植物基因組dna的提取及其定性、定量分析

1、《分子生物學》實驗報告實驗一實驗一植物基因組植物基因組DNA的提取及其定性、定量分析的提取及其定性、定量分析【實驗目的實驗目的】三羥甲基氨基甲烷(Tris)、CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)、β巰基乙醇、氯仿、苯酚、乙醇、氯化鈉(NaCl)、鹽酸、液氮、硼酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、溴酚藍、蔗糖、瓊脂糖、核酸染料。三、試劑1.2CTABbuffer【1】2.70%乙醇【2】3.RNaseA(天根)【3】4.0.5TBE緩沖液(工作濃度

2、)【4】5.6loadingbuffer【5】6.核酸染料(賽百盛)7.DNAmarkerDL2000(Takara)8.酚氯仿(1:1VV)【6】【實驗步驟實驗步驟】1.取約100mg新鮮的擬南芥嫩葉放入1.5mLEP管，在液氮冷凍條件下研磨成粉末狀。2.加入0.6mL2CTAB提取液（用前加入0.2﹪的巰基乙醇），混勻，65℃水浴30min，每10min顛倒混勻一次。3.取出離心管，冷卻后加入0.6mL酚氯仿混合液，混勻。4.115

3、00rpm室溫離心8min(若沒離好可重復一次)。5.將上清液(約400μL)轉(zhuǎn)移到另一新的1.5mL離心管中。6.加入與上清等體積的氯仿，混勻，11500rpm離心8min，取上清(約350μL)。7.加入600μL無水乙醇，上下顛倒混勻，80℃放置30min。8.4℃，15800rpm離心20min，棄上清。9.1mL70％乙醇(預冷)洗滌沉淀2次，上下顛倒幾次，不能vtex，7000g離心3min，棄上清，風干。10.加入30μL