臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)的設(shè)置質(zhì)量管理體系

1、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及質(zhì)量管理體系的建立,山東省臨床檢驗(yàn)中心 張炳昌,一.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置,依據(jù)：衛(wèi)生部頒發(fā)的《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號(hào)）,臨床標(biāo)本的接收,通常的工作流程：標(biāo)本采集 血清分離 編號(hào) 保存或檢測(cè)應(yīng)在四個(gè)測(cè)定區(qū)域之外的地方或區(qū)域內(nèi)接收 接收的標(biāo)本應(yīng)收集在原始容器中在核酸提取時(shí)帶入至標(biāo)本制備區(qū),,,,,,什么樣的臨床基因擴(kuò)增檢

2、驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室是最標(biāo)準(zhǔn)的？,,理想的PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置1,理想的PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置2,,,,,,臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的一般原則,各區(qū)獨(dú)立注意風(fēng)向人員流向物品流向,二.實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立,質(zhì)量手冊(cè)質(zhì)量體系程序文件標(biāo)準(zhǔn)操作程序 (相關(guān)記錄表格),質(zhì)量管理體系的建立,質(zhì)量手冊(cè)程序文件標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）,質(zhì)量手冊(cè),定義：闡明一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量方針，并描述其質(zhì)量體系的文件。其主要內(nèi)容包括目錄、批準(zhǔn)頁(yè)、前言、質(zhì)量方

3、針、組織結(jié)構(gòu)、人員職責(zé)、實(shí)驗(yàn)室設(shè)施環(huán)境、儀器設(shè)備、溯源性、檢驗(yàn)方法、標(biāo)本管理、記錄、報(bào)告等，是對(duì)上述各方面質(zhì)量管理的一般性描述。,程序文件,程序文件則是對(duì)通用于整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的某些方面工作的文件化描述。主要包括實(shí)驗(yàn)室文件和檔案等的管理、內(nèi)審、管理評(píng)審、人員培訓(xùn)、投訴處理、保密、計(jì)算機(jī)安全、新項(xiàng)目開(kāi)展、量值溯源、試劑儀器及實(shí)驗(yàn)用品的購(gòu)買、標(biāo)本管理、廢物處理等方面。,標(biāo)準(zhǔn)操作程序,SOP最為具體，最具有可操作性，也是使用頻率最高的文件，與實(shí)驗(yàn)

4、室的日常工作密切相關(guān)。常用SOP文件：儀器設(shè)備SOP文件，試驗(yàn)項(xiàng)目操作SOP文件，質(zhì)量、管理SOP文件等。如某個(gè)具體的項(xiàng)目臨床標(biāo)本的收集、處理、保存、檢測(cè)等，具體儀器的操作使用、校準(zhǔn)及維護(hù)等。SOP文件與程序文件之間的區(qū)別在于后者的原則性要強(qiáng)一些，針對(duì)的是一個(gè)系列或一個(gè)方面的工作。,臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)驗(yàn)收文件要求,臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)驗(yàn)收申請(qǐng)表后提出來(lái)的實(shí)驗(yàn)室所必須具有的程序文件，大部分是SOP ，少部分是程序文件，

5、對(duì)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量手冊(cè)沒(méi)作要求。,怎樣來(lái)編寫SOP 文件,這一點(diǎn)目前大部分實(shí)驗(yàn)室都覺(jué)得不知從何寫起，希望有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)模式。其實(shí)細(xì)細(xì)思考一下，你某一項(xiàng)檢驗(yàn)應(yīng)該怎樣做才能保證質(zhì)量，然后就將這些過(guò)程寫下來(lái)就可以了。其實(shí)這些SOP 文件究竟采用何種格式編寫并不重要，關(guān)鍵的是要具體，要具有可操作性，要讓既使是第一次接觸該SOP 的人也能按其完成相關(guān)操作。一定要有這樣一種觀念，即SOP 文件不是拿來(lái)給別人看的，而是拿來(lái)給自己實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員用的，一定要從實(shí)

6、際出發(fā)，做得到的才寫進(jìn)去，做不到的就不要寫進(jìn)去。,質(zhì)量管理,質(zhì)量管理不是表面文章，其精髓就是所有與實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量有關(guān)的環(huán)節(jié)全部要有章可循，并按章進(jìn)行。這即是對(duì)實(shí)驗(yàn)室實(shí)際操作技術(shù)人員的約束，同時(shí)也是對(duì)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人的約束，不能隨心所欲，比如說(shuō)儀器、試劑、消耗品的購(gòu)買，都必須按程序進(jìn)行。這是與我們傳統(tǒng)的平常只查考勤、查衛(wèi)生等到出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)再處罰個(gè)人的經(jīng)驗(yàn)管理模式所完全不同的，這個(gè)觀念和意識(shí)的轉(zhuǎn)變首先應(yīng)是實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，然后才是具體的實(shí)驗(yàn)操作人員。

