糞便檢驗 (keyonh)

1、糞 便 檢 驗 第八組,糞便檢查主要用于協(xié)助診斷消化道疾?。?、腸道感染性疾??；2、腸道寄生蟲感染；3、消化道出血鑒別與腫瘤篩檢；4、了解胃腸道消化、吸收功能；5、黃疸的鑒別診斷。,糞便成分主要有：1、未被消化的食物殘渣；2、已被消化但未被吸收的食糜；3、消化道分泌物；4、分解產(chǎn)物；5、腸壁脫落的上皮細胞；6、細菌，如大腸埃希氏菌、腸球菌 和一些過路菌；,第一節(jié) 標本采集和處理,一、標本容器

2、 盛標本的容器應清潔、干燥、有蓋、無吸水和滲漏。細菌學檢查，糞便標本應采集于滅菌、有蓋的容器內(nèi)。,二、標本采集標本新鮮，盛器清潔、干燥。選取有病理意義的標本，多點取樣。及時檢測，標本采集后于1小時內(nèi)檢測 完畢。,寄生蟲檢測應多次取樣，并注意取樣方式。阿米巴滋養(yǎng)體等原蟲檢測，應及時、保溫送 檢。糞便隱血檢測應于試驗前素食三天，并禁服 鐵劑、及維生素。,第二節(jié) 理學檢查,1、糞便量2、糞便外觀

3、顏色：正常人糞便呈黃褐色，嬰 兒糞便呈黃綠色或金黃色糊狀。 常見顏色的改變見下表：,性狀：正常人糞便為成形軟便，嬰兒為糊狀便。病理狀態(tài)時，糞便性狀可發(fā)生改變。,（1）稀糊狀或稀汁樣便：常因細菌腸毒素、內(nèi)源性促分泌物質(zhì)、致瀉物質(zhì)等物質(zhì)刺激腸道，導致腸蠕動亢進或腸液分泌增多所致。多見于各種感染和非感染性腹瀉，尤其是急性胃腸炎。 （2）膿性及膿血便：常見于下消化道病變、各種腸炎、痢疾、急性血吸蟲病，結(jié)腸或直腸癌，慢性潰

4、瘍性結(jié)腸炎、腸結(jié)核。 （3）米苷樣便：呈白色陶米水樣，多見于霍亂、副霍亂，為白色淘米水樣。,,（4）柏油樣便：因上消化道出血所致，隱血試驗強陽性。 （5）白陶土樣便：主要見于阻塞性黃疸及鋇餐造影術后。 （6）鮮血便：見于直腸息肉，結(jié)腸癌、肛裂、痔瘡。 （7）胨狀便：見于慢性菌痢及過敏性腸炎。,（8）黏液便：粘液混勻于糞便中，見于小腸病變；粘液非混勻于糞便中且較集中，見于大腸病變；粘液粘附于糞便表面，常見于直腸炎；透明膠凍樣粘

5、液附于糞便表面時，見于粘液性腸炎、痙孿性便秘、情緒激動等。,3、寄生蟲蟲體 糞便中如有蟲體較大的腸道寄生蟲蠕蟲，如蛔蟲、蟯蟲、絳蟲等或其片段，肉眼可見。鉤蟲蟲體需篩洗糞便后才見。,4、氣味 糞便的臭味與進食的種類，疾病的性質(zhì)有關。 病理情況：糞便惡臭一般見于慢性腸炎、胰腺疾病、消化道大出血、結(jié)腸或直腸癌；糞便魚腥臭味見于阿米巴性腸炎；糞便酸臭味見于消化、吸收不良。,第三節(jié) 顯微鏡檢查及其臨床意義,顯微鏡檢查內(nèi)容主要包括寄生

6、蟲蟲卵、原蟲、細胞、真菌、結(jié)晶、食物殘渣等。,（二）糞便中各有形成分的形態(tài)和意義 1、細胞1）紅細胞：正常糞便無紅細胞。上消化道出血時，紅細胞被破壞，糞便中難以見到。下消化道炎癥或出血時可出現(xiàn)數(shù)量不等的紅細胞，如痢疾、潰瘍性結(jié)腸炎、結(jié)腸癌、直腸息肉、痔瘡、急性血吸蟲病等。,消化道疾病時由于炎病損傷出血，白細胞、紅細胞同時存在。細菌性痢疾時紅細胞少于白細胞，多分散存在且形態(tài)正常；阿米巴痢疾者紅細胞多于白細胞，多粘連成堆存在并有殘碎

