等位酶標(biāo)記

1、380等位酶標(biāo)記等位酶標(biāo)記382距離，從而分辨出不同類型的亞基。反過來，根據(jù)酶譜上分離出來的各個亞基的不同表現(xiàn)（遷移距離相等或者不等），就可以確定該個體在該位點(diǎn)上是純合體還是雜合體（圖1）。等位酶標(biāo)記第一次用比較簡單而直觀的方法識別出了大量的基因位點(diǎn)和每個位點(diǎn)的等位基因，能夠定量地考察遺傳變異。等位酶標(biāo)記是一個共顯性標(biāo)記（codominance即能夠區(qū)分雜合子Aa和顯性純合子AA），從酶譜上可以直接確定編碼該等位酶的等位基因，而且等位酶

2、的遺傳和表達(dá)都遵循孟德爾定律。等位酶分析的成本相對較低，方法也比較簡單。等位酶分析方法有著較廣的應(yīng)用范圍。等位酶作為一種穩(wěn)定的基因組標(biāo)記，它所揭示的酶蛋白質(zhì)的多態(tài)性可以看作是對整個基因組的隨機(jī)取樣，從而對種群的遺傳學(xué)結(jié)構(gòu)做出估計，測量種群的遺傳多樣性以及各種群間的遺傳距離。進(jìn)行等位酶分析首先要把各種有功能的可溶性酶蛋白質(zhì)從植物細(xì)胞中提取出來，并保證這些酶提取出來以后活性基本不變。通常使用的提取緩沖液（extractingbuffer）有

3、簡單磷酸提取緩沖液、復(fù)雜磷酸提取緩沖液、Tris馬來酸提取緩沖液和TrisHCl提取緩沖液四種。多數(shù)食用植物和花粉可以用簡單緩沖液提取，而大多數(shù)野生植物由于含有較多的酚類等有害于酶蛋白質(zhì)的物質(zhì)，一般需要用復(fù)雜的提取緩沖液。所以，等位酶分析的第一步就是針對具體的實(shí)驗(yàn)材料確定合適的提取緩沖液（詳見王中仁1996）。然后進(jìn)行電泳分離?，F(xiàn)在經(jīng)常使用的有水平切片淀粉凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、醋酸纖維素膜電泳等等，這一過程相對簡單，要注意的是在

4、整個過程中要防止酶失去活性。電泳結(jié)束后應(yīng)立即進(jìn)行染色。等位酶染色分為膠染和液染兩種，到底采用哪一種染色方法，主要取決于各自實(shí)驗(yàn)室的條件、染色效果以及染色的成本等等。許多研究都提供了各種不同酶系統(tǒng)染色的詳細(xì)配方(Soltisetal.1983Werth1985Pasteuretal.1988Wendel&Weeden1989Werth1990)。含有各種酶蛋白的組織勻漿樣品經(jīng)過凝膠電泳以后，由于不同酶蛋白的凈電荷以及分子大小和形狀不同而遷

5、移速率不同，各種酶蛋白分散在電泳跑道上。但此時這些酶是看不見的。專性組織化學(xué)染色是其成為可見酶譜的一個重要環(huán)節(jié)。通常，一種染色混合液只提供適合于特定酶的特殊反應(yīng)底物，使得這種酶催化有關(guān)聯(lián)的特殊反應(yīng)，產(chǎn)生可見的染料。化學(xué)探測染色、電子傳遞染料染色、酶連鎖染色是三種常見的染色方法。在化學(xué)探測染色反應(yīng)中，凝膠上的酶蛋白與染液中的底物反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物再和重氮鹽（如固藍(lán)RRaba2a1a2b2b2b1圖1等位酶標(biāo)記的原理與流程（以基因型為ab單體酶