7、,臨床PCR 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的特點(diǎn),（一）“無(wú)基因”概念 （二）實(shí)驗(yàn)室要有嚴(yán)格的人員進(jìn)入限制和程序（三）使用合格的試劑和消耗品,臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室相關(guān)記錄,臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室需要記錄的有臨床標(biāo)本接收中的患者個(gè)人有關(guān)資料（如姓名、性別、年齡等）、標(biāo)本接收日期、標(biāo)本特性、標(biāo)本的狀態(tài)、標(biāo)本的編號(hào)等；檢測(cè)前的儀器設(shè)備和試劑的準(zhǔn)備等；檢測(cè)中的試劑生產(chǎn)廠家、試劑批號(hào)、檢測(cè)日期、檢測(cè)結(jié)果、質(zhì)控結(jié)果及分析、檢測(cè)人（簽字）、質(zhì)檢人（簽字）等、

8、檢測(cè)后的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、儀器設(shè)備等的消毒和清潔、紫外線照射等。記錄要持之以恒。,質(zhì)量管理的內(nèi)涵,寫你所做的做你所寫的記錄你已做的分析你已做的質(zhì)量持續(xù)改進(jìn),,怎樣編寫SOP？,1.檢驗(yàn)項(xiàng)目SOP,應(yīng)根據(jù)申華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 編號(hào)WS/T 227-2002 “臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程編寫要求”編寫項(xiàng)目的SOP文件 原則上，每一收費(fèi)的檢驗(yàn)項(xiàng)目都應(yīng)有與之相應(yīng)的SOP文件，盡管某些項(xiàng)目SOP文件可

9、以簡(jiǎn)單一些,編寫中應(yīng)特別注意，要書寫： 1 拒收標(biāo)本的規(guī)定 2 質(zhì)控品使用水平和頻率，允許限的糾正措施 3 操作性能的概要。如：精密度、病人結(jié)果可報(bào)告范圍、方法學(xué)比較等。 4 對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果為病危報(bào)警值的處理,手冊(cè)必須由主任批準(zhǔn)，簽字和注明日期。 如果實(shí)驗(yàn)室改變領(lǐng)導(dǎo)，手冊(cè)須由現(xiàn)領(lǐng)導(dǎo)再批準(zhǔn)，簽字和注明日期。,,實(shí)驗(yàn)室必須保存停止使用的操作手冊(cè)副本，并保存到停止使用兩年后才能銷毀。,2.儀器設(shè)備的維護(hù)和校準(zhǔn)SOP,責(zé)任人維

10、護(hù)和校準(zhǔn)的基本方面：光路、濾光片、波長(zhǎng)、加熱模塊的清潔、具體的校準(zhǔn)點(diǎn)選擇（如加樣器的校準(zhǔn)體積點(diǎn)選擇、溫度計(jì)的校準(zhǔn)溫度點(diǎn)選擇等）、維護(hù)和校準(zhǔn)的具體方法包括用具 校準(zhǔn)合格的判斷標(biāo)準(zhǔn) 維護(hù)和校準(zhǔn)的間隔時(shí)間,儀器設(shè)備的操作 SOP,按照每臺(tái)儀器設(shè)備的使用說(shuō)明書，將其詳細(xì)操作步驟包括開(kāi)機(jī)關(guān)機(jī)次序、編程、調(diào)試、運(yùn)行、計(jì)算等按實(shí)際使用中的先后順序逐項(xiàng)列出，最后還應(yīng)有使用的注意事項(xiàng)。,儀器SOP文件,應(yīng)根據(jù)廠家提供的操作說(shuō)明書編寫適合實(shí)驗(yàn)室實(shí)際簡(jiǎn)明

11、扼要操作程序，大致有：開(kāi)關(guān)機(jī)程序.常規(guī)操作程序特殊(急診、復(fù)測(cè)、…)操作程序儀器維護(hù)程序其它,儀器每日保養(yǎng)記錄表,月保養(yǎng)記錄表,項(xiàng)目校準(zhǔn)程序和計(jì)劃,校準(zhǔn)對(duì)于檢驗(yàn)結(jié)果在規(guī)定的報(bào)告范圍內(nèi)的準(zhǔn)確和可靠是必要的。校準(zhǔn)是一個(gè)測(cè)試和調(diào)整儀器或者檢驗(yàn)系統(tǒng)，試劑盒的過(guò)程，以提供檢驗(yàn)反應(yīng)和所測(cè)物質(zhì)之間的準(zhǔn)確關(guān)系。用配套校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)是量值溯源開(kāi)始，廠家應(yīng)保證校準(zhǔn)品的最終溯源,校準(zhǔn)計(jì)劃,校準(zhǔn)計(jì)劃是指檢驗(yàn)項(xiàng)目的校準(zhǔn)頻度。每次校準(zhǔn)數(shù)據(jù)記錄表對(duì)

12、校準(zhǔn)數(shù)據(jù)變化的評(píng)估根據(jù)美國(guó)CLIA 88規(guī)定、還要對(duì)校準(zhǔn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證（Verification）。用一己知濃度樣品，稀釋成不同濃度，檢測(cè)后觀察所測(cè)濃度是否準(zhǔn)確，是否成線性。,儀器校準(zhǔn)記錄表,儀器校準(zhǔn)記錄表（2）,儀器工作的最基本的環(huán)境條件,保證儀器能準(zhǔn)確進(jìn)行工作的最基本的環(huán)境、客觀條件。如：溫度、濕度、UPS、光照度等。,實(shí)驗(yàn)室SOP要點(diǎn),,1.SOP文件基本格式,,2.實(shí)驗(yàn)室清潔SOP要點(diǎn),目的:為了使實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面和儀器設(shè)備在實(shí)