7、現(xiàn)象。,2）白細胞（膿細胞） 糞便中的白細胞常見中性粒細胞。病理情況下，中性粒細胞呈灰白色，胞體腫脹、壞死、破碎、結(jié)構(gòu)不完整，胞質(zhì)內(nèi)充滿細小的顆粒，核不清楚的中性粒細胞，常成堆出現(xiàn)，此時稱為“膿細胞”,正常糞便，無或偶見白細胞。結(jié)腸炎，白細胞分散存在，一般少于15個/HFP；細菌性痢疾、潰瘍性結(jié)腸炎時，可見大量的白細胞或成堆出現(xiàn)的膿細胞以及吞有異物的小吞噬細胞；腸易激綜合癥、腸道寄生蟲病時可見較多的嗜酸性粒細胞，可伴有夏科-萊登結(jié)

8、晶。,3）巨噬細胞：常隨膿細胞出現(xiàn)于急性菌痢的糞便中，潰瘍性結(jié)腸炎時，亦可偶見。 4）腸黏膜上皮細胞：見于結(jié)腸炎癥、偽膜性腸炎。5）腫瘤細胞：乙狀結(jié)腸癌、直腸癌病人的血性糞便，及時涂片染色（瑞氏或HE染色）可找到成堆體積大，形態(tài)異常的腫瘤細胞。,2、寄生蟲卵、原蟲、滴蟲①寄生蟲卵：糞便中檢查寄生蟲卵是診斷腸道寄生蟲感染的最常用的指標。 糞便中常見的寄生蟲卵有：蛔蟲卵、鉤蟲卵、鞭蟲卵、蟯蟲卵、華枝睪吸蟲卵、血吸蟲卵、姜片蟲卵和帶絳

9、蟲卵等。②原蟲和滴蟲：腸寄生原蟲包括阿米巴原蟲、隱孢子蟲、鞭毛蟲、纖毛蟲和人芽囊原蟲等。,3、結(jié)晶糞便中檢出夏科-雷登結(jié)晶，主要見于阿米巴痢疾、鉤蟲病以及過敏性腸炎，并同時見到嗜酸性粒細胞。4、食物殘渣 在正常糞便中，食物殘渣均系已充分消化后的無定形細小顆粒。未經(jīng)充分消化的食物殘渣，常見的有以下幾種： ①脂肪小滴②淀粉顆粒③肌肉纖維④結(jié)締組織⑤植物纖維及植物細胞,第四節(jié) 化學檢查及其臨床意義,一、隱血試驗 概念

10、：隱血是指上消化道有少量出血時（每日出血量少于5ml），而且紅細胞因被消化分解,肉眼不見糞便改變顏色，并且糞便涂片顯微檢查未能檢出紅細胞。而需用其他間接方法才能證實的出血。 隱血試驗的方法有化學法和免疫法兩種 。,1、化學法隱血試驗（OBT）試驗原理：血紅蛋白中含鐵血紅素具有過氧化物酶的活性，能分解過氧化物，催化色原物質(zhì)而呈色，呈色的深淺反映了血紅蛋白的含量，即出血量的多少。常用方法：主要有鄰聯(lián)甲苯胺法，聯(lián)苯胺法，匹拉米洞法，愈創(chuàng)

11、木酯法等。,假陽性情況：如外源性干擾；假陰性情況：如外源性與內(nèi)源性干擾,聯(lián)苯胺法【原 理】 于糞便內(nèi)加入易被氧化的物質(zhì)（聯(lián)苯胺等）及放氧的物質(zhì)（H2O2）,經(jīng)糞便內(nèi)血液的作用（血色素中的鐵卟啉環(huán)有過氧化酶作用）分解過氧化氫放出O2-，使聯(lián)苯胺被氧化而致顏色?！緳z查方法、結(jié)果及優(yōu)缺點】 1.方法 聯(lián)苯胺法 無色孔雀綠法 單克隆抗體OB試驗 取聯(lián)苯胺粉少許置

