黃芪甲甙促進(jìn)臍帶血干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的作用研究

1、1黃芪甲苷促進(jìn)臍帶血干細(xì)胞黃芪甲苷促進(jìn)臍帶血干細(xì)胞…………福建福建…………醫(yī)院醫(yī)院…科（福州科（福州35000313500031）廖）廖…江…【摘要】目的目的探討黃芪甲苷對臍帶血……的作用。方法方法采用貼壁法分離人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)對細(xì)胞表型進(jìn)行鑒定。通過免疫組化方法觀察黃芪甲苷對間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的促進(jìn)作用。結(jié)果結(jié)果流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明，分離的臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)CD29、CD44和CD105，不表達(dá)CD34

2、和HLADR。黃芪甲苷（濃度200mgL)作用下，間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)特異性心肌細(xì)胞蛋白，包括結(jié)蛋白（desmin）、α橫紋肌肌動蛋白（αsarcomericactin）和肌鈣蛋白T(CTnT)。結(jié)論結(jié)論黃芪甲苷對臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞分化……【關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞】黃芪甲苷；間充質(zhì)干細(xì)胞；心肌細(xì)胞【中圖分類號中圖分類號】R【文獻(xiàn)標(biāo)識碼文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號文章編號】10022600(2011)01急性心肌梗塞是嚴(yán)重的心血管疾病，患者部分心肌因嚴(yán)重而

3、持久的缺血發(fā)生局部壞死，從而導(dǎo)致心臟功能的嚴(yán)重?fù)p害。對于終末期的心功能不全患者，……。短短的幾年，心肌梗塞的間充質(zhì)干細(xì)胞（MesenchymalstemcellMSC）治療即從動物試驗過渡到臨床[13]。研究表明，MSC可以從骨髓、臍血、外周血、皮膚、脂肪等多種組織中分離獲得；但從取材的方便程度、細(xì)胞的免疫原性和增殖分化能力等多方面綜合考慮，臍血作為MSC的來源具有很大的優(yōu)勢。尤其是心?；颊?，骨髓采集比較困難。本研究采用貼壁法分離臍帶血

4、MSC，并探索黃芪甲苷對其向心肌細(xì)胞分化的影響。1材料與方法材料與方法1.11.1試驗試劑試驗試劑:淋巴細(xì)胞分離液（濃度1.077gml），購自中科院天津血液病研究所……。DMEMLG培養(yǎng)基，購自Sigma公司……。胎牛血清，購自杭州四季青生物工程材料有限公司。0.25%胰蛋白酶0.02%乙二胺四乙酸（EDTA），購自Gibico公司。各種抗體購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。黃芪甲苷購自中檢所。DHank`S液自配（稱NaCl8g，KC

5、l0.40g，Na2HPO4H2O0.06g，KH2PO40.06g，NaHCO30.35g，酚紅0.02g，加超純水至1000ml，充分溶解后，用NaHCO3溶液調(diào)節(jié)pH至7.2～7.4，0.22μm濾膜過濾，4℃保存）?；瘜W(xué)試劑為分析純。1.21.2方法方法1.2.1臍血標(biāo)本的采集：參照文獻(xiàn)報道的方法[6]。臍血標(biāo)本來自于健康足月順產(chǎn)或剖宮產(chǎn)新生兒，產(chǎn)婦產(chǎn)前檢查均正常。臍血的收集均已征得產(chǎn)婦同意。待胎兒娩出后，……用注射器穿刺臍靜脈

6、抽取臍血，加入含有肝素（20Uml）的生理鹽水瓶中，充分混勻。臍血采集后4h內(nèi)進(jìn)行臍血單個核細(xì)胞的分離。1.2.2臍血單個核細(xì)胞的分離和培養(yǎng):采用密度梯度離心法。取50ml的無菌帶蓋離心管，加入1.0773圖1原代培養(yǎng)的人臍血原代培養(yǎng)的人臍血MSCsMSCs，呈束狀擴(kuò)增，呈束狀擴(kuò)增2.22.2MSCMSC的表型測定的表型測定:流式細(xì)胞儀檢測顯示人臍血MSC表達(dá)CD29、CD44和CD105（陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)分別為96.8%、98.3%、9

7、8.1%）；不表達(dá)造血干細(xì)胞特異性表面抗原CD34和主要組織相容性復(fù)合物Ⅱ類分子HLADR（圖2）?？梢娙四氀狹SC表面抗原與來源于骨髓的MSC的表面抗原標(biāo)記相一致。圖2臍帶血臍帶血MSCMSC表型測定顯示表型測定顯示CD29CD29、CD44CD44、CD105CD105、CD34CD34和HLADRHLADR2.32.3心肌干細(xì)胞的分化心肌干細(xì)胞的分化:終末濃度為200mgL的黃芪甲苷誘導(dǎo)MSC3周后免疫組化染色顯示細(xì)胞表達(dá)心肌細(xì)胞