13、用后，處于潔凈和無(wú)污染性狀態(tài)，以防止出現(xiàn)因儀器設(shè)備不潔影響檢測(cè)結(jié)果或儀器使用壽命；防止因?qū)嶒?yàn)室臺(tái)面、地面和儀器設(shè)備的生物傳染危險(xiǎn)性造成實(shí)驗(yàn)室人員感染，以及防止實(shí)驗(yàn)室交叉污染而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果等。 適用范圍應(yīng)包括實(shí)驗(yàn)室地面、臺(tái)面和儀器設(shè)備等的清潔。 按實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面和儀器設(shè)備分開(kāi)來(lái)寫各自的具體清潔方法，要具體而又有可操作性 應(yīng)規(guī)定工作人員在清潔時(shí)，必須按試劑準(zhǔn)備區(qū)?標(biāo)本制備區(qū)?擴(kuò)增(及產(chǎn)物分析)區(qū)方向進(jìn)行，不得逆行 規(guī)定每一工作區(qū)

14、域的清潔必須使用專用的清潔用具，不得混用 規(guī)定有潛在生物傳染危險(xiǎn)性材料濺出時(shí)的消毒清潔方法,3.生物安全防護(hù)SOP要點(diǎn),明確規(guī)定實(shí)驗(yàn)室工作人員在進(jìn)行哪一類接觸到有潛在生物傳染危險(xiǎn)性的物品和材料時(shí)，應(yīng)使用哪類個(gè)體生物安全防護(hù)設(shè)備和用具 制定實(shí)驗(yàn)室內(nèi)銳器物品的使用規(guī)則 制定發(fā)生意外如手指劃破、血清濺入眼內(nèi)等情況下的處理程序 明確有潛在生物傳染危險(xiǎn)性的廢棄物（包括廢棄臨床標(biāo)本）拿出實(shí)驗(yàn)室前的消毒方法如高壓或化學(xué)消毒,4.臨床標(biāo)本的采集

15、、運(yùn)送、接收和保存 SOP要點(diǎn),特定標(biāo)本采集的具體方法步驟 明確規(guī)定標(biāo)本的采集容器要求 明確標(biāo)本的采集量 明確標(biāo)本采集后送到實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)所能容許的最大時(shí)間間隔，亦即標(biāo)本采集后，應(yīng)在多長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室 明確標(biāo)本采集后，在送至實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)前的保存方式和條件 明確標(biāo)本從采集處運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室過(guò)程中所要求的運(yùn)送條件 明確標(biāo)本接收時(shí)，簽收的程序、拒收的標(biāo)準(zhǔn)和標(biāo)本唯一編號(hào)的規(guī)則 規(guī)定標(biāo)本在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的短期（應(yīng)有具體時(shí)間）和長(zhǎng)期（應(yīng)有具體時(shí)間）

16、保存條件和要求 制定保證標(biāo)本安全存放措施,即如何防止標(biāo)本丟失、掉換、變質(zhì)的措施,5.試劑和消耗品的質(zhì)檢 SOP,試劑質(zhì)檢的基本方面，如試劑的抗干擾能力（主要是針對(duì)提取試劑），即對(duì)溶血、脂血標(biāo)本擴(kuò)增抑制作用的了解?？赏ㄟ^(guò)自行制備含已知量病毒核酸的不同程度溶血或脂血的標(biāo)本進(jìn)行質(zhì)檢。如為定量檢測(cè)試劑，還應(yīng)包括檢測(cè)的重復(fù)性、線性范圍等的質(zhì)檢，通常使用2-3份樣本進(jìn)行檢測(cè)即可。如為定性檢測(cè)試劑，則應(yīng)重點(diǎn)考察測(cè)定下限，可用系列稀釋的含已知量靶核酸

17、的血清標(biāo)本進(jìn)行 核酸提取用離心管質(zhì)檢的基本方面 帶濾心吸頭的質(zhì)檢主要是濾心的密封性,6.項(xiàng)目檢測(cè)、結(jié)果判斷、解釋和報(bào)告 SOP,標(biāo)本進(jìn)入實(shí)驗(yàn)程序后的操作編號(hào)方式 根據(jù)所用試劑盒確定的詳細(xì)操作流程 儀器編程及文件名的編寫規(guī)則 結(jié)果判讀的流程和規(guī)則 結(jié)果分析解釋的流程 結(jié)果報(bào)告流程,7.實(shí)驗(yàn)記錄及其管理 SOP,日常檢驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)記錄的基本內(nèi)容的規(guī)定，如儀器設(shè)備操作、維護(hù)和校準(zhǔn)過(guò)程及有關(guān)數(shù)據(jù)；檢驗(yàn)試劑來(lái)源和批號(hào)；檢驗(yàn)標(biāo)本的來(lái)源和

18、唯一編號(hào)；試劑的配制；實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件的控制記錄；實(shí)驗(yàn)室清潔的記錄；質(zhì)控的記錄；原始檢測(cè)數(shù)據(jù)及其推導(dǎo)記錄等 對(duì)實(shí)驗(yàn)記錄者的簽名方式的規(guī)定和要求 實(shí)驗(yàn)記錄管理的基本方面：指定專門的管理人；有專門的保存處如柜子等；記錄的登記歸檔方法；記錄的借閱及銷毀記錄；記錄保存的時(shí)間；電子記錄的備份保存具體方法及保存時(shí)間等,8.室內(nèi)質(zhì)量控制 SOP,明確室內(nèi)質(zhì)控物的來(lái)源及濃度 明確所選用的質(zhì)控方法 明確失控的判斷標(biāo)準(zhǔn)或所采用的失控規(guī)則 明確失控后的

