顯微鏡的正確調(diào)試和使用

1、顯微鏡的正確調(diào)試和使用顯微鏡的正確調(diào)試和使用日期日期:20091020來源來源:現(xiàn)代實驗室裝備網(wǎng)現(xiàn)代實驗室裝備網(wǎng)在了解了顯微鏡各主要部件的名稱、構(gòu)造和功能之后，為了更好地發(fā)揮顯微鏡的各種功能，提高在了解了顯微鏡各主要部件的名稱、構(gòu)造和功能之后，為了更好地發(fā)揮顯微鏡的各種功能，提高工作效率，保證在顯微觀察及顯微照像過程中取得最佳效果，使用人員必須了解和掌握顯微鏡正確的調(diào)工作效率，保證在顯微觀察及顯微照像過程中取得最佳效果，使用人員必須了解

2、和掌握顯微鏡正確的調(diào)試方法和使用方法。尤其在新一代顯微鏡中，具備了多種功能，能進行多種顯微鏡檢方法觀察，正確的試方法和使用方法。尤其在新一代顯微鏡中，具備了多種功能，能進行多種顯微鏡檢方法觀察，正確的試調(diào)方法和使用方法就顯得尤為重要。下面以試調(diào)方法和使用方法就顯得尤為重要。下面以Axioplan萬能研究顯微鏡為例，簡述調(diào)試及使用方法。萬能研究顯微鏡為例，簡述調(diào)試及使用方法。1.顯微鏡照明光路系統(tǒng)的調(diào)整顯微鏡照明光路系統(tǒng)的調(diào)整為了使顯微鏡

3、的視野能受到均勻而又充分的照明，在顯微鏡初次安裝為了使顯微鏡的視野能受到均勻而又充分的照明，在顯微鏡初次安裝和調(diào)試時，就必須把照明光路系統(tǒng)調(diào)整好，這是正確使用顯微鏡，并獲得正確、可和調(diào)試時，就必須把照明光路系統(tǒng)調(diào)整好，這是正確使用顯微鏡，并獲得正確、可結(jié)果的重要手段和結(jié)果的重要手段和最基本的要求。此外，正確掌握照明光路系統(tǒng)的調(diào)整，是使用顯微鏡過程中更換光源燈泡后所必經(jīng)的步最基本的要求。此外，正確掌握照明光路系統(tǒng)的調(diào)整，是使用顯微鏡過程中

4、更換光源燈泡后所必經(jīng)的步驟，也是在日常使用過程中不時地檢驗顯微鏡性能的必要手段。驟，也是在日常使用過程中不時地檢驗顯微鏡性能的必要手段。顯微鏡照明光路系統(tǒng)的調(diào)整主要有以下顯微鏡照明光路系統(tǒng)的調(diào)整主要有以下4項內(nèi)容：項內(nèi)容：(1)照明光源燈室在顯微外的初步調(diào)整照明光源燈室在顯微外的初步調(diào)整①首先將燈室的外殼打開，壓彈簧夾子將鹵素?zé)襞菅b入插座中，安裝時避免手指直接接觸燈泡（可用首先將燈室的外殼打開，壓彈簧夾子將鹵素?zé)襞菅b入插座中，安裝時避免

5、手指直接接觸燈泡（可用柔軟的布或紙隔住）柔軟的布或紙隔?。?，以免燈泡上留有指紋等臟物，影響燈泡的使用壽命。，以免燈泡上留有指紋等臟物，影響燈泡的使用壽命。②把燈室擺在桌面上，接通電源后，用專用的螺絲刀調(diào)節(jié)燈的調(diào)焦旋鈕孔（標有把燈室擺在桌面上，接通電源后，用專用的螺絲刀調(diào)節(jié)燈的調(diào)焦旋鈕孔（標有“←→”“←→”），使燈絲投，使燈絲投影在影在12m外的墻上，將燈絲成像調(diào)至清晰；然后調(diào)節(jié)燈的高低位置調(diào)節(jié)絲孔（標有外的墻上，將燈絲成像調(diào)至清晰；然