12、于玻片上，滴加冰醋酸 2-3滴，再加3% H2O2 2滴，取糞便少許與 以上試劑混勻，觀察結(jié)果。,,2、免疫法隱血試驗原理：該試驗所有的抗體可分為兩類，一種為抗人血紅蛋白抗體，另一種為抗人紅細胞基質(zhì)抗體。常用方法有免疫單擴法、對流免疫電泳、免疫擴散法、酶聯(lián)免疫吸附試驗、反向間接血凝法等。,免疫法不必控制飲食，且敏感性和特異 性都高于化學法。假陽性情況：高靈敏度可造成假陽性， 故不宜用于日常篩檢。假陰性情

13、況：主要檢測下消化道出血， 以及帶現(xiàn)象。,臨床意義：糞便隱血試驗主要用于消化道出血、消化道腫瘤的篩檢和鑒別。隱血陽性： 1、見于消化道出血、藥物致胃粘膜損傷（如服用阿司匹林、糖皮質(zhì)激素）、腸結(jié)核、克羅思病、胃?。ㄎ笣儭⑽秆祝?、潰瘍性結(jié)腸炎、結(jié)腸息肉、鉤蟲病及腎病綜合癥出血熱、消化道惡性腫瘤等。,2、消化性潰瘍與腫瘤出血的鑒別：隱血試驗對消化道潰瘍的陽性診斷率為40-70％，呈間斷性陽性；而消化道惡性腫瘤診斷陽性率可達95％，

14、且呈持續(xù)性陽性。,第五節(jié) 糞便的細菌學檢查,正常人的腸道中棲居大量的不同種類的微生物，組成人類健康極為重要的體內(nèi)微生態(tài)環(huán)境——參與營養(yǎng)、消化、吸收及清潔腸道，維護健康的作用。腹瀉因病原菌或病毒在在腸道繁殖引發(fā)，引起 腹瀉細菌種類多。本實驗主要介紹疑為沙門菌或志賀菌屬感染者 或帶菌者的糞便標本（或直腸拭子）中致病菌 的分離和鑒定。,,由于腸道中存在大腸埃希菌等很多條件致病菌，其與腸道致病菌的主要區(qū)別之一

15、是：大多數(shù)條件致病菌可分解乳糖，而絕大多數(shù)腸道致病菌則不分解乳糖。分離腸道致病菌多用含乳糖的弱選擇性鑒別培養(yǎng)液（如麥康凱瓊脂等）以及對大腸埃希菌等條件致病菌有較強抑制作用、而又有利于腸道某些致病菌（如沙門菌及志賀菌屬）生長繁殖的強選擇性鑒別培養(yǎng)液。,,糞便標本常見的病原菌：■G＋菌：葡萄球菌屬、白色假絲酵母菌、艱難梭菌、結(jié)核分枝桿菌、蠟樣芽孢桿菌■G－菌：志賀菌、沙門菌、致病性大腸埃希菌、霍亂弧菌、親水氣單胞菌、類志賀鄰單胞菌

16、、彎曲菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌,試劑與器材,菌株：傷寒沙門菌 培養(yǎng)基：麥康凱和SS瓊脂平板 各種生化反應培養(yǎng)液及革蘭氏染液等試劑（可參見微生物的自動分析及附錄） 沙門菌多價“O”（A-F組）及單價“O”診斷血清、“H”因子診斷血清,標本的采集,由于糞便中細菌種類很多，故應根據(jù)檢查目的的不同選擇適宜的培養(yǎng)液或用適當方法處理，盡可能地抑制雜菌，以利于病原菌的檢出。不能認為糞便中細菌含量多，糞便標本的采集就無須無菌操作。糞便標本