19、分析及處理措施,9.參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià) SOP,明確規(guī)定室間質(zhì)評(píng)樣本的接收記錄方式、保存條件及實(shí)驗(yàn)編號(hào)規(guī)則 明確室間質(zhì)評(píng)樣本的檢測(cè)流程，要強(qiáng)調(diào)的是，室間質(zhì)評(píng)樣本應(yīng)以與臨床標(biāo)本相同的方式處理和檢測(cè) 明確室間質(zhì)評(píng)樣本的報(bào)告流程，即填寫、復(fù)核和簽發(fā)如何進(jìn)行，由誰(shuí)負(fù)責(zé) 明確對(duì)返回結(jié)果的分析流程和責(zé)任人 明確室間質(zhì)評(píng)檢測(cè)失敗的原因分析流程 明確如果測(cè)定準(zhǔn)確性出現(xiàn)問(wèn)題后，如何針對(duì)性采取措施的流程,10.投訴處理 SOP,明確投拆第一接觸人對(duì)

20、投拆的處理流程，即如何記錄、如何針對(duì)相關(guān)投訴的進(jìn)一步處理程序、是否需要報(bào)告和如何報(bào)告、以及如何向投拆人返回處理意見(jiàn)等?？蓪⑼恫鸱譃椴煌惾鐚?duì)檢驗(yàn)結(jié)果正確性、服務(wù)態(tài)度、報(bào)告單填寫錯(cuò)誤等分別編寫處理流程 投拆有效時(shí)的如何改進(jìn)和采取何種措施的具體流程。應(yīng)非常具體并具有可操作性,,臨床PCR檢驗(yàn)流程記錄表,臨床PCR檢驗(yàn)流程記錄表 檢驗(yàn)日期 檢驗(yàn)項(xiàng)目： 擴(kuò)增儀中保存文件名：

21、使用說(shuō)明：1．本記錄表須嚴(yán)格遵循試劑準(zhǔn)備區(qū)?標(biāo)本制備區(qū)?擴(kuò)增區(qū)（產(chǎn)物分析區(qū)）單一流向移動(dòng)，嚴(yán)禁逆向移動(dòng)。2．各項(xiàng)工作執(zhí)行后，在相應(yīng)敘述前的“?”內(nèi)打“?”。3．本記錄表最后與相應(yīng)的標(biāo)本接收記錄等歸檔保存于擴(kuò)增區(qū)的專用文件柜內(nèi)，以備查找。,實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備? 試劑在有效期內(nèi) ? 擴(kuò)增儀、加樣器和溫度計(jì)在校準(zhǔn)的有效期內(nèi)? 生物安全柜的濾膜在使用有效期內(nèi) ? 消毒溶液在有效期內(nèi)? 沖眼器內(nèi)無(wú)菌生理鹽水在有效期

22、內(nèi) ? 離心管、帶濾心吸頭已經(jīng)過(guò)質(zhì)檢合 操作者：,試劑準(zhǔn)備區(qū)（1區(qū)）實(shí)驗(yàn)前 ： ? 打開(kāi)通風(fēng)設(shè)備 ? 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面清潔（水或70%酒精擦拭）? 冰箱溫度：冷藏室（2~8℃） ℃；

23、 冷凍室（?20℃?1℃） ℃? 實(shí)驗(yàn)室溫度： ℃（允許范圍：10~30℃）；相對(duì)濕度： （允許范圍：30%~70%）PCR試劑來(lái)源： （可直接列出有關(guān)廠家名稱） 批號(hào)： 檢驗(yàn)項(xiàng)目： 本次實(shí)驗(yàn)用量： 人份，剩余量： 人份。其他有關(guān)試劑配制：? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制1%含氯

24、消毒液 毫升；? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制4％NaOH溶液 毫升；? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯 毫升；? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制 毫升；? 其他： 儀器設(shè)備使用：離心機(jī)：? 正常 ? 不正常

25、 振蕩器：? 正常 ? 不正常實(shí)驗(yàn)后：? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP清潔實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面、加樣器和離心機(jī)，并進(jìn)行紫外照射30分鐘以上。? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP處理實(shí)驗(yàn)廢棄物。 操作者：,標(biāo)本制備區(qū)（2區(qū)）實(shí)驗(yàn)前： ? 打開(kāi)通風(fēng)設(shè)備

26、 ? 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面清潔（水或70%酒精擦拭）? 冰箱（柜）溫度：冷藏室（2~8℃） ℃； 冷凍室（?20℃?1℃） ℃? 實(shí)驗(yàn)室溫度： ℃（允許范圍：10~30℃）；相對(duì)濕度： （允許范圍：30%~70%）陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控物來(lái)源： 濃度及批號(hào)： 擴(kuò)增位置： 陰性室內(nèi)質(zhì)控物來(lái)源： 批號(hào)：

