降酚菌分離、降酚基因定位及大腸桿菌表達(dá)的研究.pdf

1、本文從焦化廢水處理廠的活性污泥中篩選高效降酚菌。選擇降酚效果最好的菌株進(jìn)行基因定位，提取其降解質(zhì)粒將其轉(zhuǎn)入大腸桿菌進(jìn)行表達(dá)。取得較好的研究結(jié)果。 具體如下： 1．取活性污泥進(jìn)行馴化培養(yǎng)，分離到5株有效菌株，通過 4-氨基安替比林直接分光光度法分析比較這5株菌降酚效果，確定其中降酚效果最好的H菌為研究對(duì)象。 2．對(duì)高效降酚菌H株進(jìn)行質(zhì)粒提取，結(jié)果菌具有3個(gè)質(zhì)粒，且質(zhì)粒片段較大最大的超過10kb，最小的2kb左

2、右。 3．對(duì)H菌進(jìn)行降酚基因的定位分析。通過SDS和原生質(zhì)體再生法分別對(duì)H菌進(jìn)行質(zhì)粒消除，結(jié)果發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒去除的菌株降酚能力也隨之消失。所以初步將H菌的降酚基因定位在質(zhì)粒上。 4．提取H菌的質(zhì)粒將其轉(zhuǎn)入大腸桿菌進(jìn)行表達(dá)，獲得了轉(zhuǎn)化子。 5．對(duì)轉(zhuǎn)化子進(jìn)行降酚效果測(cè)試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化子獲得了較好的降酚效果12h可達(dá)77.34％，但轉(zhuǎn)化子的降解速率較小，這可能與轉(zhuǎn)化子所含的質(zhì)粒拷貝數(shù)有關(guān)。并證明轉(zhuǎn)化子內(nèi)含有與H菌株相同