血清清蛋白、γ-球蛋白的分離、提純與鑒定

1、血清清蛋白、血清清蛋白、γ球蛋白的分離、提純與鑒定球蛋白的分離、提純與鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握鹽析法、凝膠層析法、離子交換層析法分離蛋白質(zhì)的原理和基本方法；2.掌握醋酸纖維素薄膜電泳法的原理和基本方法；3.了解柱層析技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理血清蛋白主要由清蛋白和球蛋白組成，各行使其重要的功能。本實(shí)驗(yàn)利用鹽析方法將血清中的清蛋白和球蛋白分離，并用電泳技術(shù)觀察蛋白質(zhì)分離教果。1鹽析蛋白質(zhì)分子能穩(wěn)定存在于水溶液中是因?yàn)橛袃蓚€(gè)

2、穩(wěn)定因素：表面的電荷和水化膜。當(dāng)維持蛋白質(zhì)的穩(wěn)定因素破壞時(shí)，蛋白質(zhì)分子可相互聚集沉淀而析出，蛋白質(zhì)分子沉淀析出的方法很多，根據(jù)對(duì)蛋白質(zhì)穩(wěn)定因素破壞的不同有中性鹽析法、有機(jī)溶溶劑法、重金屬鹽法以及生物堿試劑法等。鹽析法的原理是：中性鹽如硫酸銨((NH４)２SO4)等對(duì)蛋白質(zhì)作用破壞了蛋白質(zhì)表面水化膜，并且中和了部分電荷，從而使蛋白質(zhì)相互聚集而析出。由于血清中各種蛋白質(zhì)分子的顆粒大小、所帶電荷的多少和親水程度不同，故鹽析所需的鹽濃度也不同，

3、因此調(diào)節(jié)鹽的濃度可使不同的蛋白質(zhì)沉淀從而達(dá)到分離的目的。血清球蛋白在半飽和狀態(tài)下發(fā)生沉淀，而血清清蛋白在完全飽和狀態(tài)下沉淀，利用此特性可把蛋白質(zhì)分段沉淀下來(lái)，即在半飽和的中，血清蛋白不沉淀，而血球蛋白沉淀，離心后清蛋白主要在上清液中，沉淀蛋白加少量蒸餾水即可溶解，由此達(dá)到分離清蛋白和白蛋白的目的。2脫鹽鹽析得到的蛋白質(zhì)含有高濃度中性鹽，需要有脫鹽過程去除蛋白質(zhì)遺留的中性鹽，酸銨緩沖液、0.02moll的PH6.5醋酸銨緩沖液、1.5mo

4、ll的NaCl0.3molNH4AC溶液、20%磺基水楊酸、1%BaCl2溶液、電泳儀、電泳槽。2.實(shí)驗(yàn)方法1)實(shí)驗(yàn)流程2)實(shí)驗(yàn)步驟1鹽析：中性鹽沉淀步驟步驟操作（1）鹽析取離心管一個(gè)，加入0.8mol人或動(dòng)物血清，邊搖邊緩慢滴入飽和硫酸銨溶液0.8ml，混勻后室溫下放置10min，離心10min（4000rmin）。用滴管小心吸出上清液置于試管中，作為純化清蛋白之用（2）溶解沉淀向離心管的沉淀加入0.6mol蒸餾水，振搖使之溶解，作為