27、 擴(kuò)增位置： 所取理的標(biāo)本（對(duì)應(yīng)標(biāo)本接收的唯一編號(hào)）及擬擴(kuò)增位置：1917252101826311192741220285132129614223071523318162432核酸提取及加樣過(guò)程：按XXX（列出編號(hào)）SOP進(jìn)行。儀器設(shè)備使用：

28、 生物安全柜：? 正常 ? 不正常 恒溫儀溫度校準(zhǔn)： ℃離心機(jī)：? 正常 ? 不正常 振蕩器：? 正常 ? 不正常實(shí)驗(yàn)后：? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP清潔實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面及儀器設(shè)備。? 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP處理實(shí)驗(yàn)廢棄物。

29、操作者：,,相關(guān)要點(diǎn)舉例,1.實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理,臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有充分合理的空間、良好的照明和空調(diào)設(shè)備 ；實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備應(yīng)保養(yǎng)良好，實(shí)驗(yàn)用品要達(dá)到相應(yīng)的要求。加樣器的校準(zhǔn)？帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢？離心機(jī)？熱循環(huán)儀？水浴箱和/或恒溫干浴儀？酶標(biāo)儀和洗板機(jī)？,2.基因擴(kuò)增儀器設(shè)備的質(zhì)控,3.帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢,首先制備一個(gè)含1～2%甘油及色素（如甲基橙）的水溶液，如果吸頭的最大體積為100μl，則將加樣器吸取體積調(diào)至

30、110～120μl，再套上吸頭后吸取上述有色液體。如果吸頭質(zhì)量好，則有色液體不應(yīng)出現(xiàn)在濾塞之上，否則說(shuō)明濾塞不嚴(yán)。,3.帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢,用實(shí)驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)帶濾塞吸頭的質(zhì)量：先純化制備數(shù)份強(qiáng)陽(yáng)性和數(shù)份陰性核酸標(biāo)本，然后將加樣器吸取量設(shè)至擴(kuò)增加樣所需的體積，使用待評(píng)價(jià)帶濾塞吸頭對(duì)一份強(qiáng)陽(yáng)性樣本來(lái)回吸取10次（模擬10份陽(yáng)性樣本的吸?。瑢⒆詈笠淮蔚奈∫杭又烈缓瑪U(kuò)增反應(yīng)液的管中。之后，換一個(gè)新吸頭，連續(xù)吸取10份陰性樣本分別至10個(gè)擴(kuò)增反

31、應(yīng)管中，此過(guò)程重復(fù)3～5次，最后對(duì)每一管按所用試劑方法進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)。強(qiáng)陽(yáng)性樣本應(yīng)為強(qiáng)陽(yáng)性，陽(yáng)性弱或出現(xiàn)陰性則說(shuō)明吸頭可能含有擴(kuò)增抑制物。所有陰性樣本應(yīng)為陰性，出現(xiàn)陽(yáng)性則表明吸頭不能有效地防止氣溶膠對(duì)加樣器的污染。,4.擴(kuò)增儀孔間溫度的重復(fù)性和均一性的檢測(cè)方法,一是使用一種熱電偶探針、微伏轉(zhuǎn)換器和自動(dòng)圖示記錄儀組成擴(kuò)增加熱模塊孔內(nèi)溫度監(jiān)測(cè)記錄系統(tǒng)，當(dāng)孔間溫度變異超出1℃時(shí)，其可測(cè)出來(lái)。具體做法是將裝有TE緩沖液并上加石蠟油的擴(kuò)增反應(yīng)管放

32、置于擴(kuò)增儀各孔中，熱電偶探針透過(guò)擴(kuò)增反應(yīng)管蓋插至緩沖液中，然后按程序進(jìn)行一個(gè)常規(guī)的PCR擴(kuò)增，加熱模塊如為96孔，則至少要測(cè)定12孔不同位置孔內(nèi)的溫度，在整個(gè)擴(kuò)增過(guò)程中，可移動(dòng)熱電偶探針至上述不同孔中監(jiān)測(cè)溫度，但每一孔內(nèi)溫度監(jiān)測(cè)至少要有一個(gè)擴(kuò)增周期。,擴(kuò)增儀孔間溫度的重復(fù)性和均一性的檢測(cè)方法,第二種方法并非直接測(cè)定孔內(nèi)溫度，而是通過(guò)擴(kuò)增功能來(lái)間接獲知孔間的均一性，即將加有一已知的含一定濃度的陽(yáng)性質(zhì)控樣本的擴(kuò)增反應(yīng)管置于擴(kuò)增儀各孔中按常規(guī)

33、進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，觀察結(jié)果的一致性程度，如果有某一個(gè)或幾個(gè)孔結(jié)果有問(wèn)題，則應(yīng)確定這一個(gè)或幾個(gè)孔是否會(huì)重復(fù)性地得到假陰性結(jié)果，如果是，則表明相應(yīng)孔的熱傳導(dǎo)有損壞。,5.理想的試劑和操作方法,改善測(cè)定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，應(yīng)對(duì)試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本收集、核酸提取、測(cè)定方法和儀器操作寫出“標(biāo)準(zhǔn)操作程序”(SOP) ，并嚴(yán)格按其操作。,試劑準(zhǔn)備區(qū)：試劑質(zhì)檢報(bào)告 (1),試劑名稱 產(chǎn)地