6、后調(diào)節(jié)燈的高低位置調(diào)節(jié)絲孔（標有“──”“──”），使燈絲，使燈絲位置高低適當(dāng)；再調(diào)節(jié)燈的左右位置調(diào)節(jié)螺絲孔（標有位置高低適當(dāng)；再調(diào)節(jié)燈的左右位置調(diào)節(jié)螺絲孔（標有“──”“──”），使燈絲左右位置合適。，使燈絲左右位置合適。(2)光源發(fā)光體（燈絲）在顯微鏡內(nèi)位置的檢驗和校正光源發(fā)光體（燈絲）在顯微鏡內(nèi)位置的檢驗和校正目的是為了把發(fā)光體的像端端正正地調(diào)入物鏡目的是為了把發(fā)光體的像端端正正地調(diào)入物鏡的視域范圍內(nèi)，從光源的角度去確保顯微鏡的視

7、域受到充分而均勻的照明，這是調(diào)整庫勒照明系統(tǒng)的前的視域范圍內(nèi)，從光源的角度去確保顯微鏡的視域受到充分而均勻的照明，這是調(diào)整庫勒照明系統(tǒng)的前提條件。提條件。需要的基本工具：對中望遠鏡購置顯微鏡時已配備。需要的基本工具：對中望遠鏡購置顯微鏡時已配備。①拔掉燈庫內(nèi)的毛玻璃套筒，把燈室裝回顯微鏡上；拔掉燈庫內(nèi)的毛玻璃套筒，把燈室裝回顯微鏡上；②選用選用10物鏡，開亮光源程序找樣品并調(diào)焦清晰，再換用物鏡，開亮光源程序找樣品并調(diào)焦清晰，再換用40物

8、鏡把樣品調(diào)焦清物鏡把樣品調(diào)焦清晰（晰（40物鏡可物鏡可以看清燈絲的全貌）以看清燈絲的全貌）；③把聚光鏡的孔徑光闌和視場光闌均開到最大；把聚光鏡的孔徑光闌和視場光闌均開到最大；④拔掉其中一個目鏡，換上對中望遠鏡，抓住白色部分，另一手伸縮黑色接目鏡，就可在視野中看到拔掉其中一個目鏡，換上對中望遠鏡，抓住白色部分，另一手伸縮黑色接目鏡，就可在視野中看到燈絲像；燈絲像；⑤如燈絲位置不合適，調(diào)如燈絲位置不合適，調(diào)“──”“──”孔，把燈絲像沿水平

9、方向調(diào)好，調(diào)孔，把燈絲像沿水平方向調(diào)好，調(diào)“──”“──”孔，把絲像沿垂直方向孔，把絲像沿垂直方向調(diào)好，直至將燈絲像調(diào)至剛好充滿物鏡孔徑的光圓像；調(diào)好，直至將燈絲像調(diào)至剛好充滿物鏡孔徑的光圓像；⑥調(diào)整完畢后，將毛玻璃套筒插回原位，拔掉對中望遠鏡，換回目鏡作下一步調(diào)整。調(diào)整完畢后，將毛玻璃套筒插回原位，拔掉對中望遠鏡，換回目鏡作下一步調(diào)整。以上所述照明光以上所述照明光源燈室在顯微鏡外的調(diào)整和光源發(fā)光體在顯微鏡內(nèi)位置的校驗，只需在顯微鏡初次

10、安裝調(diào)試及更換燈泡源燈室在顯微鏡外的調(diào)整和光源發(fā)光體在顯微鏡內(nèi)位置的校驗，只需在顯微鏡初次安裝調(diào)試及更換燈泡(4)孔徑光闌的正確使用孔徑光闌的正確使用由于聚光鏡的孔徑光闌可以影響顯微鏡的分辨率，使用時應(yīng)掌握正確的使用由于聚光鏡的孔徑光闌可以影響顯微鏡的分辨率，使用時應(yīng)掌握正確的使用方法。過去由于對孔徑光闌的認識不足，往往把它當(dāng)作是調(diào)節(jié)視野亮度的工具。雖然調(diào)節(jié)孔徑光闌在一方法。過去由于對孔徑光闌的認識不足，往往把它當(dāng)作是調(diào)節(jié)視野亮度的工具