17、的采集也應遵循無菌操作的原則。若便器或標本容器不潔而污染了變形桿菌，就可能影響病原菌的分離檢出，甚至把污染菌誤報，造成誤診。,標本的采集,采樣的時期應合適。疑似痢疾患者應在發(fā)病初期、用藥前采取標本。糞便標本采集時應挑取無尿液污染的有膿血、黏液部分的糞便2—3g（液狀糞便可挑取絮狀物），盛于無菌容器內(nèi)送檢。在無法獲得糞便時，可采用直腸拭子，即用滅菌棉拭子經(jīng)0.9%氯化鈉溶液或增菌培養(yǎng)液濕潤后，插入肛門內(nèi))4—5cm處，輕輕轉(zhuǎn)動一圈后取出

18、，插入無菌試管（Cary Blair系統(tǒng)運送管）或保存液中送檢；疑似傷寒患者應在發(fā)病2—3周內(nèi)采集糞便標本。,標本的采集,在無法獲得糞便時，可采用直腸拭子，即用滅菌棉拭子經(jīng)0.9%氯化鈉溶液或增菌培養(yǎng)液濕潤后，插入肛門內(nèi))4—5cm處，輕輕轉(zhuǎn)動一圈后取出，插入無菌試管（Cary Blair，卡—布系統(tǒng)運送管）或保存液中送檢；應采集可疑糞便，如立即患者粘液膿血便、霍亂患者的米泔水樣便等。以為換亂患者，硬質(zhì)堿性蛋白胨水中。除嬰幼兒外，

19、不推薦用棉拭子做常規(guī)病原菌培養(yǎng)。糞便標本如不能立即送檢，可將標本放入甘油鹽水保存液中，或保存于冰箱內(nèi)（勿超過2小時）。,糞便標本的細菌學檢驗程序,糞便標本或肛拭子道標本,涂片,增菌培養(yǎng),直接分離,,,,,,,報告,,革蘭染色；動力學觀察與制動試驗（KIA、MIU）,初步報告,,,,需氧培養(yǎng),,,,,GN增菌液或亞硒酸增菌液,堿性蛋白胨,,TCBS平板或其它堿性平板分離,,,SS平板MAC平板EMB平板,,,,,副溶血性弧菌選擇平板,菌

20、落形態(tài)生化反應,菌落形態(tài)、生化反應、抗血清凝集藥敏,,,菌落形態(tài)、生化反應、抗血清凝集藥敏,,,,步驟與方法,革蘭氏染色志賀菌與沙門菌：急性腹瀉患者的糞便標本劃線接種于SS平板和MAC平板。慢性腹瀉患者志賀菌或攜帶者應接種GN增菌液，沙門菌接種亞硒酸鹽增菌液，再轉(zhuǎn)種SS平板與MAC平板，觀察小的、透明或半透明、無色或淺黃色的可以菌落生長，有時SS平板可見中心黑色菌落（H2S）。挑選三個可疑菌落分別接種三支KIA、MIU培養(yǎng)基，觀察

21、結(jié)果。挑取菌落進行革蘭氏染色，觀察細菌形態(tài)、排列。采用傷寒沙門菌診斷血清進行血清學鑒定。,步驟與方法,生化反應鑒定第2日觀察平板上有無可疑菌落，用接種針于上述平板中挑取單個可疑菌落（無色、半透明、光滑、較?。?—3個，分別接種至2—3管雙糖培養(yǎng)液內(nèi)，置37℃培養(yǎng)18—24h。第3日觀察細菌生長情況，根據(jù)表10—2初步鑒定細菌種類，然后取雙糖培養(yǎng)液上 的菌落進行系列生化鑒定。 表 不同腸道細菌在雙糖培養(yǎng)液培養(yǎng)結(jié)果（教學實驗

22、模擬標本的結(jié)果） 序號 上層（乳糖） 下層（葡萄糖） 動力 可能結(jié)果 1 + + 有 大腸埃希菌 2 — + 有 傷寒沙門菌 3 — +

