(18)脫水、透明、封片:a:70%酒精,5min;b:80%酒精,5min;c:90%酒精,5min;d:無(wú)水乙醇,5min;e:無(wú)水乙醇,5min;f:二甲苯Ⅰ,5min;g:二甲苯
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