人瘦蛋白基因在大腸桿菌中表達(dá)的研究.pdf

1、瘦蛋白是肥胖基因在脂肪組織中表達(dá)的產(chǎn)物，是反映體內(nèi)脂肪組成及體內(nèi)脂肪含量和調(diào)節(jié)體重的重要信號(hào)因子。 本研究參考相關(guān)文獻(xiàn)設(shè)計(jì)引物，經(jīng)68℃退火及30輪循環(huán)的PCR程序后克隆了位于質(zhì)粒載體上的瘦蛋白基因約460bp的片段，將該片段從瓊脂糖凝膠中回收，克隆在 pMD18-T測(cè)序載體中進(jìn)行序列測(cè)定。 經(jīng)測(cè)序鑒定正確后，直接對(duì)重組的 pMD18-T-OB測(cè)序質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切，并回收約 460bp的瘦蛋白基因片段，然后把回收產(chǎn)物與同樣

2、經(jīng)雙酶切的pET-28a(+)表達(dá)載體進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞后，挑選在抗性平板上生長(zhǎng)的菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)并提取質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定，從而最終獲得重組成功的表達(dá)質(zhì)粒。 用構(gòu)建的pET-28a(+)-OB重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH<,5a>及BL21(DE3)菌株，進(jìn)行不同濃度IPTG、在不同時(shí)間下的誘導(dǎo)表達(dá)，然后對(duì)菌體蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分析，鑒定重組基因是否得到表達(dá)。結(jié)果表明，瘦蛋白在BL21(DE3)菌株中