23、 無 痢疾志賀菌,步驟與方法,血清學最終鑒定根據(jù)雙糖培養(yǎng)液及系列生化反應結(jié)果判斷，最后利用血清學實驗對細菌進行最后的確定。 如果初步鑒定結(jié)果為沙門菌屬，則取雙糖培養(yǎng)液斜面上菌苔與沙門菌多價“O”（A-F組）診斷血清作玻片凝集實驗，如凝集即為沙門菌屬，然后分別與A-F組的單價“O”診斷血清作玻片凝集實驗定組，最后以H因子診斷血清作玻片凝集實驗以定型（種），必要時可用因子診斷血清定型。 如果根據(jù)

24、雙糖培養(yǎng)液及系列生化反應結(jié)果判斷，初步鑒定結(jié)果為志賀菌屬，則取菌苔與志賀菌屬多價診斷血清作玻片凝集實驗以定組，必要時可用因子診斷血清定種或型。,步驟與方法,若為較典型的沙門菌生化反應，但與A-F組多價“O”診斷血清又不發(fā)生凝集反應，應考慮可能為有VI抗原的沙門菌，可將菌制成懸液以100℃加熱30分鐘以除去VI抗原后，再做血清學鑒定。如為較典型的志賀菌生化反應又不與其多價診斷血清發(fā)生凝集，則可用同樣方法加熱100℃1小時以破壞其K抗原，

25、再做玻片凝集反應鑒定之。在細菌的血清鑒定中，最常使用的方法是凝集反應，其基本原理是細菌為顆粒性抗原，當與相應的抗體混合時，在一定濃度的電解質(zhì)條件下，可出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。,步驟與方法,取一潔凈載玻片，用記號筆劃兩個1—1.5cm的圓圈。 取1：5或1：10診斷血清一接種環(huán)置于玻片左側(cè)圈內(nèi)，在右側(cè)圈內(nèi)放一接種環(huán)0.9%氯化鈉作為對照。如天氣炎熱，環(huán)境溫度高，則應適當多取血清及0.9%氯化鈉，以防試劑短時間內(nèi)干涸，影響結(jié)果的觀察。

26、用接種環(huán)取待鑒定的新鮮細菌少許，分別研磨乳化于診斷血清及0.9%氯化鈉內(nèi)使之均勻混合。旋轉(zhuǎn)搖動玻片數(shù)次，1—3分鐘后觀察結(jié)果。 按上述操作方法，依次分別做A-E多價血清定屬，特異性O因子血清定群，H因子血清定型（或種）。,結(jié)果,陰性：對照側(cè)及實驗側(cè)均勻混濁不出現(xiàn)凝集。 陽性：鹽水對照側(cè)呈現(xiàn)均勻混濁，實驗側(cè)明顯凝集。 自凝：對照側(cè)及實驗側(cè)均出現(xiàn)凝集。,步驟與方法,取一潔凈載玻片，用記號筆劃兩個1—1.5cm的圓圈。 取1：5或1

27、：10診斷血清一接種環(huán)置于玻片左側(cè)圈內(nèi)，在右側(cè)圈內(nèi)放一接種環(huán)0.9%氯化鈉作為對照。如天氣炎熱，環(huán)境溫度高，則應適當多取血清及0.9%氯化鈉，以防試劑短時間內(nèi)干涸，影響結(jié)果的觀察。 用接種環(huán)取待鑒定的新鮮細菌少許，分別研磨乳化于診斷血清及0.9%氯化鈉內(nèi)使之均勻混合。旋轉(zhuǎn)搖動玻片數(shù)次，1—3分鐘后觀察結(jié)果。 按上述操作方法，依次分別做A-E多價血清定屬，特異性O因子血清定群，H因子血清定型（或種）見p119。,注意事項,在細菌的血清

28、鑒定中，最常使用的方法是凝集反應，其基本原理是細菌為顆粒性抗原，當與相應的抗體混合時，在一定濃度的電解質(zhì)條件下，可出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。 玻片法凝集實驗是用診斷血清在玻片上與待測細菌相混合，在電解質(zhì) 存在下，若出現(xiàn)肉眼可見的凝集小塊即為陽性，表示該菌為所用抗體的相應細菌。此法是一種定性實驗，方法簡便快速，特異性強?？捎糜阼b定菌種及菌型。用于鑒定細菌的診斷血清有以下幾種： 多價診斷血清：即混合診斷血清。該血清含