11、。雖然調(diào)節(jié)孔徑光闌在一定程度上可以改變視野的亮度，但會直接影響成像的反差、對比度及分辨率，在使用過程中應(yīng)盡可能避定程度上可以改變視野的亮度，但會直接影響成像的反差、對比度及分辨率，在使用過程中應(yīng)盡可能避免。免。為了發(fā)揮聚光鏡孔徑光闌的作用，以便在觀察時，尤其在作顯微照相時獲得最佳分辨率，在每換為了發(fā)揮聚光鏡孔徑光闌的作用，以便在觀察時，尤其在作顯微照相時獲得最佳分辨率，在每換用一個倍數(shù)的物鏡時，在樣品調(diào)焦清晰后，需要調(diào)節(jié)孔徑光闌，使它的

12、大小正好等于所用物鏡數(shù)值孔徑用一個倍數(shù)的物鏡時，在樣品調(diào)焦清晰后，需要調(diào)節(jié)孔徑光闌，使它的大小正好等于所用物鏡數(shù)值孔徑（物鏡孔徑像）的（物鏡孔徑像）的23。調(diào)整方法是用對中望遠鏡對焦于視野中黑色相差環(huán)上，調(diào)節(jié)孔徑光闌，可以調(diào)整方法是用對中望遠鏡對焦于視野中黑色相差環(huán)上，調(diào)節(jié)孔徑光闌，可以看到一個多邊形的孔徑光闌像，然后調(diào)到等于物鏡孔徑像的看到一個多邊形的孔徑光闌像，然后調(diào)到等于物鏡孔徑像的23，即介于黑色相差環(huán)外與圓形視域內(nèi)之，即介于黑

13、色相差環(huán)外與圓形視域內(nèi)之間。為方便起見，可把與各倍數(shù)物鏡相對應(yīng)的孔徑光闌預(yù)先調(diào)整好，并作好標記，以免每次使用都要重間。為方便起見，可把與各倍數(shù)物鏡相對應(yīng)的孔徑光闌預(yù)先調(diào)整好，并作好標記，以免每次使用都要重新調(diào)整。新調(diào)整。2.顯微鏡成像光路系統(tǒng)的調(diào)整及顯微鏡檢術(shù)概要顯微鏡成像光路系統(tǒng)的調(diào)整及顯微鏡檢術(shù)概要顯微鏡成像光路系統(tǒng)的調(diào)整，是根據(jù)不同顯微鏡檢術(shù)顯微鏡成像光路系統(tǒng)的調(diào)整，是根據(jù)不同顯微鏡檢術(shù)的需要而進行的。所謂顯微鏡檢術(shù)（的需要而進行

14、的。所謂顯微鏡檢術(shù)（microscopy），概括而言就是以顯微鏡觀察樣品時所使用的照明方法，，概括而言就是以顯微鏡觀察樣品時所使用的照明方法，以及如何使樣品所成的像能獲得更良好反差的技術(shù)與方法。以下簡述顯微鏡檢術(shù)中已成熟的幾種方法及以及如何使樣品所成的像能獲得更良好反差的技術(shù)與方法。以下簡述顯微鏡檢術(shù)中已成熟的幾種方法及對應(yīng)的顯微鏡成像光路系統(tǒng)的調(diào)整方法。對應(yīng)的顯微鏡成像光路系統(tǒng)的調(diào)整方法。(1)透射光明視野（透射光明視野（bright

15、field）這是自顯微鏡發(fā)明以來最傳統(tǒng)、最普遍的應(yīng)用方法。這是自顯微鏡發(fā)明以來最傳統(tǒng)、最普遍的應(yīng)用方法?；静考夯静考篴.物鏡：任何物鏡都可作明視野觀察；物鏡：任何物鏡都可作明視野觀察；b.聚光鏡：各種聚光鏡均可，最好配有孔徑光闌。聚光鏡：各種聚光鏡均可，最好配有孔徑光闌。調(diào)整方法：在調(diào)整方法：在上述顯微鏡的庫勒照明系統(tǒng)調(diào)整好后，即可應(yīng)用明視野法。上述顯微鏡的庫勒照明系統(tǒng)調(diào)整好后，即可應(yīng)用明視野法。適用范圍：所有已染色的組織切片、

