免疫組化入門實(shí)驗(yàn)操作

1、免疫組化入門實(shí)驗(yàn)操作免疫組化入門實(shí)驗(yàn)操作一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模阂弧?shí)驗(yàn)?zāi)康模?.了解免疫組化基本原理。2.了解免疫組化實(shí)驗(yàn)操作及注意事項(xiàng)。3.免疫組化結(jié)果判定。通過實(shí)驗(yàn)，讓學(xué)生熟悉免疫組化操作流程及注意事項(xiàng)，對抗原抗體結(jié)合、抗原修復(fù)和酶催化底物顯色進(jìn)行研究。要求學(xué)生通過查閱文獻(xiàn)，在歸納、對比、總結(jié)的基礎(chǔ)上對免疫組化有進(jìn)一步的了解。二、實(shí)驗(yàn)原理：二、實(shí)驗(yàn)原理：三、實(shí)驗(yàn)材料：三、實(shí)驗(yàn)材料：一抗：CD5、CK8、Ki67二抗：MaxVision3其它

2、：檸檬酸抗原修復(fù)液、過氧化物酶阻斷劑、PBS緩沖液、DAB、孵育盒、染色架、蘇木素、蓋玻片、沖洗瓶、中性樹膠，孵育盒。四、實(shí)驗(yàn)步驟：四、實(shí)驗(yàn)步驟：修復(fù)方法修復(fù)方法一、檸檬酸緩沖液高溫高壓修復(fù)法檸檬酸緩沖液高溫高壓修復(fù)法取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液（8001500ml）于壓力鍋中，大火加熱至沸騰；將脫蠟水化后的組織切片至于不銹鋼或耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中。蓋上鍋蓋，扣上壓力閥，將功率調(diào)至800W繼續(xù)加熱至噴氣，從噴氣

3、開始計(jì)時(shí)，1.5分鐘后，壓力鍋離開熱源，室溫冷卻10分鐘后用自來水沖淋高壓鍋外壁加速冷卻至室溫，取出玻片，自來水沖洗干凈。注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：1、加熱時(shí)間長短（1.5分鐘）和加熱功率（800W）的控制很重要，時(shí)間過短可能會使染色強(qiáng)度變淺，時(shí)間過長可能會使染色背景加深。2、必須使用不銹鋼或耐高溫塑料切片架，不能使用銅架，以防緩沖液pH值增高而導(dǎo)致掉片。3、高壓鍋離開熱源后必須等緩沖液冷卻后，才能把切片取出。4、為防止組織脫落，必須使用防脫

4、玻片。5、緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到。二、EDTA水煮修復(fù)法水煮修復(fù)法取500mlEDTA抗原修復(fù)液于1000ml不銹鋼鍋中，加熱至沸騰，將電磁爐功率調(diào)至保溫狀態(tài)（120W），使修復(fù)液保持微沸狀態(tài)。將脫蠟水化后的切片置于耐高溫染色架上，再將染色架緩慢放入不銹鋼鍋中（注意：若快速放入可能會導(dǎo)致組織脫落），之后加蓋繼續(xù)加熱20分鐘。再將不銹鋼鍋從電磁爐上移開，室溫冷卻10分鐘后用自來水沖淋不銹鋼鍋外壁加速冷卻至室溫，取出玻片，自來