臍帶血干細(xì)胞的培養(yǎng)與收獲.pdf

1、臍帶血(Umbilicalcordblood，UCB)中同時(shí)含有造血干細(xì)胞(Hematopoieticstemcells，HSCs)和間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymalstemcells，MSCs)，造血干細(xì)胞(UCB—HSCs)已被用于基因治療、腫瘤凈化和造血重建等方面，另一種干細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞(UCB—MSCs)，不僅可以作為滋養(yǎng)層細(xì)胞支持HSCs在體外的大規(guī)模擴(kuò)增，在造血移植過程中還能夠降低并發(fā)癥的發(fā)生率以及加速造血重建功能的恢

2、復(fù)。因此，在一次原代實(shí)驗(yàn)中同時(shí)培養(yǎng)并收獲這兩種細(xì)胞具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。但是這兩種細(xì)胞的生長方式不同，UCB—HSCs為懸浮生長而UCB—MSCs為貼壁生長，傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法很難在一次原代實(shí)驗(yàn)中同時(shí)培養(yǎng)并分別收獲兩種細(xì)胞。本文利用微載體為UCB—MSCs提供貼壁表面，尋找適宜的培養(yǎng)基來同時(shí)培養(yǎng)臍帶血中的兩種干細(xì)胞。培養(yǎng)結(jié)束后采用自由沉降的方法方便地將懸浮的UCB—HSCs和粘附在微載體上的UCB—MSCs兩種干細(xì)胞分離并收獲。

3、本文通過正交實(shí)驗(yàn)證實(shí)血清是原代UCB—MSCs在微載體表面成功貼附并生長的重要影響因素，而在一般的血清培養(yǎng)中使用的是胎牛血清(FBS)等動(dòng)物血清，這種體系下培養(yǎng)擴(kuò)增的細(xì)胞在臨床應(yīng)用時(shí)會(huì)有免疫排斥反應(yīng)等。本文從同一份臍帶血中提取了人自體血清，作為FBS的替代血清加入到培養(yǎng)基中，亦可同時(shí)收獲UCB—HSCs和UCB—MSCs，原代培養(yǎng)UCB—MSCs的成功率為71.4％。本文同時(shí)考察了不同血清用量對(duì)UCB—HSCs和UCB—MSCS體外擴(kuò)增