34、 批號(hào) 有效期 規(guī)格 數(shù)量 1 收到試劑后，目測(cè)試劑是否處于凍存狀態(tài)： 是 □ 否 □2 核對(duì)試劑的品種和數(shù)量： 無(wú)誤 □ 有誤 □3 核對(duì)完后及時(shí)轉(zhuǎn)入-18℃的冰箱保存： 是□ 否 □4 在上批試劑存量尚可維持一周時(shí)對(duì)新批號(hào)試劑進(jìn)行較驗(yàn)實(shí)驗(yàn)：是 □

35、否□5 校驗(yàn)實(shí)驗(yàn)設(shè)置：空白對(duì)照，陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照各一，梯度陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品4個(gè)，再加一質(zhì)控血清 新舊試劑的對(duì)比實(shí)驗(yàn)（各做5個(gè)管的室內(nèi)控制品）,試劑準(zhǔn)備區(qū)：試劑質(zhì)檢報(bào)告(2),6 校驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：A 空白對(duì)照有無(wú)擴(kuò)增 有 □ 無(wú) □ B 陽(yáng)性對(duì)照有無(wú)檢出 有 □ 無(wú) □

36、 C 陰性對(duì)照有無(wú)擴(kuò)增 有 □ 無(wú) □ D 相關(guān)性大于 0.98 是 □ 否 □ E 斜率在 -3.6—4.4之間 是 □ 否 □ F 截距在30- 54之間 是 □ 否 □ J 新舊試劑對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果

37、 舊試劑值 新試劑值 用t檢驗(yàn) t = 批間有無(wú)差異： 有 □ 無(wú) □ 7 最終判斷試

38、劑是否合格： 合格 □ 不合格 □質(zhì)檢結(jié)論：本批次試劑： 符合質(zhì)檢要求□ 不符合質(zhì)檢要求□ 可以使用 □ 不可以使用 □ 驗(yàn)收時(shí)間 驗(yàn)收人 主任審閱核,試劑準(zhǔn)備區(qū)：實(shí)驗(yàn)耗材質(zhì)檢報(bào)告(1),耗材名稱 產(chǎn)地 批號(hào)

39、 有效期 規(guī)格 數(shù)量 1 收到耗材后，外包裝檢查：a 包裝完好無(wú)損： 是□ 否□b 產(chǎn)品標(biāo)識(shí)，批準(zhǔn)文號(hào)，生產(chǎn)日期有效期清楚： 是□ 否□2 內(nèi)包裝檢查：a 內(nèi)包裝是否有破損，泄漏： 是□ 否□b 內(nèi)容物是否齊全（型

40、號(hào)、數(shù)量、使用說(shuō)明書等） 是□ 否□,試劑準(zhǔn)備區(qū)：實(shí)驗(yàn)耗材質(zhì)檢報(bào)告(2),3 性能檢查：A. 離心管的核酸抑制物檢測(cè)，方法：分別取5個(gè)新批次的離心管和舊批次的離心管做室內(nèi)質(zhì)控物的檢測(cè)，同時(shí)做各做一個(gè)陰性對(duì)照。B.Tip頭的核酸抑制物的檢測(cè)，方法：分別取5個(gè)新批次Tip頭和舊批次Tip頭做室內(nèi)質(zhì)控物的檢測(cè)，同時(shí)做各做一個(gè)陰性對(duì)照。C. 新舊批次對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果 舊批次值

41、 新批次值 用t檢驗(yàn) t = 批間有無(wú)差異： 有 □ 無(wú) □ 7 最終判斷試劑是否合格： 合格 □ 不合格 □ 質(zhì)檢結(jié)論：本批次試劑： 符合質(zhì)檢要求□ 不符合質(zhì)檢要求□

42、 可以使用 □ 不可以使用 □ 驗(yàn)收時(shí)間 驗(yàn)收人 主任審閱核,,人員培訓(xùn),臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的操作主要是標(biāo)本處理中的核酸提取步驟，這其中所涉及的又主要是加樣器的使用，盡管操作簡(jiǎn)單，但由于均為微量操作，要獲得穩(wěn)定可靠的測(cè)定結(jié)果，操作人員需要一定的專業(yè)技術(shù)知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)，要盡可能做到知其然又知其所以然。,實(shí)驗(yàn)室的日常

43、工作管理,工 作 項(xiàng) 目 核 查 點(diǎn)水浴箱、微量恒溫器（加熱模塊） □校準(zhǔn)及記錄溫度 次氯酸鈉溶液 □新鮮配制生物安全柜 □先起動(dòng)運(yùn)行30分鐘后

44、再開(kāi)始工作 室內(nèi)質(zhì)控 弱陽(yáng)性質(zhì)控（定性） □有 低、中、高濃度質(zhì)控（定量） □有 陰性質(zhì)控：原樣本 □有 經(jīng)歷提取過(guò)程的空管 □有 僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液管

45、 □有實(shí)驗(yàn)臺(tái)面 □使用后用次氯酸鈉溶液消毒， 再用70%乙醇清潔

46、 □紫外照射加樣器、離心機(jī) □使用后用次氯酸鈉溶液消毒， 再用70%乙醇清潔實(shí)驗(yàn)室各區(qū)

47、 □遵循單一工作流向 □紫外照射,分析你已做的,每次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析 表象與真象多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的綜合分析 趨勢(shì)的內(nèi)在含義儀器設(shè)備的使用情況分析 維護(hù)與校準(zhǔn)周期的有效性,三.技術(shù)驗(yàn)收,依據(jù)：《臨床檢驗(yàn)擴(kuò)增檢驗(yàn)

