異黃酮合成酶基因無(wú)標(biāo)記轉(zhuǎn)化番茄的研究.pdf

1、目前,因?yàn)檗D(zhuǎn)化效率的問(wèn)題,大多數(shù)植物遺傳轉(zhuǎn)化操作需要使用選擇標(biāo)記基因,諸如抗生素或除草劑抗性基因等來(lái)篩選轉(zhuǎn)化子,雖然仍無(wú)直接研究結(jié)果表明選擇標(biāo)記基因影響人類(lèi)健康或環(huán)境安全,但近年來(lái)人們對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全性的擔(dān)心卻與日俱增,為了消除轉(zhuǎn)基因食品的安全性顧慮,無(wú)選擇標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植物應(yīng)運(yùn)而生。 本文初步對(duì)Cre/lox重組系統(tǒng)進(jìn)行了研究,并用已構(gòu)建好的能有效刪除標(biāo)記基因的Cre/loxp組成型載體利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化煙草,獲得了共轉(zhuǎn)化煙草植株

2、；植物異黃酮是一類(lèi)具有增強(qiáng)植物抗病、誘導(dǎo)根瘤形成以及預(yù)防激素相關(guān)腫瘤發(fā)生、緩解女性更年期綜合癥的活性次生代謝產(chǎn)物,其合成關(guān)鍵酶是異黃酮合酶(IFS);本研究為了改良加工番茄的品質(zhì)特性,使人們?cè)谑秤眉庸し旬a(chǎn)品的同時(shí)獲得更好的保健效果,對(duì)加工番茄遺傳轉(zhuǎn)化的再生體系進(jìn)行了優(yōu)化,構(gòu)建了含有IFS基因的植物表達(dá)載體pBI121-ifs,并用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化加工番茄子葉且獲得了轉(zhuǎn)基因植株；果樹(shù)由于自身的特點(diǎn),使得遺傳轉(zhuǎn)化有很大的難度和特殊性。所

3、以本文以草莓和蘋(píng)果為試材,建立了適用于草莓和蘋(píng)果轉(zhuǎn)基因的高效遺傳轉(zhuǎn)化體系。 本研究的主要結(jié)論如下： 1.本試驗(yàn)對(duì)獲得的22株共轉(zhuǎn)化煙草葉片提取DNA進(jìn)行PCR檢測(cè),結(jié)果證明有10株成功刪除了gus基因,刪除率為45.5％； 2.農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化加工番茄時(shí)篩選出的最適宜培養(yǎng)基：預(yù)培養(yǎng)培養(yǎng)基是MS+B5+IAA 1.0mg/L+6-BA2.0mg/L,篩選轉(zhuǎn)化苗培養(yǎng)基為MS+B5+IAA 1.0mg/L+6-BA2.0

4、mg/L+Cef500mg/L+Kan50mg/L,轉(zhuǎn)化苗生根培養(yǎng)基為1/2MS+B5+IBA2.0mg/L+Cef300mg/L+Kan50mg/L,對(duì)獲得的11株轉(zhuǎn)化加工番茄提取DNA和RNA進(jìn)行PCR和RT-PCR檢測(cè),結(jié)果證明有4株已經(jīng)成功轉(zhuǎn)入了ifS基因,轉(zhuǎn)化效率為36.4％； 3.草莓離體再生體系建立中篩選的最佳培養(yǎng)基：莖尖快繁培養(yǎng)基1/2MS+B5+NAA0.5mg/L十TDZ0.5mg/L,不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+