《培養(yǎng)基的制備與消毒滅菌》 實驗報告

1、《培養(yǎng)基的制備與消毒滅菌培養(yǎng)基的制備與消毒滅菌》實驗報告實驗報告實驗目的實驗目的1.學習和掌握配制培養(yǎng)基（以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制為例）的一般方法和原理。2.了解消毒和滅菌的原理，掌握常用滅菌方法的操作步驟。實驗原理實驗原理培養(yǎng)基是人工配制的適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)，用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存各種微生物或積累代謝產(chǎn)物。在自然界中微生物種類繁多，營養(yǎng)類型多樣，加之實驗和研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多。但是，不同種

2、類的培養(yǎng)基中，一般應含有水分、碳源、氮源、能源、無機鹽、生長因素等。不同微生物對PH要求不一樣雷菌和酵母的培養(yǎng)基的pH一般是偏酸性的，而細菌和放線菌的培養(yǎng)基的pH一般為中性或微堿性的(嗜堿細菌和嗜酸細菌例外)。所以配制培養(yǎng)基時，都要根據(jù)不同微生物的要求將培養(yǎng)基的pH調(diào)到合適的范圍。此外，由于配制培養(yǎng)的各類營養(yǎng)物質(zhì)和容器等含有各種微生物，因此，已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌如果來不及滅菌，應暫存冰箱內(nèi)，以防止其中的微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分和

3、改變培養(yǎng)的酸堿度所帶來不利的影響。高壓蒸氣滅菌是將持滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸氣。待水蒸氣急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關閉排氣閥繼續(xù)加熱，此時由于蒸氣不能道出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細菌生長

4、繁殖所需要的最基本的營養(yǎng)物質(zhì)，所以可供作微生物生長繁殖之用。基礎培養(yǎng)基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而NaCl提供無機鹽。在配制固體培養(yǎng)基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑，瓊脂在常用濃度下96℃時溶化，實際應用時，一般在沸水浴中或下而墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在40℃時凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所

5、不同。由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細菌，因此要用稀酸或稀堿將其PH調(diào)至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁殖。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方如下：牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g半固體分裝一般以試管高度的1／3為宜，滅菌后垂直待凝。6.加塞培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角瓶口上塞上棉塞(或硅膠塞、金屬或高溫塑料試管帽等)，以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內(nèi)面造成污染，并保證有良好的通氣性能(棉塞制作方法附本實驗后面)。7.包扎加塞后，將全部試

6、管放入鐵絲筐或用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、配制日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結(jié)形式扎好，使用時容易解開，同樣用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、配制日期。8.滅菌將上述培養(yǎng)基以0.103MPa，l21℃，20min高壓蒸氣滅菌。9.擺斜面將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多)，將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不

7、超過試管總長的一半為宜l0.無菌檢查將滅菌培養(yǎng)基放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)2448h以撿查滅菌是否徹底。注意事項注意事項1.蛋白胨很容易吸濕，在稱取時動作要迅速，另外，稱量時嚴防藥品混雜一把牛角匙用于一種藥品或稱取一種藥品后，洗凈——擦干——再稱職另一藥品——瓶蓋也不要蓋錯。2.在瓊脂溶化過程中應控制火力，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器。同時，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦，制培養(yǎng)基時，不可用銅或鐵鍋加熱溶化，以免離子進入培養(yǎng)基中，影響細菌生長

8、。3.對于有些要求PH較精確的微生物，其PH的調(diào)節(jié)可用酸度計進行(使用方法、可參考有關說明書)。pH不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。配制pH低的瓊脂培養(yǎng)基時若預先記好PH并在高壓蒸汽下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固。因此，應將培養(yǎng)基的成分和瓊脂分開滅菌后再混合，或在中性pH條件下滅菌，再調(diào)整pH。4.分裝過程中，注意不要使培養(yǎng)基沾在管(瓶)口上，以免沾污面塞而引起污染。（二）高壓蒸汽滅菌法步驟（二）高壓蒸汽滅菌法步驟1.加