48、實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》 衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號(hào)《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》 衛(wèi)檢字2002第8號(hào),技術(shù)驗(yàn)收內(nèi)容,實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和設(shè)備設(shè)施和環(huán)境人員設(shè)備管理檢測(cè)方法標(biāo)本管理記錄報(bào)告質(zhì)量控制抱怨 等十章共三十八條,實(shí)驗(yàn)

49、室設(shè)置和設(shè)備,本章共七條。 實(shí)驗(yàn)室分區(qū)：規(guī)范化分區(qū)、明確的識(shí)別標(biāo)記防污染：空氣流向、中央空調(diào)、各區(qū)間的封閉性各區(qū)儀器設(shè)備物品配備：充分性、科學(xué)性、專用性（標(biāo)識(shí)） “生物安全柜” “可移動(dòng)紫外燈” “加樣器”,設(shè)施和環(huán)境,本章包括五條；實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、工作區(qū)域、能源、照明等；環(huán)境和實(shí)驗(yàn)條件控制設(shè)施：溫濕度計(jì)、不間斷或穩(wěn)壓電源等；實(shí)驗(yàn)室進(jìn)出的限制和控制：人員進(jìn)入控制標(biāo)識(shí)、生物傳染危險(xiǎn)性標(biāo)識(shí)實(shí)驗(yàn)室“內(nèi)務(wù)管理”（如人

50、員流動(dòng)、清潔等）制度和相應(yīng)設(shè)施；廢棄血清處理、生物防護(hù)等措施和相應(yīng)設(shè)施,設(shè)施和環(huán)境需注意的問(wèn)題,清潔程序或制度 清潔用具的專用、清潔工作的單一流向、清潔方法的具體性生物防護(hù)及廢棄血清處理 對(duì)工作人員的保護(hù)和對(duì)環(huán)境的保護(hù) 銳器使用規(guī)則 生物傳染危險(xiǎn)性廢棄物出實(shí)驗(yàn)室前預(yù)處理,人 員,本章包括三條。人員數(shù)量足夠；有培訓(xùn)上崗證培訓(xùn)計(jì)劃：室內(nèi)的定期培訓(xùn)（記錄）人員技術(shù)（資格、培訓(xùn)、技能）檔案。,設(shè)備管理（1）,本

51、章包括三條。主要儀器設(shè)備應(yīng)得到正確維護(hù)，應(yīng)有設(shè)備維護(hù)程序文件；以及維護(hù)的記錄加樣器、溫度計(jì)、擴(kuò)增儀和酶標(biāo)儀等設(shè)備應(yīng)有校準(zhǔn)程序文件、有明顯標(biāo)識(shí)表明其校準(zhǔn)狀態(tài)（此次校準(zhǔn)時(shí)間及下次應(yīng)校準(zhǔn)時(shí)間）；實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保存每一臺(tái)儀器設(shè)備的檔案材料，對(duì)檔案材料的具體內(nèi)容作了詳細(xì)規(guī)定。,設(shè)備和質(zhì)控物（2）,每一臺(tái)設(shè)備的檔案內(nèi)容包括： （a）設(shè)備名稱；（b）制造商名稱、型號(hào)、序號(hào)等；（c）接收日期和啟用日期；（d）目前放置地點(diǎn)；（e）接收時(shí)的狀態(tài)；（

52、f）儀器使用說(shuō)明書有復(fù)印件；（g）校準(zhǔn)和/或檢定的日期和結(jié)果及下次校準(zhǔn)和/或檢定的日期；（h）迄今所進(jìn)行的維護(hù)和今后維護(hù)計(jì)劃的細(xì)節(jié)；（i）損壞、故障、改裝或修理的歷史。,檢 測(cè) 方 法,本章包括三條。標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）：儀器設(shè)備操作和校準(zhǔn)程序；標(biāo)本收集處理程序；擴(kuò)增檢測(cè)工作程序；儀器試劑的選購(gòu)和質(zhì)檢程序；消耗性材料的購(gòu)買、驗(yàn)收、質(zhì)檢和貯存程序。SOP應(yīng)現(xiàn)行有效及便于使用。,標(biāo) 本 管 理,本章包括五條。建立唯一編號(hào)識(shí)別系統(tǒng)，避

53、免標(biāo)本混淆；標(biāo)本采集、運(yùn)送和保存程序；標(biāo)本接收時(shí)的狀態(tài)記錄；標(biāo)本的適用性和充分性；標(biāo)本貯存的標(biāo)準(zhǔn)操作程序及貯存溫度控制措施;標(biāo)本接收及安全處置程序；維護(hù)實(shí)驗(yàn)室誠(chéng)實(shí)性的必要措施。,記 錄,本章包括三條。有記錄管理制度：適合自身實(shí)際情況，符合現(xiàn)行規(guī)章制度；（由誰(shuí)管、在何處管、保存多長(zhǎng)時(shí)間）原始記錄、計(jì)算和導(dǎo)出數(shù)據(jù)應(yīng)歸檔并保存；記錄應(yīng)有有關(guān)人員的簽字；所有記錄和報(bào)告都要妥善保管并保密。,報(bào) 告,檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告應(yīng)準(zhǔn)