16、血液適用范圍：所有已染色的組織切片、血液涂片等。涂片等。注意事項：注意事項：a.使用明視野方法觀察時，一定要將庫勒照明系統(tǒng)調(diào)整好；使用明視野方法觀察時，一定要將庫勒照明系統(tǒng)調(diào)整好；b.視場光闌不可任視場光闌不可任意開大，使用意開大，使用10、10以下和以下和10以上物鏡時，要將聚光鏡前端透鏡分別擺事實出和擺進光路中；以上物鏡時，要將聚光鏡前端透鏡分別擺事實出和擺進光路中；c.不可用聚光鏡的孔徑光闌來調(diào)節(jié)視野的亮度，更不要亂調(diào)聚光鏡的高低

17、位置，否則，會降低顯微鏡的不可用聚光鏡的孔徑光闌來調(diào)節(jié)視野的亮度，更不要亂調(diào)聚光鏡的高低位置，否則，會降低顯微鏡的分辨率和破壞已調(diào)整好的庫勒照明系統(tǒng)；分辨率和破壞已調(diào)整好的庫勒照明系統(tǒng)；d.作顯微照相時，每換用一個倍數(shù)的物鏡，就要調(diào)節(jié)聚光鏡作顯微照相時，每換用一個倍數(shù)的物鏡，就要調(diào)節(jié)聚光鏡的孔徑光闌，使它的大小正好等于所用物鏡數(shù)值孔徑的的孔徑光闌，使它的大小正好等于所用物鏡數(shù)值孔徑的23。(2)透射光相差法（透射光相差法（phaseco

18、ntrast）這是現(xiàn)代顯微鏡檢術(shù)中的一種反差增強法。這是現(xiàn)代顯微鏡檢術(shù)中的一種反差增強法?；静考合嗖钗锘静考合嗖钗镧R、明視野與相差兼用的多用途聚光鏡、對中望遠鏡、綠色濾光片。鏡、明視野與相差兼用的多用途聚光鏡、對中望遠鏡、綠色濾光片。調(diào)整方法：調(diào)整方法：a.在庫勒照明系統(tǒng)調(diào)在庫勒照明系統(tǒng)調(diào)整好的基礎(chǔ)上，用明視野方法把樣品調(diào)焦清晰；整好的基礎(chǔ)上，用明視野方法把樣品調(diào)焦清晰；b.把聚光鏡轉(zhuǎn)到把聚光鏡轉(zhuǎn)到Ph1對準轉(zhuǎn)盤刻度線位置，選用

19、對準轉(zhuǎn)盤刻度線位置，選用10相差物鏡，換上待觀察的透明樣品；相差物鏡，換上待觀察的透明樣品；c.拔掉其中一個目鏡，換上對中望遠鏡，并調(diào)焦于視野中的兩個拔掉其中一個目鏡，換上對中望遠鏡，并調(diào)焦于視野中的兩個相差環(huán)上（物鏡的黑色相差環(huán)和聚光鏡的透光相差環(huán)）相差環(huán)上（物鏡的黑色相差環(huán)和聚光鏡的透光相差環(huán)）；d.視野中的兩個相差環(huán)不一定重合，調(diào)節(jié)聚光視野中的兩個相差環(huán)不一定重合，調(diào)節(jié)聚光鏡上的兩個調(diào)節(jié)裝置（調(diào)整相差環(huán)左右位置的調(diào)節(jié)桿和調(diào)整前后位

20、置的摩擦式轉(zhuǎn)鈕）鏡上的兩個調(diào)節(jié)裝置（調(diào)整相差環(huán)左右位置的調(diào)節(jié)桿和調(diào)整前后位置的摩擦式轉(zhuǎn)鈕），使透光環(huán)作前后，使透光環(huán)作前后左右移動而與黑環(huán)重合；左右移動而與黑環(huán)重合；e.調(diào)整好后，換回觀察用目鏡，將綠色濾光片按入光路中，即可觀察到樣品調(diào)整好后，換回觀察用目鏡，將綠色濾光片按入光路中，即可觀察到樣品的相差像；的相差像；f.有20和40物鏡觀察時，聚光鏡應(yīng)設(shè)在物鏡觀察時，聚光鏡應(yīng)設(shè)在Ph2位置上，用位置上，用100物鏡時，聚光鏡應(yīng)設(shè)在物鏡時