臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立

1、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立,2013.10.21,,From,福建省臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化培訓(xùn)暨技術(shù)人員培訓(xùn)班衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心 李金明,Contents,PCR技術(shù)介紹； 質(zhì)量管理體系的建立； 質(zhì)量保證； 質(zhì)控規(guī)則；,,,,,PCR技術(shù),,高溫,Target Sequence,Target Sequence,較低溫度,Target Sequence,

2、,最適溫度,,1,2,3,實(shí)時(shí)熒光定量PCR,模板起始濃度越高，熒光信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到域值所需的循環(huán)數(shù)越少，即Ct值越小。,模板起始濃度的常用對(duì)數(shù)與Ct值呈負(fù)線性關(guān)系。,,無基因無核酸的重要性,嚴(yán)格分區(qū)（一區(qū)→二區(qū)→三區(qū)）；開窗通風(fēng)；用次氯酸鈉擦洗地面和臺(tái)面，甚至墻面；增長(zhǎng)紫外照射的時(shí)間；用75%乙醇空中噴霧；實(shí)驗(yàn)前的處理程序和實(shí)驗(yàn)后的處理程序；,核酸污染的來源,臨床標(biāo)本中存在的大量待測(cè)微生物科研中得到的質(zhì)?？寺∫郧胺治鲅芯康奶?/p>

3、定微生物大量存在于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中的特定微生物以前擴(kuò)增產(chǎn)物的殘留污染。這也是PCR實(shí)驗(yàn)室最容易產(chǎn)生的，將造成假陽性的“污染”。,Next,質(zhì)量體系文件的編寫,基本原則：最有效+符合實(shí)際；三大特性：①法規(guī)性：一旦批準(zhǔn)必須認(rèn)真執(zhí)行；②唯一性：一個(gè)檢驗(yàn)活動(dòng)只能有唯一的操作程序；③適用性：要符合實(shí)際，具有可操作性；SOP包含的內(nèi)容：5W+1H；SOP呈現(xiàn)方式：圖片+文字；,PCR實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量體系文件,檢測(cè)項(xiàng)目的性能驗(yàn)證；項(xiàng)目檢測(cè)的S

4、OP;儀器和設(shè)備的操作SOP；儀器和設(shè)備的維護(hù)SOP； 人員的技術(shù)檔案；各種記錄表格；,,表格記錄,,儀器設(shè)備的維護(hù)校準(zhǔn)SOP,日維護(hù)周維護(hù)定期維護(hù)劑量單位校準(zhǔn)廠家校準(zhǔn),人員的技術(shù)檔案記錄,一人一個(gè)檔案；個(gè)人基本情況；培訓(xùn)證和上崗證；論文、著作、成果等；培訓(xùn)考核記錄等；,儀器設(shè)備的技術(shù)檔案,一臺(tái)儀器一個(gè)檔案；儀器的基本情況；儀器的使用說明書；儀器校準(zhǔn)的記錄；維修維護(hù)的記錄等；,Next,室內(nèi)質(zhì)量控制,由實(shí)

5、驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度；旨在監(jiān)測(cè)和控制本實(shí)驗(yàn)室工作的精密度，提高本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作中批內(nèi)和批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測(cè)定工作的結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作；改善測(cè)定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，即對(duì)試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、核酸提取、測(cè)定方法和儀器操作寫出并嚴(yán)格執(zhí)行“標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）”。,室內(nèi)質(zhì)量控制,標(biāo)本采集、運(yùn)送和保存中的關(guān)鍵點(diǎn):容器——密閉、一次性、無菌、無核酸

6、酶及擴(kuò)增抑制物；采集方法——人員訓(xùn)練有素、防污染、保存時(shí)間和溫度；合格標(biāo)本——容器完整、量夠、時(shí)間符合要求、外觀符合要求、要猜到病原體等；,,第49-51頁,為客觀比較一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機(jī)構(gòu)，采取一定的辦法，連續(xù)和客觀地評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果具有可比性，這是對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作和實(shí)驗(yàn)方法的回顧性評(píng)價(jià)，而不是用來決定在實(shí)時(shí)的測(cè)定結(jié)果的可接受性。,室間質(zhì)量評(píng)價(jià),,室間質(zhì)評(píng)的檔案袋,

7、申請(qǐng)表；接收記錄；保存記錄；實(shí)驗(yàn)記錄；結(jié)果上報(bào)表；結(jié)果匯報(bào)表；分析和改進(jìn)內(nèi)容；,Next,質(zhì)控規(guī)則,質(zhì)控規(guī)則的功能：判斷測(cè)定批的失控還是在控；失控處理： 查出原因；采取措施；保證消除；不再出現(xiàn)；納入標(biāo)準(zhǔn)；,防止同樣的問題出現(xiàn)第二次是質(zhì)量管理的“精髓”。,符 號(hào) 定 義12S 一個(gè)質(zhì)控測(cè)定值超出±2s控制限。13S 一個(gè)質(zhì)控測(cè)定值超出

8、±3s控制限。22S 兩個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)超出+2s或－2s控制限。R4S 同一批測(cè)定中，兩個(gè)不同濃度質(zhì)控物的測(cè)定值之間的 差值超出4s控制限。41S 四個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)超出+1s或－1s控制限。7T 七個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值呈現(xiàn)一個(gè)向上或向下的趨勢(shì)變 化。10X 十個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)處于均值的同一側(cè)。,

9、質(zhì)控規(guī)則的符號(hào)及其定義,“即刻法”和Levey-Jennings質(zhì)控圖法“即刻法” 的實(shí)質(zhì)是一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，即Grubs異常值取舍法 ；只要有3個(gè)以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值的存在。Levey-Jennings質(zhì)控圖法：穩(wěn)定條件下，20個(gè)室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果不應(yīng)有多于1個(gè)結(jié)果超過2SD限度；在1000個(gè)測(cè)定結(jié)果中超過3SD的結(jié)果不多于3個(gè)。,質(zhì)控方法,“即刻法”,在剛開始進(jìn)行質(zhì)控時(shí)，可以采用“即刻法”進(jìn)行質(zhì)控，當(dāng)日常有效測(cè)定次數(shù)超過20次