化學發(fā)光技術綜述

1、化學發(fā)光技術綜述化學發(fā)光技術綜述化學發(fā)光技術綜述化學發(fā)光免疫測定（CLIA）是將抗原與抗體特異性反應與敏感性的化學發(fā)光反應相結合而建立的一種免疫檢測技術。（一）原理化學發(fā)光免疫測定（CLIA）屬于標記抗體技術的一種，它以化學發(fā)光劑、催化發(fā)光酶或產物間接參與發(fā)光反應的物質等標記抗體或抗原，當標記抗體或標記抗原與相應抗原或抗體結合后，發(fā)光底物受發(fā)光劑、催化酶或參與產物作用，發(fā)生氧化還原反應，反應中釋放可見光或者該反應激發(fā)熒光物質發(fā)光，最后用

2、發(fā)光光度計進行檢測。（二）特點特異性高、敏感性高、分離簡便、快速、試劑無毒、安全穩(wěn)定、可自動化。（三）分類1、從反應原理上，化學發(fā)光免疫技術主要分為直接化學發(fā)光和酶促反應化學發(fā)光。1.1直接化學發(fā)光化學發(fā)光劑在發(fā)光免疫分析過程中不需酶的催化作用，直接參與發(fā)光反應，它們在化學結構上有產生發(fā)光的特有基團，可直接標記抗原或抗體。直接化學發(fā)光速度快、試劑穩(wěn)定性好，但靈敏度略低于酶促發(fā)光。代表性的發(fā)光劑有吖啶酯、三聯吡啶釕。1.1.1吖啶酯在堿性

3、條件下被H2O2氧化時發(fā)出波界影響，其代表性的發(fā)光物質有魯米諾及其衍生物、AMPPD1.2.1.魯米諾及其衍生物（HRP激活酶為辣根過氧化物酶（HRP，魯米諾體系的發(fā)光基本上為閃光型且信號弱。但在使用增強劑的情況下，發(fā)光的持續(xù)時間可延到3060min，發(fā)光強度至少增加100倍以上?，F通常采用的體系是LuminolH2O2HRP體系，即用HRP標記抗原或抗體，以魯米諾或異魯米諾及其衍生物作發(fā)光底物，對碘苯酚或對苯基酚等作增強劑，用NaOH

4、H2O2作發(fā)光啟動試劑，化學發(fā)光反應2min后，光反射強度達到最高峰；20min后，光強度減少20。1.2.2.異魯米諾（ABEI）新產業(yè)的化學發(fā)光使用的發(fā)光劑，使用的是閃光非酶激活技術，加入啟動液后測試0.13s時間內的發(fā)光強度。1.2.3AMPPDAP激活酶為堿性磷酸酶（AP）AMPPD的特性1在堿性環(huán)境下，AMPPD的非酶解性的水解程度低，即本底低；2熱穩(wěn)定性好，在pH7.0的水中，30℃時的分解半衰期為142h；3發(fā)光為輝光型，