酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定黃曲霉毒素b1探討

1、酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定黃曲霉毒素B1探討【摘要】本文對(duì)酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定花生油中的B1進(jìn)行探究分析，總結(jié)酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）的方法與其他常用測(cè)定發(fā)進(jìn)行比較探討，并對(duì)酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定黃曲霉毒素B1的方法進(jìn)行了簡(jiǎn)單的闡述?！娟P(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定黃曲霉毒素B1黃曲霉毒素主要是由黃曲霉和寄生曲霉兩者產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，其中最主要的是黃曲霉毒素B1，其主要存在于霉變的谷物、大米、果仁和花生等食物中，在食用油等制品中也常常

2、能夠發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素B1。目前常用的方法主要有薄層層析法（TLC）、液相色譜法（HPLC）和酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）[1]。用HPLC雖然有著特異性好，靈敏度高和測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠這些優(yōu)點(diǎn)，但是其技術(shù)要求高，儀器昂貴，不易于普遍使用。而TLC方法的樣品處理過程比較繁鎖，而且分析時(shí)間長(zhǎng)，操作人員要直接接觸毒素和大量有機(jī)溶劑，不適宜大批量樣品的快速檢測(cè)，主要是用來做半定量。因此，本文用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定黃曲霉毒素B1，并對(duì)酶聯(lián)免疫吸附方法進(jìn)

3、行了探討和分析。一、酶聯(lián)免疫吸附法免疫分析技術(shù)在黃曲霉毒素分析過程中是最為引人注目的，因?yàn)樗鼈兙哂懈叨鹊撵`敏度和選擇性，而且具有快速和大批量檢測(cè)的能力。競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）從1995年起已成為AOAC檢測(cè)黃曲霉毒兔HRP結(jié)合物（1：4000），37℃反應(yīng)1h。洗滌方法同上；顯色：每孔加100μL底物溶液，37℃反應(yīng)10min；終止反應(yīng)：每孔加一定量一定濃度的硫酸溶液，終止反應(yīng)。立即放入酶標(biāo)儀中測(cè)定吸收值。二、幾種測(cè)定方法

4、差異酶聯(lián)免疫法的影響因素主要有：pH值、脂肪、重金屬等，金屬離子的存在嚴(yán)重破壞了酶的活性，致使酶底物加入后顯色偏淺，易出現(xiàn)假陽性；脂肪吸附在包被抗體孔中，阻礙了樣品液（抗原）與特異性抗體的結(jié)合，同樣容易造成假陽性。趙曉聯(lián)等就提取溶劑的組成、酸堿性、含鹽量以及金屬離子的含量對(duì)ELISA檢測(cè)結(jié)果的影響進(jìn)行了考察。提取溶劑隨著甲醇含量的增大，樣品提取液偏向假陽性的趨勢(shì)就越大，當(dāng)甲醇含量10～40%時(shí)，其對(duì)測(cè)定的影響可以忽略；當(dāng)甲醇含量超過50

5、%時(shí)，表現(xiàn)為假陰性增強(qiáng)。而待測(cè)樣品的pH值對(duì)測(cè)定結(jié)果影響很大，當(dāng)pH值小于4時(shí)，結(jié)果顯示為假陽性；當(dāng)pH值高于8時(shí)，結(jié)果偏為假陰性，因此應(yīng)將待測(cè)樣品液的pH值調(diào)至6～7再進(jìn)行測(cè)定。鹽濃度與ELISA測(cè)定結(jié)果的關(guān)系是：隨著鹽濃度的增大，測(cè)得結(jié)果有偏向假陽性的趨勢(shì)，但變化比較平穩(wěn)，用三氯甲烷對(duì)鹽溶液進(jìn)行提取后，可基本消除鹽對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果的影響。當(dāng)Fe3濃度超過0.lmgmL時(shí)，對(duì)酶的影響顯著增強(qiáng)，F(xiàn)e3濃度在.02mgmL時(shí)，測(cè)定結(jié)果