54、確、清晰和客觀；定性測(cè)定報(bào)告“陰性”或“陽(yáng)性”；定量測(cè)定則以拷貝數(shù)/ml或IU/ ml報(bào)告；避免二者之間的混淆；每份報(bào)告應(yīng)包括以下信息：標(biāo)題、唯一標(biāo)識(shí)、檢測(cè)標(biāo)本說(shuō)明、標(biāo)本特性和狀態(tài)、標(biāo)本接收日期和檢測(cè)日期、檢測(cè)方法、檢測(cè)和校核人員簽字及發(fā)出日期、參考結(jié)果或范圍；如對(duì)報(bào)告有效性有疑問(wèn)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)立即通知臨床相關(guān)科室予以改正的程序；有報(bào)告的發(fā)放程序：用電話、傳真、電子郵件報(bào)告結(jié)果時(shí)的保密原則。,質(zhì) 量 控 制,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)

55、準(zhǔn)操作程序 質(zhì)控物來(lái)源、濃度、批號(hào) 陰性質(zhì)控的設(shè)置 所選擇的統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法（均值、SD如何得到的） 失控的判斷標(biāo)準(zhǔn) 失控以后怎么辦 質(zhì)量持續(xù)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。,抱 怨,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定抱怨及其處理的SOP； 可操作性、不同抱怨的處理如抱怨涉及到工作是否符合現(xiàn)行程序，或是否符合管理辦法和工作規(guī)范，或?qū)?shí)驗(yàn)室校準(zhǔn)及檢測(cè)質(zhì)量有疑問(wèn)時(shí)，則實(shí)驗(yàn)室應(yīng)立即對(duì)這些范圍的工作和有關(guān)職責(zé)進(jìn)行審核。,技術(shù)

56、驗(yàn)收的其它內(nèi)容,就有關(guān)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理方面與具體工作有關(guān)的內(nèi)容進(jìn)行口試和/或筆試；已知HBV DNA和/或HCV RNA血清盤的實(shí)際檢測(cè)和結(jié)果報(bào)告。,技術(shù)驗(yàn)收表的修改及驗(yàn)收細(xì)節(jié),2002年11月和2003年1月在北京兩次專家討論會(huì),文件審核,文件是否都有文件的可操作性文件的現(xiàn)行有效,現(xiàn)場(chǎng)考試,口試或筆試內(nèi)容：舉在其工作中有可能遇到的實(shí)例，考察是否能應(yīng)用所制定的程序進(jìn)行應(yīng)對(duì)例子： 一. 現(xiàn)有一個(gè)患者向你提出：“我在你們醫(yī)

57、院檢測(cè)HBV DNA為陽(yáng)性，但在另一家醫(yī)院檢測(cè)為陰性，你們醫(yī)院是怎么做的檢測(cè)？”，此時(shí)，你怎么辦？（該題主要是考實(shí)驗(yàn)室人員是否知道并遵守所制定的抱怨處理程序）,現(xiàn)場(chǎng)考試,二．現(xiàn)有一人打電話到科室，說(shuō)：“我孩子在你們醫(yī)院做了一項(xiàng)丙肝的PCR檢測(cè)，名字叫XXX，請(qǐng)你告訴我檢測(cè)結(jié)果好嗎？”。如果是你剛好接了這個(gè)電話，你會(huì)怎樣去做？（該題考的是實(shí)驗(yàn)室人員在患者要求以電子郵件、電話、傳真等方式傳遞報(bào)告時(shí)，是否能按相應(yīng)的程序去做）,現(xiàn)場(chǎng)考試,三

58、．現(xiàn)有一個(gè)臨床大夫拿著幾張HBV DNA定量PCR檢驗(yàn)報(bào)告單找到PCR實(shí)驗(yàn)室，說(shuō)：“你們的PCR結(jié)果到底準(zhǔn)不準(zhǔn)，我這個(gè)病人剛開(kāi)始檢測(cè)，HBV DNA是5×107拷貝數(shù)/ml，用了拉米呋啶治療后二周，再檢測(cè)結(jié)果為3×107拷貝數(shù)/ml，降了不少，但再過(guò)二周檢測(cè)，又變成了6×107拷貝數(shù)/ml，升高不少，這到底是怎么回事？”，如果這個(gè)大夫剛好問(wèn)的是你，你怎么辦？并如何解釋其提出的問(wèn)題？(該題除了考實(shí)驗(yàn)室人員是

59、否知道并遵守所制定的抱怨處理程序外，還要求其對(duì)特定PCR檢驗(yàn)的批間變異有充分的認(rèn)識(shí)),現(xiàn)場(chǎng)考試,四．現(xiàn)有你科室同事，拿了一份血清標(biāo)本給你，說(shuō)：“這是我一個(gè)熟人的標(biāo)本，他要做HCV RNA檢測(cè)，剛好他還做生化和免疫檢測(cè)，我從生化標(biāo)本分了一些出來(lái)，給你做HCV RNA?！蹦阌X(jué)得這樣行嗎？為什么？（該題主要是考實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)有關(guān)標(biāo)本的收集程序是否清楚并遵守）,現(xiàn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn),目的：考核實(shí)驗(yàn)室是否按所制定的規(guī)程進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果是否與預(yù)期相符只是